人永生化胰腺星形细胞系的构建及其功能的验证

目的构建人永生化胰腺星形细胞(PSCs)系并探讨其生物学功能。方法采用outgrowth方法提取人原代胰腺星形细胞(hPSCs),慢病毒感染方法导入SV40LT基因和hTERT基因,嘌呤霉素筛选稳定高表达两个基因的细胞(im PSCs),qRT-PCR和Western bolt方法检测表达水平;CCK8法、核型分析、免疫荧光、体内成瘤实验检测im PSCs生长曲线,染色体数目,胶原基质蛋白表达和有无恶性表型转化;共培养方法、CCK8法、细胞划痕、迁移侵袭方法检测imPSCs促瘤作用。结果hPSCs呈多角形和梭形,慢病毒感染的im PSCs,显微镜下有亮绿色荧光;im PSCs细胞高表达SV40LT基因和hTERT基因;im PSCs生长曲线呈典型的“S”型,染色体数目增多,体内不能成瘤,表达α-SMA、Collagen I、Fibronectin,具有PSCs的生物学功能和特点;其与胰腺癌细胞共培养后,明显促进肿瘤生长,与人原代PSCs功能相当。结论采用慢病毒转染SV40LT基因和hTERT基因可成功构建人胰腺星形细胞永生化细胞系,为胰腺星形细胞本身及胰腺癌微环境相关研究提供实验材料和模型。