实现自控分离对人血浆蛋白质量的影响

目的对低温乙醇血浆蛋白分离工艺实现自控后分离的人血浆蛋白各项质量指标和收获率进行评价。方法按照《中国药典》三部(2005版)规定的方法和标准,对低温乙醇工艺实现自控后分离的人血浆蛋白样品各项指标进行测定,并将测定结果与自控前的制品进行比较。结果连续测定实现自控后分离的71批人血白蛋白和52批静注人免疫球蛋白(IVIG)样品,并与实现自控前的82批人血白蛋白、29批静注人免疫球蛋白(IVIG)成品检定结果进行比较,发现人血白蛋白及IVIG的纯度和收获率均有明显提高,多聚体含量明显下降,其他指标(离子含量、吸光度等)均无明显改变,且制品质量稳定,符合《中国药典》三部(2005版)要求。结论低温乙醇分离蛋白实现自控后,进一步提高了人血浆蛋白的质量,使分离过程更加容易控制,制品质量更加趋于稳定。

原料血浆冷沉淀提取工艺过程质量控制

目的:对原料血浆冷沉淀提取工艺过程进行质量控制,保证血浆安全和冷沉淀质量合格。方法:采用双缩脲法检测血浆和冷沉淀蛋白含量。用DR45密度计检测冷沉淀提取前后血浆密度。采用薄膜过滤法检查冷沉淀提取前后血浆微生物限度。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和电泳扫描法,分析血浆中白蛋白和Ig G百分含量。采用ACL7000全自动凝血分析仪检测凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ和Ⅷ效价。检测分析冷沉淀的质量。结果:冷沉淀提取前后血浆蛋白、密度、微生物限度、凝血因子Ⅷ效价明显下降,但血浆中白蛋白、Ig G以及凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ效价无明显变化。5批冷沉淀中FⅧ的收获率均值为61.8%,其质量符合制备人凝血因子Ⅷ的标准。结论:通过对冷沉淀提取工艺过程的质量控制,有效保证了血浆和冷沉淀的质量。

离子交换吸附法提取人凝血酶原复合物工艺优化

目的优化人凝血酶原复合物的离子交换吸附工艺,提高PCC回收率。方法采用单因素试验的方法 ,以人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ吸附率为考察指标,初步优选吸附温度、吸附时间、凝胶用量和血浆pH四个工艺参数。结果优化试验结果为血浆温度20℃、吸附时间60 min、凝胶用量1.5 g/L、血浆pH7.4。结论确定了人凝血酶原复合物提取工艺的条件。

分光光度法测定血液制品生产过程中的乙醇含量

目的 建立血液制品生产过程中乙醇含量的测定方法。方法 在酸性条件下曙红与乙醇反应显橙色 ,被疏水有机溶剂提取后 ,用分光光度法测定乙醇含量。结果 在 480nm处有机相吸收值与乙醇含量 (≤ 45 % )呈正切函数关系。结论 用该法对血液制品生产过程中各组分悬浊液和上清液中乙醇含量进行了测定。结果表明 ,该法具有快速、准确。

FⅢ制作工艺优化对静注人免疫球蛋白(pH4)收率和关键质量指标的影响分析

目的优化静注人免疫球蛋白(pH4)FⅢ制作工艺参数,保证产品质量的同时,提高产品收率。方法将FⅡ+Ⅲ沉淀溶解后的乙酸钠、醋酸缓冲液和乙醇的加液时间分别由4 h、2 h、4 h延长为5 h、3 h、5 h;FⅡ+Ⅲ沉淀溶解温度由-0.5℃提高至1℃,FⅢ制作温度由-5.5℃提高至-5.0℃;对优化前后的人免疫球蛋白原液收率和关键质量指标(纯度、分子大小分布、抗补体活性、Fc生物学活性和激肽释放酶原激活剂)进行统计分析。结果加液时间延长和温度提高分别使人免疫球蛋白原液收率提高了19.6%和12.9%,且关键质量指标均未发生显著变化。结论 FⅢ制作过程加液时间和温度参数的优化,有效提高了人免疫球蛋白原液收率,未影响产品质量。

血浆蛋白含量对低温乙醇工艺蛋白收率的影响

目的:探讨血浆蛋白含量对低温乙醇分离工艺生产的人血白蛋白及免疫球蛋白回收率的影响。方法:以2017年1月至2018年12月所有投产批次的混合血浆为样本,根据血浆蛋白含量分成11组:54.0~54.4、54.5~54.9、55~55.4、55.5~55.9、56~56.4、56.5~56.9、57~57.4、57.5~57.9、58~58.4、58.5~58.9和59~59.4g/L。检测计算每组内所有批次血浆蛋白总量和经低温乙醇工艺分离得到的人血白蛋白和人免疫球蛋白总量,并分别计算蛋白回收率。分析不同血浆蛋白含量与人血白蛋白和人免疫球蛋白回收率的关系。结果:血浆蛋白含量在较低的范围内,人血白蛋白收率较高,其中在55.5~55.9g/L之间,收率最高,随着血浆蛋白含量提高,人血白蛋白收率下降;血浆蛋白含量在56.5~56.9g/L之间,人免疫球蛋白收率最高,过高和过低的血浆蛋白含量,均不利于人免疫球蛋白收率的提升。结论:血液制品低温乙醇工艺生产人血浆蛋白和人免疫球蛋白产品时应对混合血浆蛋白含量进行控制,血浆蛋白含量应控制在55.5~56.9g/L之间,才能平衡人血白蛋白和人免疫球蛋白收率的关系,获得较高的综合收率。

人血白蛋白长期储存过程中铝残留量的研究

目的:分析人血白蛋白在长期储存过程中铝残留量的变化,评价在有效期内人血白蛋白铝残留量的变化。方法:采用原子吸收分光光度法检测储存1、3、5年人血白蛋白成品留样,及2013~2016年生产的人血白蛋白中铝残留量较高批次成品留样的铝残留量。结果:人血白蛋白成品在长期储存过程中,铝残留量会有上升趋势,高铝残留量人血白蛋白在长期储存过程中铝残留量最高在100μg/L左右。结论:人血白蛋白在有效期内的储存过程中,铝残留量能够维持在较低的水平,均≤200μg/L,有效确保人血白蛋白上市安全性。

血浆蛋白分离组分沉淀物料平衡限度的建立

目的:建立低温乙醇工艺生产血液制品过程中各组分沉淀物料平衡限度范围。方法:根据2015-2018年连续生产的91批人血白蛋白及静注人免疫球蛋白(pH4)过程中各组分沉淀产出量,计算出单位重量血浆产出各组分沉淀的产出率,确定组分沉淀物料平衡限度,计算公式为:血浆量(kg)×(-Х±3SD)。结果:FⅠ,FⅡ+Ⅲ,FⅢ,FⅡ,FⅣ,FⅤ沉淀量的物料平衡范围分别为血浆量×(0.07187±3×0.00228)、血浆量×(0.09383±3×0.00193)、血浆量×(0.07419±3×0.00267)、血浆量×(0.02560±3×0.00238)、血浆量×(0.08601±3×0.00393)、血浆量×(0.10218±3×0.00187)。结论:低温乙醇工艺分离血浆蛋白过程中,各组分沉淀产出量均在物料平衡限度范围内,建立了组分沉淀量的物料平衡检查方法,对提高血液制品的质量控制具有重要意义。

离子交换层析法制备高纯度人凝血因子Ⅷ的研究

目的：从血浆冷沉淀中采用离子交换层析法纯化人凝血因子Ⅷ。方法：冰冻血浆在2~8℃环境下融化,离心法收获冷沉淀。用注射用水溶解冷沉淀,探索了5种冷沉淀溶解液预纯化的方法。冷沉淀溶解液经S/D病毒灭活后采用离子交换层析纯化人凝血因子Ⅷ,经超滤、配制、除菌分装、冻干、干热病毒灭活,获得人凝血因子Ⅷ成品,分别检测流穿液、洗涤液和洗脱液中人凝血因子Ⅷ效价和蛋白含量。观察了冻干和不同干热条件前后凝血因子Ⅷ活性的变化。观察人凝血因子Ⅷ冻干品的外观和复溶时间。结果：冷沉淀中人凝血因子Ⅷ的回收率为40%~70%。5种冷沉淀溶解液预纯化方法中,用盐酸调节p H至6.6、6.3的方法人凝血因子Ⅷ回收率较高。离子交换层析流穿液中FⅧ损失率小于5%,而洗涤液中FⅧ损失率较高,最高损失率超过20%。人凝血因子Ⅷ中蛋白质含量较低,均小于0.65 mg·m L-1,比活性为50~100IU·m L-1。吐温-80和TNBP的残留量均符合《中国药典》的要求。冻干过程中人凝血因子Ⅷ效价下降大约1%~5%。100℃,30 min干热处理对FⅧ效价的破坏小于80℃,72 h。人凝血因子Ⅷ冻干品外观和复溶时间均达到中国药典标准。结论：采用离子交换层析法从血浆冷沉淀中分离出高纯度人凝血因子Ⅷ,可以进行工艺放大研究。