人NFE2基因上游增强子lncRNA调控NFE2基因转录和K562细胞增殖

目的转录因子NFE2的异常表达在许多骨髓增殖性肿瘤患者中被观察到,然而造成这种异常的转录调控机制尚不明确,本研究旨在探究参与NFE2转录调控的元件和分子机制。方法首先通过公共数据库中Ch IP-seq数据和ATAC-seq数据预测NFE2基因的潜在增强子元件,并通过双荧光素酶报告实验进行体外验证。随后,通过PRO-seq和GRO-seq数据结合RACE技术克隆这些增强子RNA转录本,经在线编码潜能预测工具分析认为其为lnc RNA,通过RT-q PCR检测该lnc RNA在不同白血病细胞系中和这些细胞诱导分化前后的表达变化及其亚细胞定位。最后,通过慢病毒系统在K562细胞中过表达和敲降该lnc RNA以探究其功能。结果鉴定出调控NFE2转录的3个增强子元件,分别位于NFE2转录起始位点-3.6k,-6.2k和+6.3k区域,这些元件插入NFE2启动子上游均能增强下游萤火虫荧光素酶的表达。克隆出-3.6k增强子负链方向的转录本,将其鉴定为-3.6k-lnc RNA。本研究发现,该lnc RNA在K562、U937和HL-60这3种白血病细胞系中均有一定程度的表达,且均定位于细胞核内。当该lnc RNA在K562细胞中过表达,NFE2水平随之提高,细胞增殖和细胞迁移能力受到抑制;当其被敲降时,NFE2水平相应降低而K562细胞增殖能力随之升高。结论本文鉴定了调控人NFE2基因转录的3个增强子元件和一条增强子lnc RNA转录本,并验证了该lnc RNA对NFE2转录的正调控作用以及对K562细胞增殖能力具有抑制作用。

敲除kdm4ab对斑马鱼低温耐受能力的影响

为深入研究kdm4ab基因在鱼类低温胁迫下的作用,以斑马鱼(Danio rerio)为模式生物,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建kdm4ab^(-/-)斑马鱼品系。RT-qPCR结果显示,与WT斑马鱼相比,kdm4ab^(-/-)斑马鱼的kdm4ab mRNA表达量显著下调(P<0.000 1),而kdm4c的mRNA表达量补偿性增加(P<0.05)。斑马鱼行为轨迹跟踪系统检测发现,18℃低温下kdm4ab^(-/-)斑马鱼幼鱼的最大加速度显著降低(P<0.05)。8℃低温下kdm4ab^(-/-)斑马鱼的半数致死时间(LT50)显著低于WT斑马鱼(P<0.000 1);低温处理后kdm4ab^(-/-)斑马鱼的γH2A.X表达量明显增加,ROS水平升高,即DNA损伤增强。研究表明,敲除kdm4ab基因降低了低温下斑马鱼的耐受能力及运动能力,这为鱼类的低温耐受机制研究提供新思路。

三种抗氧化剂对斑马鱼卵母细胞冷冻保存效果比较

为研究抗氧化剂对斑马鱼卵母细胞冷冻保存效果的影响,在基础冷冻保护液配方中分别添加褪黑素、谷胱甘肽和甜菜碱等3种抗氧化剂进行了冷冻保存试验,比较冷冻后卵母细胞的活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、凋亡基因表达水平和存活率。试验结果显示:经过筛选,3种抗氧化剂的最优添加浓度分别为褪黑素1×10^(-3) mol/L、谷胱甘肽5×10^(-4) mol/L、甜菜碱1×10^(-3) mol/L。与对照组相比,添加最优浓度抗氧化剂的3个试验组(褪黑素组、谷胱甘肽组和甜菜碱组)的ROS含量均显著降低,ATP含量和SDH活性均显著提高,褪黑素组和甜菜碱组的T-AOC水平显著提高(P<0.05);褪黑素组卵母细胞的caspase3、caspase9和bax基因表达量显著降低,bcl-2基因表达量则显著升高(P<0.05);谷胱甘肽组卵母细胞的caspase3基因表达量显著下降,bcl-2基因表达量显著上升(P<0.05);甜菜碱组卵母细胞的caspase9和bax基因表达量显著降低(P<0.05)。复苏后的卵母细胞在体外培育120 min,褪黑素组、谷胱甘肽组、甜菜碱组卵母细胞的存活率分别比对照组提高10.13%、14.20%和15.99%;冷冻保存1、7、30、60、90 d,3个试验组卵母细胞的存活率均显著高于对照组(P<0.05);冷冻保存90 d,褪黑素组、谷胱甘肽组、甜菜碱组的存活率分别提高了9.05%、7.34%、6.68%。试验结果说明,在斑马鱼卵母细胞冷冻保存过程中添加1×10^(-3) mol/L褪黑素或5×10^(-4) mol/L谷胱甘肽或1×10^(-3) mol/L甜菜碱,均能够增强冷冻保存后卵母细胞的线粒体功能,降低细胞氧化应激水平,减少细胞凋亡,从而提高斑马鱼卵母细胞冷冻效率。

hdac8基因敲除对斑马鱼运动能力的影响

为研究鱼类hdac8的生物学功能,以斑马鱼(Danio rerio)作为模式生物,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对hdac8基因的第3个外显子设计Cas9靶位点,并制备gRNA。将gRNA与Cas9蛋白显微注射至一细胞期的斑马鱼胚胎中。经过T7E1核酸内切酶酶切、测序和序列比对后确定hdac8敲除成功,进一步获得F 2代缺失41个碱基对的hdac8的纯合突变体斑马鱼。RT-qPCR结果显示:与WT斑马鱼相比,hdac8^(-/-)斑马鱼的hdac8 mRNA表达量显著下调(P<0.0001);而hdac1的mRNA的表达量补偿性增加(P<0.05),hdac3的mRNA表达水平无显著性差异。Western Blot显示hdac8-/-斑马鱼全鱼和肌肉组织中H3K27ac、H3K9me3、H3K4me3和H3K4me1的表达水平都没有发生显著变化。斑马鱼行为轨迹跟踪系统检测发现,与WT斑马鱼幼鱼相比,hdac8^(-/-)斑马鱼幼鱼的最大加速度无明显差异,但运动总距离、平均速度、活动性均显著性降低(P<0.0001),说明敲除hdac8基因会对斑马鱼幼鱼的运动能力造成影响。

敲除hdac8基因对斑马鱼低温耐受能力的影响

为探究敲除组蛋白去乙酰化酶8基因(histone deacetylase 8,hdac8)对斑马鱼(Danio rerio)低温耐受能力的影响,采用组织学、生理和生化等方法,研究了低温(8℃)短期胁迫下hdac8基因敲除(hdac8^(-/-))斑马鱼和野生型(WT)斑马鱼的组织损伤、氧化应激相关指标及其凋亡相关基因表达的变化。结果表明:低温胁迫下,hdac8^(-/-)斑马鱼的半数致死时间(LT50)明显缩短,hdac8^(-/-)斑马鱼的LT50为14.5 h,WT斑马鱼的LT50为21.5 h;HE染色显示,低温胁迫下,hdac8^(-/-)斑马鱼鳃丝、肝脏和骨骼肌相较于WT斑马鱼损伤更加严重;28℃下,WT和hdac8^(-/-)斑马鱼的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平无显著性变化(P>0.05),而hdac8^(-/-)斑马鱼的ATP水平则显著降低(P<0.05);低温胁迫下,hdac8^(-/-)斑马鱼的ROS和MDA水平显著高于WT斑马鱼(P<0.05),而ATP水平则显著低于WT斑马鱼(P<0.05);RT-qPCR显示,28℃下,hdac8^(-/-)斑马鱼caspase3基因表达显著上调(P<0.05),其他抗氧化与凋亡相关基因无显著性变化(P>0.05);低温胁迫下,WT和hdac8^(-/-)斑马鱼sod、cat、caspase3、caspase9和bax基因表达水平显著上调(P<0.05),且hdac8^(-/-)斑马鱼的这5种基因表达水平均显著高于WT斑马鱼(P<0.05)。研究表明,敲除hdac8基因显著降低了斑马鱼的低温耐受能力,并促进了低温氧化应激损伤和细胞凋亡。

转录调节蛋白TP53基因敲除增加斑马鱼耐寒能力与运动行为的研究

转录调节蛋白TP 53(Tumor protein 53)调控多种重要生物学过程,包括细胞周期、DNA损伤、修复和细胞凋亡等.在各种应激条件下tp53会被激活并发挥与应激相关的调控作用,但tp53在鱼类低温应激下的作用尚不明了.本文首先检测在低温应激条件下斑马鱼(Danio rerio)中tp53的表达变化,然后利用tp53^(-/-)斑马鱼敲除模型研究了敲除tp53对斑马鱼低温耐受能力和运动的影响.RT-qPCR结果显示:在8℃低温条件下野生型斑马鱼全鱼和鳃组织中tp53的mRNA水平显著升高.低温耐受实验显示:8℃低温下tp53^(-/-)斑马鱼的耐受能力增强,半数致死时间(lethal time to 50%mortality, LT50)显著高于WT(Wild type)对照组(P<0.000 1).运动行为学实验发现:与28℃相比,18℃低温下WT和tp53^(-/-)斑马鱼的移动距离、平均速度和活跃度均显著降低(P<0.000 1);同时发现在28℃和18℃条件下,tp53^(-/-)斑马鱼的移动距离、平均速度和活跃度均显著高于WT组.研究结果说明tp53参与斑马鱼的低温响应过程,敲除tp53后斑马鱼的耐寒能力与运动能力增强.本文为鱼类的低温耐受机制和运动行为学研究提供了新思路.

海洋生物废弃物核酸提取工艺研究(不同萃取液对提取率的影响)

应用多种萃取液体系 ,从海洋生物废弃物鱿鱼肝脏中提取核酸 ,针对传统有机溶剂提取工艺进行改进。改进后的工艺与原工艺比较 ,核酸提取量提高 30 %～ 6 0 % ,整体工艺得到简化 ,而且避免了有机物残留 ,显示出良好的应用前景。

重组人肝细胞生长因子β链工程菌的高密度发酵

目的 实现重组人肝细胞生长因子 β链 (rhHGFβ)工程菌的高密度高表达发酵。 方法 首先在摇瓶中进行了培养条件的摸索 ,确定了该工程菌的培养条件、诱导起始时间和诱导时间 ,然后用 15L自控发酵罐进行分批补料培养 ,发酵中分阶段限制性流加氮、碳源 ,保持溶氧在 30 %以上。结果 菌体发酵密度达到 39g/L(湿菌重 ) ,达到并超过了重组蛋白在摇瓶中的表达水平 ,重组蛋白的表达占菌体总蛋白的 30 %左右。结论 本研究为rhHGFβ进一步下游纯化及功能研究奠定了基础。

人血小板因子4在大肠杆菌中的高效表达及活性研究

为了提高人血小板因子 4(humanplateletfactor 4,hPF4)的表达 ,在PT7 7 hPF4表达质粒的基础上 ,采用PCR定位突变技术 ,改造人血小板因子 4(hPF4)cDNA基因片段 ,去除cDNA 3′端非翻译区AT富含序列 ,改用大肠杆菌强串联终止密码子TAATAA ,成功构建了高效表达质粒pBV2 2 0 hPF4。摇瓶发酵重组人血小板因子 4的产量达 1 60mg L较原表达质粒PT7 7 hPF4表达量提高了近 80倍。经包涵体的洗涤、变性、复性后 ,采用鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制实验测定复性后rhPF4的生物学活性 ,结果显示 :rhPF4具有抑制血管生成活性。

RNA干扰阻断COX-2基因表达对食管鳞状上皮癌EC109细胞株增生和凋亡的影响

目的研究COX-2基因与食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的关系,观察阿司匹林对食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的影响,探索基因治疗和药物抑制肿瘤的机制。方法采用RNA干扰的方法,用荧光显微镜观察RNA干扰的转染效率,用Westernblot方法分析RNA干扰的效果,用噻唑兰法定量检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞增生的影响,用流式细胞仪检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞凋亡的影响。结果Westernblot方法证实,RNA干扰后EC109细胞COX-2表达下降至对照组的40%。MTT法检测结果显示,用COX-2基因干扰后,EC109细胞生长抑制作用增强,COX-2基因干扰和阿司匹林联合作用后,肿瘤细胞的生长抑制作用进一步增强。流式细胞仪检测结果显示,母本细胞组和RNA干扰的阴性对照组凋亡率较低,COX-2基因干扰后,促凋亡作用增加。COX-2基因干扰后再给予阿司匹林,促凋亡作用进一步增加。结论RNA干扰特异性抑制细胞COX-2蛋白的表达后,抑制食管鳞癌细胞株EC109的生长增生,增强凋亡作用,阿司匹林和RNA干扰对肿瘤细胞的增生和凋亡可产生协同效果。

改良稀碱法从鱿鱼肝脏中提取核酸

用改良稀碱法对从鱿鱼肝脏中提取核酸的工艺进行了摸索。结果表明 :2 0g/L液破膜、调节 pH =6、1%C液沉淀蛋白为改良稀碱法提取核酸的最佳条件。该方法成本低 ,提取效果好 ,具有一定的实用价值。

HSP90抑制剂根赤壳菌素对斑马鱼胚胎发育的影响

为研究热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在斑马鱼(Danio rerio)胚胎发育中的作用,本实验采用2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L的HSP90抑制剂根赤壳菌素(radicicol)对斑马鱼发育期胚胎进行处理,监测斑马鱼胚胎不同发育时期两个HSP90功能抑制标志基因BAG3(BCL2-associated athanogene3)和HSPB1(heat shock protein beta-1)的mRNA的表达水平,并观察不同发育时期的胚胎发育状况。结果如下:(1)实时荧光定量PCR结果显示,BAG3和HSPB1 mRNA水平在根赤壳菌素处理胚胎12 hpf(hours post-fertilization,hpf)或24 hpf后显著增高,Western blot检测到5μmol/L根赤壳菌素处理胚胎24 hpf后HSP70表达上调,证明该实验条件下HSP90功能受到抑制;(2)根赤壳菌素处理后斑马鱼胚胎发育变缓,胚胎成活率统计显示:2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L根赤壳菌素处理24 hpf胚胎成活率分别是95%、77%、35%,成活率随根赤壳菌素浓度的增高而降低;(3)5μmol/L根赤壳菌素处理72 hpf可见部分个体色素沉积减少、心包膜增大、肌肉萎缩等发育畸形。研究结果证明HSP90在斑马鱼胚胎发育过程中发挥重要的作用,根赤壳菌素在5μmol/L时已达到较佳抑制效果且成活率较高,而且胚胎发育出现了各种形态学变化,为后期研究HSP90调节斑马鱼胚胎发育奠定了基础。

人朊蛋白不同N-糖基化修饰突变体的构建及其在哺乳动物细胞中表达

构建并表达人朊蛋白N-糖基化修饰位点突变的真核表达载体,有助于进一步研究朊蛋白N-糖基化修饰的生物学功能。定点突变野生型人朊蛋白基因PRNP,将获得的突变体亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1中,并在人宫颈癌细胞株HeLa中瞬时表达各种朊蛋白糖基化修饰位点突变体,利用免疫印迹和糖苷酶消化等糖蛋白分析方法鉴定表达产物的糖基化形式。经Western blot鉴定,野生型和突变型朊蛋白表达产物出现不同形式的泳动特征,分别出现特异性糖基化修饰的多个条带,单糖基化修饰的两条条带和无糖基化修饰的一条条带。经PNGase F糖苷酶消化,野生型和糖基化单点突变型表达产物均能被糖苷酶消化,其分子量下移,去糖基化突变型表达产物的分子条带位置不变。通过突变野生型人朊蛋白基因PRNP的N-糖基化修饰位点,获得单糖基化修饰和去N-糖基化修饰的6种人朊蛋白突变体,并能够在HeLa细胞株中瞬时表达单糖基化修饰和去N-糖基化修饰朊蛋白,为进一步研究朊蛋白的相关功能建立良好基础。

低温胁迫诱导斑马鱼ZF4细胞ROS及MAPK相关蛋白表达的影响

为了研究鱼类低温下分子调控机制及其与活性氧(reactive oxygen species,ROS)之间的关系,本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维ZF4细胞进行不同程度的低温胁迫(18℃和10℃),监测其在不同低温胁迫时间下(1 d、3 d和5 d)ROS的变化以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路中蛋白的表达情况。结果显示:(1)DCFH-DA探针法表明在低温胁迫作用下,细胞内ROS含量增加。细胞内ROS上升水平与外界胁迫压力成正相关。低温处理3 d后,18℃和10℃的细胞,其ROS含量与对照组(28℃)相比分别显著升高到(1.23±0.04)倍(P<0.05)和(2.31±0.08)倍(P<0.05)。(2)Western Blot检测磷酸化的p38(p-p38)和磷酸化的JNK(p-JNK p54和p-JNK p46)的水平变化,结果显示低温胁迫可以使p38和JNK的活性增强,且均在10℃处理3 d达到最高水平。(3)进一步检测DNA断裂标记蛋白γH2A.X的表达水平,结果显示,无论在18℃还是10℃,其在第3天呈现高表达。本实验初步证实低温胁迫能够诱导斑马鱼细胞ROS的产生;通过对不同时间点的蛋白表达水平检测,发现p-JNK、p-p38和γH2A.X激活时间点与低温诱导ROS表达时间点相吻合。该研究为后期对斑马鱼细胞低温胁迫实验奠定基础,其中低温下处理3 d可以作为一个检测各个蛋白变化的关键时间点。

活性氧激活线粒体凋亡通路是亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的重要机制

目的探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,活性氧引起的线粒体膜电位丧失及凋亡作用的相关机制。方法用活性氧荧光探针DCFH-DA探测经亚硒酸钠诱导的NB4细胞内活性氧的含量。流式细胞术检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化。Western blot检测胞浆中细胞色素C含量的变化及细胞总蛋白中Bcl-xl、Bax和Bid的含量变化及切割行为。同时应用活性氧清除剂MnTmPy及活性氧激活剂BSO预处理细胞,观察Bid及凋亡的变化。结果活性氧清除剂MnTmPy可有效抑制亚硒酸钠诱导的NB4细胞凋亡、线粒体膜电位丧失及Bid的切割;而BSO可促进线粒体膜电位丧失。结论亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的可能机制是通过刺激细胞产生活性氧,一方面下调抗凋亡蛋白Bcl-xl,另一方面激活线粒体打孔蛋白Bax和Bid,损伤线粒体使膜电位降低,促使线粒体释放细胞色素C。

低温对斑马鱼ZF4细胞基因组DNA甲基化水平的影响

低温压力会导致鱼类生理功能失调、机体损伤甚至死亡,鱼类会产生各种适应性变化来应对低温压力,其中涉及的表观遗传学机制越来越受到重视。为了探讨鱼类低温应激压力下的表观遗传学调控机制,本研究对斑马鱼(Daniorerio)胚胎成纤维细胞ZF4进行短期低温胁迫(18℃处理3d、5d和10℃处理3d、5d)和长期低温胁迫(18℃处理30 d),然后用具有不同甲基化敏感性的同裂酶HpaⅡ和MspⅠ对细胞基因组DNA进行酶切以监测细胞基因组DNA甲基化水平变化。结果显示短期低温胁迫下ZF4细胞生长受到抑制甚至死亡,而经过长期低温胁迫的ZF4细胞对低温压力产生了一定适应性。并且低温胁迫下DNA甲基化水平呈现动态变化,短期低温培养细胞的基因组DNA甲基化水平明显增高,但是长期低温培养细胞的DNA甲基化水平反而下降。此外,研究发现抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)或者共济失调–毛细血管扩张突变蛋白(ataxia telangiectasia mutated,ATM)抑制剂KU-55933可以抑制18℃5 d低温处理后的ZF4细胞DNA甲基化水平的增高,说明活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生和ATM的激活介导了DNA甲基化水平的增高。本研究结果显示,短期低温刺激下ZF4细胞ROS的产生导致DNA损伤,激活DNA损伤修复机制,进而导致基因组DNA甲基化水平上升,该研究为后期斑马鱼低温胁迫分子机制的研究奠定基础。

敲除hdac11基因对斑马鱼脂代谢的影响

为揭示斑马鱼组蛋白去乙酰化酶11(histone deacetylase 11,HDAC11)在斑马鱼脂代谢中的作用,利用CRISPR/Cas9技术成功构建斑马鱼hdac11-/-模型,将受精5 d后(5 days post fertilization,5 dpf)的WT与hdac11-/-斑马鱼分别以正常饮食和高脂饮食2种方式饲喂至90 dpf,检测斑马鱼体重和体长,观察肝脏组织学切片并检测肝脏甘油三酯含量和脂代谢相关基因表达水平。结果显示,与WT相比,hdac11-/-斑马鱼体重、体长无显著性差异;幼鱼时期正常饮食下hdac11-/-斑马鱼全鱼甘油三酯含量显著降低(P<0.001);成鱼时期正常饮食和高脂饮食下hdac11-/-斑马鱼肝脏脂滴变小且肝脏甘油三酯含量均显著降低(P<0.05);肝脏中pnpla2、lipeb基因表达水平均显著升高,gpam基因表达水平均显著下降。结果表明,hdac11通过改变甘油三酯合成与分解的基因表达水平进而影响脂代谢调控,这为鱼类脂代谢过程中的表观调控机制提供了新的研究方向。

低温压力对ZF4细胞组蛋白修饰的影响

为探索低温压力对斑马鱼细胞组蛋白修饰的影响,建立并优化使用斑马鱼(Danio rerio)成纤维细胞ZF4进行染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation, ChIP)的条件。本研究分别优化了ChIP过程中裂解细胞所使用的NP-40浓度、超声破碎的时间,确定了最佳NP-40浓度为0.2%,超声时间为20 min。利用针对β-actin启动子区域的引物,通过常规PCR初步验证ChIP实验是否成功。琼脂糖凝胶电泳结果显示, IgG组常规PCR产物基本无条带,H3K27me3组条带较暗, H3K4me3和H3K27ac组有较亮条带,初步说明实验可靠。使用正常培养(28℃)与长期低温驯化(18℃, 30 d)的斑马鱼成纤维细胞ZF4作为实验材料,通过优化之后的ChIP技术进行实验。分别使用qPCR和ChIP-qPCR检测低温驯化对肿瘤坏死因子b(tumor necrosis factor b,tnfb)基因表达以及其启动子区域H3K4me3、H3K27ac、H3K27me3的影响。qPCR结果显示tnfb基因经过低温驯化后上调,而ChIP-qPCR结果显示,tnfb基因启动子区域的H3K4me3、H3K27ac富集度也出现升高, H3K27me3没有明显变化,提示低温压力可能通过影响tnfb基因启动子区域的H3K4me3、H3K27ac水平来调控tnfb基因的表达。本研究建立并优化的ChIP实验条件可以用来研究ZF4细胞组蛋白修饰变化,为下一步探索低温压力对斑马鱼细胞全基因组组蛋白修饰的影响奠定基础。

生物专业新生研讨课建设探索

新生研讨课是近年来在各大高校的教育改革中受到广泛好评的新兴教学模式,也已在许多高校中陆续实践展开。本文根据作者进行该类课程建设过程中的实践经验和体会,对该类课程的特点及其构建模式进行了探讨,包括班级组织、教学内容、教学方法等。教师和高校在实施课程建设时应充分利用该课程的特点和优势,以期实现更高效的教学目标。

敲除tp53对斑马鱼高温耐受能力和运动能力的影响

研究了敲除tp53基因对斑马鱼高温耐受能力和运动能力的影响。通过RT-qPCR、Western blot等技术发现高温下野生型的斑马鱼tp53表达上调,暗示tp53可能在高温下发挥作用,而敲除tp53基因的斑马鱼在高温下的存活时间降低。进一步研究发现,tp53-/-斑马鱼在高温下ROS水平升高(P<0.05),ATP水平降低(P<0.001),γH2A.X蛋白水平显著升高。通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色发现tp53-/-斑马鱼高温下肝脏组织充血更严重。Danio Vision斑马鱼行为轨迹分析显示34℃下tp53-/-斑马鱼的运动能力减弱。研究结果表明,tp53在高温下对斑马鱼的高温耐受能力和运动能力起正向调节作用,为斑马鱼高温耐受机制和运动行为学研究提供了新思路。