黑曲霉与泡盛曲霉固态共发酵麦麸的工艺优化

为提高黑曲霉与泡盛曲霉固态共发酵麦麸释放酚类活性物质的能力,以培养基总酚含量为评价发酵效果的指标,应用Plackett-Burman实验设计与响应面分析法优化共发酵条件,通过光吸收法测定酚类产物的DPPH自由基清除率及总还原能力。实验结果表明,黑曲霉与泡盛曲霉固态共发酵麦麸的最佳工艺参数为:麦麸10.0 g、(NH_(4))_(2)SO_(4)含量17.0 mg/g麦麸、KH_(2)PO_(4)含量1.8 mg/g麦麸、含水量79.05%、黑曲霉与泡盛曲霉接种比例1∶2、接种量为1.1 mL(约1×10^(7)个孢子/mL)、发酵温度29℃、发酵时间6 d。此条件下,发酵产物总酚含量达到2498.34μg/g,比优化前提高了37.32%。发酵产物的DPPH自由基清除率、总还原力较优化前亦显著提高(P<0.05)。该工艺优化既提高麦麸释放酚类含量,又增强了产物的抗氧化能力,为麦麸的充分利用提供了实验依据。

四君子汤治疗酒精性肝损伤的效果及其机制

目的探讨四君子汤治疗酒精性肝损伤的效果及其机制。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组(A组)、酒精模型组(B组)、四君子汤低剂量组(C组)及四君子汤高剂量组(D组),B~D组小鼠每天灌胃体积分数0.56的乙醇溶液(6 g/kg),A组小鼠每天灌胃等剂量的生理盐水;同时C、D组小鼠再分别每天灌胃5、10 g/kg的四君子汤,每5 d测1次小鼠体质量,实验持续18 d。灌胃结束后,采集小鼠新鲜粪便进行16S rDNA基因测序分析小鼠肠道菌群的变化;麻醉后,眼眦取血,收集血清进行肠道通透性检测;收集小鼠血液和肝脏、脾脏组织样本,测定各组小鼠的肝、脾指数以及血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(T-BIL)、碱性磷酸酶(ALP)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的含量,利用苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察各组小鼠肝、脾组织形态学变化。结果D组与B组相比,小鼠体质量及肝指数、脾指数差异有显著性(t=3.53~4.41,P<0.05),血清中ALP、T-BIL、TG水平显著降低(t=3.51~5.60,P<0.05);C、D组与B组相比,小鼠血清中ALT、AST、TC水平显著下降(t=2.19~7.62,P<0.05)。病理结果显示C、D组与B组比较,肝组织中肝索形态恢复正常,肝脏脂肪蓄积减轻;脾组织中红髓白髓分界清晰。肠道通透性结果显示,D组与B组比较,肠道通透性显著降低(t=3.19,P<0.05);肠道菌群检测结果显示,C、D组较B组,小鼠肠道菌群多样性增加,Dubosiella、Bifidobacterium、Allobaculum等有益菌含量增多,Prevotellaceae_UCG-001、Alloprevotella等致病菌含量降低。结论四君子汤可有效改善酒精诱导的小鼠肝损伤,其机制可能是通过调节肠道菌群变化实现的。

口腔溃疡双层膜的制备和质量控制

目的:制备以白芨胶为基质的口腔溃疡双层膜。方法:以高效液相色谱法测定达克罗宁的含量,其色谱条件为ODS柱(4.6 mm×150mm,15cm)。流动相:乙腈∶0.015 mol/L KH2PO4溶液(用H3PO4调至pH 3.0)=55∶45。检测波长:280nm。结果:双层膜的制备工艺和含量测定符合制剂要求。结论:该制备工艺可作为工业化生产的参考依据,其含量测定方法可靠,稳定,安全性高。

基于环介导等温扩增技术的巴戟天检测方法的建立

目的建立一种可快速检测中药巴戟天的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法针对巴戟天二级内部转录空间(ITS2)序列设计LAMP特异引物组,提取DNA后建立基于LAMP技术鉴别巴戟天的目视和实时定量检测方法,同时评估该方法的特异性、灵敏度及其在实践中的应用情况。结果该检测方法具有良好的特异性,最适反应温度为63℃,灵敏度约为0.10μg/L,比常规聚合酶链式反应(PCR)方法约高10倍。经验证可成功从7种近缘物种中检测出巴戟天。结论巴戟天LAMP检测是一种简便、客观、灵敏、快速的方法,值得进一步推广应用。

金属硫蛋白1M通过调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/上皮-间充质转化抑制三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的观察金属硫蛋白1M(MT1M)在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中的表达,探讨其对TNBC细胞迁移、侵袭的影响及机制。方法利用Ualcan和Kaplan-Meier Plotter在线网站分析MT1M在TNBC和正常乳腺组织中的表达及MT1M表达水平与TNBC患者预后的关系。在TNBC细胞MDA-MB-231、BT-549中转染MT1M过表达质粒为MT1M过表达组,转染空载质粒为对照组。利用蛋白质印迹法(Western blot)验证转染后两组细胞中MT1M蛋白水平;通过划痕实验以及Transwell小室侵袭实验检测两组细胞的迁移和侵袭能力;利用Western blot检测两组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B蛋白(Akt)以及磷酸化的蛋白激酶B蛋白(p-Akt)水平,两组间比较采用t检验。结果网站数据分析显示MT1M mRNA水平在TNBC中异常低表达,其异常低表达的患者预后也较差。MT1M过表达组MDA-MB-231、BT-549细胞中MT1M蛋白表达(11.08±1.90、9.00±0.69)明显高于对照组(1.35±0.52、1.41±0.43),差异有统计学意义(t=8.569、16.220,P<0.05)。划痕实验结果显示MT1M过表达组MDA-MB-231细胞划痕愈合率[12 h(25.46±10.31)%,24 h(44.55±23.65)%]均明显低于对照组[12 h(33.07±9.28)%,24 h(60.68±21.89)%],差异有统计学意义(t=4.426、8.202,P<0.05);MT1M过表达组BT-549细胞划痕愈合率[24 h(30.40±11.52)%,48 h(64.01±7.28)%]均明显低于对照组[24 h(57.21±11.98)%,48 h(98.99±0.29)%],差异有统计学意义(t=6.780、8.660,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示MT1M过表达组MDA-MB-231、BT-549细胞穿过小室数目[(141.67±1.53)、(173.00±11.27)个]明显低于对照组[(339.67±61.86)、(376.00±19.00)个],差异有统计学意义(t=5.678、17.390,P<0.05)。MT1M过表达组MDA-MB-231、BT-549细胞中E-cadherin蛋白表达(4.80±0.65、4.81±1.20)明显高于对照组(1.29±0.26、1.41±0.68),差异有统计学意义(t=8.745、4.279,P<0.05)。而Vimentin、PI3K、Akt以及p-Akt蛋白表达分别为1.25±0.32、1.11±0.13;1.40±0.52、1.52±0.48;1.05±0.07、1.04±0.05;1.35±0.51、1.06±0.07,明显低于对照组(5.16±1.10、6.35±0.13;4.52±0.50、3.37±0.55;1.90±0.18、1.98±0.19;4.55±0.68、3.10±0.59),差异有统计学意义(t=5.932、48.250;7.525、4.420;7.614、8.466;6.524、5.961,P<0.05)。结论MT1M在三阴性乳腺癌细胞中呈低表达;MT1M可能通过调控PI3K-Akt/上皮-间充质转化影响三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭。

Wiskoot-Aldrich综合征蛋白家族成员3对乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭及伪足形成的影响

目的观察Wiskoot-Aldrich综合征蛋白家族成员3(WASF3)对乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭及伪足形成的影响。方法利用免疫蛋白印迹(Western blot)法检测乳腺癌细胞(BT-549、HCC-1937、BT-474、MDA-MB-231、MCF-7、T-47D)及乳腺正常细胞(MCF-10A)中WASF3蛋白的表达量;获取WASF3互补脱氧核糖核苷酸(cDNA),构建过表达及干扰的重组载体SB-16-WASF3和pHB-U6-MCS-PGK-PURO-shWASF3(pHB-shWASF3)。重组干扰质粒经慢病毒包装,感染MDA-MB-231细胞,经抗性筛选建立WASF3基因静默的稳转细胞株。经实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot法验证WASF3的静默及过表达效率;通过克隆形成实验和迁移侵袭实验分别验证细胞克隆形成能力和迁移侵袭能力的变化;过表达载体SB-16-WASF3转染MDA-MB-231细胞,经WASF3抗体和鬼笔环肽(Phalloidin)双染色,观察WASF3过表达对细胞伪足形成的影响。采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用LSD-t检验,两两比较采用t检验。结果Western blot结果显示,不同乳腺癌细胞WASF3蛋白的相对表达量分别为1.07±0.00、0.54±0.11、0.60±0.14、1.36±0.02、0.65±0.05和0.79±0.18,均高于乳腺正常细胞(0.38±0.01,t=134.864、21.289、24.883、55.397、8.892、37.363,P值均<0.05),差异均有统计学意义;且MDA-MB-231和BT-549细胞的表达量相对较高。细胞增殖实验显示WASF3静默组(pHB-shWASF3-1)在24、48、72、96、120 h的增值率均低于对照组pHB-shNegetive Control组(pHB-shNC)及空白对照(Control)(0.92±0.06比1.18±0.05比1.14±0.03、1.42±0.05比1.90±0.12比1.77±0.14、2.02±0.03比2.83±0.08比2.70±0.10、2.78±0.02比3.78±0.03比3.70±0.17、3.22±0.04比4.10±0.12比4.02±0.10,t_(24 h)=7.983、t_(48 h)=9.024、t_(72 h)=23.491、t_(96 h)=66.348、t120 h=17.114;t_(24 h)=8.453、t_(48 h)=5.843、t_(72 h)=15.813、t_(96 h)=13.479、t120 h=19.142,P值均<0.01),差异均有统计学意义,但后两组间差异无统计学意义。pHB-shWASF3-1组克隆形成率[(25.50±2.00)%]低于pHB-shNC组及Control组[(62.33±2.57)%、(64.17±3.21)%,F=204.754]。迁移实验结果显示pHB-shWASF3-1组穿过小室的细胞数低于pHB-shNC组和Control组[(212.33±14.01)个比(357.33±8.02)个比(364.33±9.07)个,F=193.200,P<0.01],差异均有统计学意义,但后两组间差异无统计学意义。侵袭实验结果显示pHB-shWASF3-1组穿过小室的细胞数低于pHB-shNC组和Control组[(151.33±5.51)个比(212.33±14.01)个比(215.00±6.08)个,F=44.269,P值均<0.01],差异均有统计学意义,但后两组间的差异无统计学意义。免疫荧光结果可见,WASF3过表达组的红色信号(WASF3染色)明显高于对照组,绿染的肌动蛋白(F-actin)在细胞边缘明显聚集,细胞伪足伸展更明显。结论WASF3在乳腺癌细胞中呈高表达,静默WASF3后可抑制乳腺癌细胞的增殖、克隆形成及迁移侵袭能力;过表达WASF3后可促进乳腺癌细胞F-action蛋白的堆积,促进细胞片状伪足的形成。

F框/WD-40域蛋白11对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移的影响

视频导读乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,迄今为止,探索三阴性乳腺癌(TNBC)的靶向治疗始终是医学研究的热点。TNBC是一种特殊分子亚型的乳腺癌类型,因其侵袭性强、转移复发风险高且缺乏有效治疗靶点,导致患者预后差,严重威胁女性健康,是临床亟待解决的治疗难题。本文研究FBXW11对TNBC生物学功能活性的影响,将进一步探讨FBXW11影响TNBC功能潜在作用机制,以便为TNBC的靶向治疗提供新的理论依据。