TLSF_(JM)对同种异体抗原诱导的小鼠杀伤性T细胞分化及效应功能的影响

本文以小鼠混合淋巴细胞反应为模型，研究了ＪＭ 急性Ｔ 淋巴细胞白血病细胞分泌的抑制因子（ ＴＬＳＦＪＭ）在体外对同种异体抗原诱导小鼠Ｔ 细胞增殖和杀伤性Ｔ 细胞分化的影响。结果表明：（１） ＴＬＳＦＪＭ 可明显抑制同种异体抗原刺激的Ｔ 细胞增殖， 且具有剂量依赖性；（２） ＴＬＳＦＪＭ 能有效地抑制同种异体抗原诱导的小鼠ＣＴＬ 分化；（３）ＴＬＳＦＪＭ 对杀伤相ＣＴＬ 的杀伤活性没有抑制作用。

分子鉴别诊断(MDD)技术在呼吸道病原体检测中的应用

目的:以靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)和液相芯片(xMAP)检测技术结合,建立常见呼吸道病原体的分子鉴别诊断(MDD)平台,对其可靠性进行评估,并用于临床样品的检测。方法:采集苏州大学附属儿童医院呼吸科住院病例呼吸道灌洗液样品22例和苏州大学附属第一医院呼吸内科门诊病例咽拭子样品20例,使用Tem-PCR技术对样品的核酸进行多重扩增,以液相芯片技术进行高通量的多重检测。结果:对已知样品的检测表明该平台具有高度的特异性和敏感性。对42例临床样品进行检测的结果显示,22例呼吸道灌洗液的阳性检出率为63.6%。呼吸道灌洗液阳性检出率高于门诊病例咽拭子样品的阳性检出率,RNA病原体(以病毒为主)的阳性率高于DNA病原体(以细菌为主)的阳性率。结论:建立了呼吸道病原体的MDD平台,具备了对呼吸道传染性疾病的高通量快速诊断能力。

TLSF_(JM)对Th1/Th2样细胞亚群比率的影响

目的 :探讨TLSFJM 对同种异体抗原活化的Th1/Th2样细胞亚群变化的影响。方法 :在混合淋巴细胞反应 (MLR)体系中加入TLSFJM 或IL 4 ,用细胞内免疫荧光染色结合流式细胞术分析TLSFJM 对Th1/Th2样细胞亚群比率的影响。结果 :在TLSFJM实验组中 ,活化淋巴母细胞分化为IFN γ+ 细胞的比率略有降低 (49.8%→ 4 3.1% ) ,IL 4 + 、IL 6 + 细胞的比率有明显降低 ,IL 4 + 细胞的比率由 75 .4 %降至 4 3.7% ,IL 6 + 细胞的比率由6 7.8%降至 5 2 .6 %。在未活化小淋巴细胞中 ,也观察到同样的趋势。结论 :TLSFJM 对Th1、Th2样细胞亚群都有抑制 ,但似乎主要作用于Th2样细胞亚群 。

液相芯片技术在核酸检测中的应用研究进展

随着人类基因组计划（HGP）的完成和数量巨大的遗传信息的获得．人们的兴趣转向了解个体之间基因的差异性以及这种差异如何影响不同个体对疾病的敏感性及对药物的反应性。在公共卫生领域，也需要对引起突发公共卫生事件如不明原因的传染病的病原进行快速筛查，这都需要对DNA样品进行快速、可靠、经济和高通量的检测。美国纳斯达克上市的Luminex公司研发的液相芯片技术（又称微球依赖的悬浮点阵技术．

不同活化系统对CD4^+T细胞凋亡诱导配体表达的影响

目的 :探讨不同活化系统对CD4 + T细胞凋亡诱导配体在细胞内和膜表面表达的影响 .方法 :分别以PMA、PHA、SEB和单向混合淋巴细胞反应 (MLR)刺激PBMC ,以免疫荧光染色结合三色流式细胞术分析比较刺激前后的CD4 + T细胞中 ,3种主要的凋亡诱导配体TRAIL、FasL和TNF α在细胞内和膜表面表达的变化 .结果 :①FasL在静止CD4 + T细胞表面的表达基本为阴性 ,PMA和PHA上调其表达 ;FasL在静止CD4 + T细胞内有一定程度表达 ,PMA、PHA和MLR下调其在胞内的表达 .②TRAIL在静止CD4 + T细胞表面几乎不表达 ,SEB微弱上调其表达 ;TRAIL在静止CD4 + T细胞胞内有低水平表达 ,SEB和MLR微弱上调其表达 ,PHA则下调其表达 .③TNF α在静止CD4 + T细胞表面几乎不表达 ,PMA和PHA对其表达有一定上调作用 ;TNF α静止CD4 + T细胞胞内有一定水平表达 ,SEB和MLR明显上调其表达 .结论 :FasL、TRAIL和TNF α都是Th细胞重要的效应分子 。

趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群的差异表达

目的 研究趋化性细胞因子受体在体外长期培养的人Tc1和Tc2细胞系中的表达。方法 将新鲜分离的PBMC在特定细胞因子及细胞因子抗体存在条件下 ,定向诱导为Ⅰ型和Ⅱ型T细胞系 ,用免疫荧光染色结合流式细胞术分析鉴定 ,并以膜表面及胞内三色流式细胞术检测趋化性细胞因子受体在不同T细胞亚群的表达。结果 ①在Ⅰ型和Ⅱ型T细胞整体水平上 ,CXCR4的表达水平接近 ,CXCR3和CCR5的表达在Ⅰ型T细胞明显高于Ⅱ型T细胞 ,CCR3在 2种T细胞系的表达水平均较低 ,但在Ⅱ型T细胞的表达略高于Ⅰ型T细胞 ;②趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群细胞的表达与上述结果类似 ,即CXCR的表达水平接近 ,CXCR3和CCR5的表达在Tc1高于Tc2 ,CCR3的表达水平较低 ,但在Tc2则略高于Tc1。

分子鉴别诊断领域的革命性技术——Tem-PCR

分子鉴别诊断由于其高效、快速的特点,在公共卫生领域和个体化医疗中将发挥越来越重要的作用。分子鉴别诊断需要敏感、特异、可靠的多重扩增技术作为支撑,靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)正是这样一项技术,能在一个反应体系中同时对多种靶基因高度敏感和特异的扩增,为分子鉴别诊断在应对公共卫生危机、食品安全、病毒分型、细菌耐药性分析和个体独特型遗传背景检测等方面的应用带来革命性变化。

急性T淋巴细胞白血病细胞系JM分泌抑制因子在体外对T细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 研究急性 T淋巴细胞白血病细胞系 JM分泌的抑制因子 (TL SFJM)在体外对 T细胞凋亡及细胞周期的影响 .方法 以 TL SFJM作用于有丝分裂原 PHA、蛋白激酶 C(PKC)活化剂 PMA和同种异体抗原 (alloantigen)活化的人或小鼠 T细胞 ,应用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期 .结果 TL SFJM在体外可诱导 PHA/IL - 2活化的小鼠胸腺细胞的凋亡 .TL SFJM在体外可诱导 alloantigen活化的人外周血单个核细胞 (PBMC)的凋亡 ,且把细胞周期阻遏在 G1期 .TL SFJM对 PMA诱导的人 PBMC活化抗原 CD2 5的表达无明显影响 ,也不引起凋亡 .结论 TL SFJM在体外可诱导 PHA、alloantigen活化的 T细胞凋亡 .

本科生医学免疫学概论教学法探讨

根据实际教学经验,分析了传统医学免疫学概论教学的主要模式及其缺陷,提出新的教学方式及其特点,旨在使医学免疫学概论教学更符合学生的认知规律,为进一步提高教学质量打好基础.

TLSF_(JM)抑制大鼠心脏移植排斥反应的作用

目的 在同种异体大鼠异位心脏移植模型中 ,探讨TLSFJM对急性移植排斥反应的抑制作用及机制。方法 以F344大鼠作为心脏移植受体 ,以LOU/CN大鼠作为心脏移植供体 ,建立大鼠异位心脏移植模型。受体大鼠分为 3组 ,于移植前后分别施以RPMI16 4 0、CsA或TLSFJM。每天观察移植心脏跳动情况 ,并于停跳当天或之前解剖观察。分别取供体大鼠脾细胞作为刺激细胞 ,取受体大鼠脾细胞作为反应细胞 ,进行单向混合淋巴细胞反应。结果 TLSFJM可明显延长大鼠异位移植心脏的存活时间 :RPMI16 4 0对照组移植心脏的存活期全部为 6d ,TLSFJM治疗组最长均可存活 2 7d ,高剂量 (15mg/kg·d)CsA治疗组存活期超过 2 7d。TLSFJM治疗组大鼠脾细胞增殖的cpm值均低于对照组。结论 TLSFJM具有良好的抗急性移植排斥反应作用。TLSFJM对同种异体抗原诱导T细胞增殖的明显抑制 。

TLSF_(JM)在体内对同种异体抗原诱导的小鼠T细胞增殖和杀伤细胞分化的影响

目的 :探讨JM急性T淋巴细胞白血病细胞分泌的抑制因子 (TLSFJM)对BALB C小鼠胸腺发育的影响及其在体内对同种异体抗原诱导的小鼠辅助性T细胞 (Th)增殖及杀伤性T细胞 (CTL)分化的影响。方法 :建立小鼠同种异基因型肿瘤排斥模型 ,实验小鼠腹腔注射含TLSFJM 的JM细胞培养上清 ,对照小鼠注射RPMI16 4 0。无菌取小鼠脾脏细胞 ,分别以3H TdR掺入法和51 Cr释放法检测T细胞增殖和CTL的分化。结果 :①TLSFJM 明显抑制多克隆刺激剂PHA联合IL 2诱导的小鼠胸腺细胞增殖 ;②体内注射TLSFJM明显抑制多克隆刺激剂PHA联合IL 2诱导的小鼠T细胞活化、增殖 ;③TLSFJM在体内能有效抑制同种异体抗原诱导的小鼠T细胞增殖 ;④TLSFJM 在体内能有效抑制同种异体抗原诱导的小鼠CTL分化。结论 :TLSFJM 在体内能有效抑制同种异体抗原诱导的小鼠T细胞增殖和小鼠CTL分化。

人同种异体抗原诱导的T细胞克隆在体外的建立及鉴定

目的:在体外建立长期培养的人T细胞克隆。方法:以60Co照射的无关PBMC作为饲养细胞,在条件培养液中以有限稀释法对经单向混合淋巴细胞反应活化的T细胞进行克隆化。用免疫荧光染色和流式细胞术分析鉴定所获克隆。结果:获得的16株克隆中,除1株外,均为αβT细胞。15株αβT细胞克隆中,有9株为Th(3株Th0、6株Th2),6株为Tc(5株Tc0,1株Tc2)。结论:建立了15株稳定的T细胞克隆并进行了鉴定,为Tc1和Tc2亚群标记和功能的研究打下了基础。

趋化性细胞因子对人Tc1和Tc2细胞内Ca^(2+)浓度变化的影响

为了探讨趋化性细胞因子在体外对人Tc1和Tc2亚群细胞内Ca2 + 浓度变化的影响 ,从PBMC中分离纯化CD8+ T细胞 ,在特定细胞因子及细胞因子抗体作用下 ,体外定向诱导出能长期培养的Tc1和Tc2细胞系 ,用免疫荧光染色结合流式细胞术分析对其进行鉴定后 ,通过流式细胞术检测在趋化性细胞因子刺激前后 ,细胞内Ca2 + 浓度的变化。发现受SDF 1作用后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 浓度变化均不明显 ,而IP 10刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平在短时间内明显上调 ,且在Tc1胞内的上升幅度远高于Tc2细胞 ,在MIP 1β刺激后 ,也观察到类似趋势 ;受Eotaxin刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平均有微小上升 ,在Tc2细胞内的上升幅度略高于Tc1细胞。说明Tc1和Tc2细胞受趋化性细胞因子作用后 ,细胞内Ca2 + 浓度有不同程度的变化 ,且与趋化性细胞因子受体的表达呈现一定的相关性。

超抗原SEB对CD8^+T细胞凋亡诱导配体表达的影响

为了探讨超抗原SEB对CD8+ T细胞凋亡诱导配体在细胞胞内和膜表面表达的影响 ,以SEB及PHA刺激PBMC ,用免疫荧光染色结合三色流式细胞术 ,分析比较刺激前后PBMC中CD8+ T细胞三种主要的凋亡诱导配体TRAIL、FasL和TNF -α在细胞胞内和膜表面表达的变化。结果表明 ,SEB上调FasL在CD8+ T细胞胞内 (34.8%至 4 2 .5 % )和TRAIL在CD8+ T细胞膜表面 (7%至 2 0 .7% )的表达 ,SEB还可同时上调TNF -α在CD8+ T细胞膜表面 (7%至 4 5 .7% )及胞内 (2 3.9%至 88.7% )的表达。说明SEB能上调不同凋亡诱导配体在CD8+ T细胞膜表面或胞内的表达 ,这可能是SEB影响CD8+ T细胞效应功能的方式之一。

乙型流感病毒分子检测中质量控制的研究

目的优化乙型流感暴发监测中分子鉴定的实验条件。方法分别以病毒RNA提取试剂盒手工提取和全自动核酸提取工作站提取江苏省暴发标本RNA,采用实时荧光定量RT-PCR检测看家基因核糖核酸酶P(RNaseP)和乙型流感核蛋白(B-NP)基因;分别以本实验室建立的RT-PCR扩增体系和进口商品化RT-PCR扩增体系,对乙型流感基质蛋白(B-M)基因进行检测。结果看家基因RNaseP能有效监测采样和RNA纯化的有效性;手工提取RNA的效率高于自动提取;进口商品化RT-PCR体系的扩增M基因效果较好。结论以手工法提取RNA,以real-timeRT-PCR检测B-NP基因和以进口商品化RT-PCR扩增体系检测B-M基因,能相对客观地反映病毒流行现状。

IL-2、IL-15对NK细胞亚群表型和功能的调节作用

目的 探讨IL 2和IL 15对NK细胞亚群表型和功能的调节作用。方法 采用双色免疫荧光染色和流式细胞仪分析 ,比较IL 2和IL 15对新鲜分离外周血单个核细胞 (PBMC)中NK细胞及经混合淋巴细胞培养 (MLC)活化的NK细胞表型的调节作用 ;用 4h51 Cr释放实验检测IL 2和IL 15对NK细胞杀伤水平的影响。结果 在PBMC培养中 ,当IL 2或IL 15最终为5 0U mL时 ,能明显上调PBMC中CD5 6 +NK细胞的比例 ,且IL 15对CD5 6 bright亚群增殖的促进作用强于IL 2 ;在MLC中 ,当IL 2或IL 15为 5 0U mL时 ,能够促进MLC活化的NK细胞比率的增加 ,NK细胞亚群由CD5 6 dim为主转变成CD5 6 bright为主 ,此诱导作用IL 2强于IL 15。IL 2和IL 15都能上调PBMC和MLC中NK细胞杀伤水平 ,并呈剂量依赖关系 ,在PBMC中 ,当IL 15为5 0U mL时 ,IL 15对NK细胞杀伤水平的促进作用强于IL 2 ;而在MLC中当IL 2为 5 0U mL时 ,对NK细胞杀伤水平的促进作用高于IL 15。在PBMC中 ,同时加入 5 0U mL的IL 15和IL 2 ,NK细胞杀伤率高于单独加入IL 15或IL 2。结论 IL 15促进PBMC中NK细胞向CD5 6 bright亚群分化和杀伤水平强于IL 2 ,而IL 2促进同种异体抗原诱导的活化NK细胞向CD5 6 bright亚群分化和杀伤水平则高于IL 15。这种反应格局的差别 。

CD226(PTA1)单抗诱导NK细胞克隆杀伤靶细胞的研究

目的 :研究CD2 2 6分子在NK细胞克隆上的表达及功能。方法 :用有限稀释法建立NK细胞克隆并鉴定。采用重导向杀伤实验 (redirectedcytotoxicityassay ,RCA)观察CD2 2 6单克隆抗体对NK细胞克隆杀伤作用的影响 ,并用ELISA方法检测杀伤相培养上清中细胞因子水平的动态变化。结果 :获得 1株NK细胞克隆。在重导向杀伤实验中 ,CD2 2 6单克隆抗体能明显提高NK细胞克隆的杀伤水平 ;促进NK细胞克隆IFN γ和GM CSF的分泌。结论 :CD2 2 6是一种新的NK细胞活化性受体 ,IFN γ和GM CSF水平升高可能与NK细胞克隆功能有关。

CD3/CD8设门在FCM检测Th1/Th2亚型中的应用

目的 探讨流式细胞术准确、灵敏检测Th1/Th2细胞的新方法。方法 采用荧光mAbCD3和CD8设门 ,准确找到CD4 + T细胞群 ,然后进行Th1/Th2细胞分析 ,并与单用CD4设门进行比较。结果 以CD3/CD8设门较单用CD4设门 ,对靶细胞的定位较为准确 ,测量所获图形美观、清楚并有规律。结论 以CD3/CD8设门 ,可提高检测Th1/Th2细胞的准确性 ,同时也可应用于Tc1/Tc2细胞的检测分析 。

一种新的人活化T细胞抗原p140的分布及其功能的研究

目的观察一种新的活化T细胞膜分子p140的分布、相对分子质量(Mr)和功能。方法用免疫荧光染色和流式细胞术观察p140分子的分布;采用重导向杀伤实验观察其对杀伤功能的调节;应用生物素标记细胞膜分子、免疫沉淀及化学发光测定p140的Mr。结果p140分子可选择性地表达于混合淋巴细胞培养(MLC)所产生的活化T细胞表面,而在抗CD3mAb、PHA、PMA或PMA+A23187几种刺激剂活化的人外周血单个核细胞(PBMC)上未见表达。p140还分布于一些人急性T细胞性白血病细胞系。在重导向杀伤实验中,p140与CD3分子有协同作用。p140Mr为140000。结论p140可能为一种新的移植抗原诱导的T细胞活化分子,同CD3分子具有协同刺激作用。