乳酸左氧氟沙星对豚鼠心肌细胞电生理的影响

目的:了解乳酸左氧氟沙星(LVFX)对豚鼠心室肌细胞电生理的影响。方法:经腹腔注射不同剂量的LVFX,记录并分析注药后5～360min豚鼠Ⅱ导联心电图的QT间期,以及校正的QT间期(QTc)。采用全细胞膜片钳技术,记录不同浓度LVFX对体外单个心室肌细胞的延迟整流钾电流(IK)的作用。结果:①LVFX给药量为200mg/kg时,心电图QT间期延长19.38%±3.15%(P<0.05);在50mg/kg和100mg/kg等较低剂量时,QT间期延长不明显(P>0.05)。②LVFX抑制IK电流,且抑制作用呈现电压依赖性和浓度依赖性。结论:LVFX可能通过抑制心肌细胞IK电流引起心脏QT间期延长,临床应谨慎使用。

氟康唑对豚鼠心室肌细胞I_K和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用

目的研究氟康唑对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)和在HEK-293细胞中表达的HERG钾通道的抑制作用。方法应用酶解法消化豚鼠单个心室肌细胞,观察氟康唑对IK的影响;采用磷酸钙沉淀瞬时转染的方法将HERG基因表达于HEK-293细胞上,观察氟康唑对野生型HERG钾通道电流、激活和失活曲线的影响,以及氟康唑对Y652A和F656C突变型HERG钾通道的作用;IK和HERG电流的记录均采用全细胞膜片钳技术。结果氟康唑(0.01、0.1、1、3、10、30、100、300和1 000μmol.L-1)浓度依赖性地抑制IK和HERG钾电流,其IC50值分别为(68.1±21.6)μmol.L-1和(48.2±9.4)μmol.L-1,对HERG钾通道的电压依赖性激活和失活曲线无影响;与野生型(WT)比较,Y652A和F656C突变型可减弱氟康唑对HERG通道的阻断作用。结论氟康唑能阻断IK和HERG通道,Y652和F656是氟康唑与HERG通道结合的关键位点。

乳酸司帕沙星对豚鼠心肌细胞电生理的影响

分别采用心电图记录、细胞内微电极记录技术及全细胞膜片钳技术,观察乳酸司帕沙星(SPX)对豚鼠心脏QT间期、动作电位时程APD50、APD90和心肌细胞IK电流的影响。结果显示:①SPX可延长豚鼠心电图QT间期,且呈剂量依赖性;②SPX可延长APD50和APD90;③SPX可抑制心肌细胞IK电流,呈电压依赖性和浓度依赖性。提示SPX通过抑制心室肌细胞IK造成动作电位时程延长,有引发长QT综合征的危险,临床上应谨慎使用。

依托咪酯对HEK-293细胞中异源表达的hERG钾通道电流的抑制作用

目的:观察依托咪酯对HEK-293细胞中异源表达的hERG钾通道电流的抑制作用及其机制。方法:采用脂质体瞬时转染的方法将野生型hERG(WT-hERG)、突变型Y652A-hERG和F656C-hERG分别转染人胚胎肾细胞HEK-293,应用全细胞膜片钳技术记录依托咪酯对转染后HEK-293细胞表达的hERG钾通道电流的抑制作用以及对激活曲线和失活曲线的影响。结果:依托咪酯可浓度依赖性地抑制WT-hERG转染的HEK-293细胞钾通道电流,其半数最大抑制浓度为(6.41±2.43)μmol/L,对激活曲线和失活曲线无明显影响。与WT-hERG转染的HEK-293细胞相比,依托咪酯对突变体Y652A-hERG及F656C-hERG转染的HEK-293细胞内钾通道电流的抑制作用减弱。结论:F656C可能是依托咪酯抑制hERG钾通道的重要靶点。

咪达唑仑对hERG钾通道的作用

目的:观察咪达唑仑对人胚肾上皮细胞(HEK-293)中异源表达的人类相关基因(h ERG)钾电流作用及其机制。方法:利用全细胞膜片钳技术,观察咪达唑仑对h ERG钾通道的抑制作用,分析其对通道激活、失活动力学过程的影响以及咪达唑仑对Y652A和F656C突变型h ERG钾通道的作用。结果:咪达唑仑浓度依赖性地抑制h ERG钾电流,其IC50值为(1.31±0.32)μmol/L。1.0μmol/L的咪达唑仑加药前后半数激活电压V1/2由(2.32±0.38)m V变为(-1.96±0.83)m V;加药前后半数失活电压V1/2由(-49.25±0.69)m V变为(-57.53±0.53)m V(P<0.05),失活曲线左移;与野生型(WT)比较,Y652A和F656C突变型可显著减弱咪达唑仑对h ERG通道的阻断作用。结论:咪达唑仑能阻断h ERG钾通道,失活速度加快,Y652和F656可能是咪达唑仑与h ERG钾通道结合的关键位点。

药理学教学方式在本科教与学中的转变

计算机、网络和多媒体技术的开发与应用,促使药理学的理论教学、实验课教学以及科研教学等多方面发生了改变,教师授课和学生听课模式也发生了转变,笔者结合自身在多年药理学教学中的切身体会,浅谈本科药理学在教学中教与学的几点感受。

藻酸双酯钠对豚鼠心室肌细胞离子电流的作用(英文)

目的:观察藻酸双酯钠(Polysaccharide sulfate,PSS)对豚鼠单个心室肌细胞离子流的影响。方法:采用Ⅰ型胶原酶分离单个豚鼠心室肌细胞的方法,利用全细胞膜片箝记录技术,在不同箝制条件下,记录并分析了PSS对L-型Ca2+电流(ICa,L)、内向整流K+电流(IK1)的影响。结果:①PSS使ICa,L的激活时间常数变大,电流幅度减小,Ⅰ-Ⅴ曲线上移。在箝制电位为+10 mV时,PSS在6-9 min内使ICa,L的激活时间常数从(0.92±0.10)ms增加到了(1.15±0.11)ms(n=5,P<0.052);ICa,L的电流幅度从(16.80±1.71)pA/pF下降至(13.86±1.67)pA/pF(n=5,P<0.01)。②PSS可使IK1的内向成分和外向成分均增加。当箝制电位在-170 mV时,PSS能使IK1内向电流幅度从(224±16.17)pA／pF增加至(257±17.36)pA／pF(n=7,P<0.01);箝制电位在-50 mV时,PSS使IK1的外向电流幅度从(8.89±0.86)pA／pF增加至(10.38±1.18)pA／pF(n=7,P<0.05)。在反转电位附近时(-70--120 mV),PSS的作用不明显。PSS能使IK1的激活时间常数减小,当箝制电位在-160 mV时,激活时间常数从加药前的(1.05±0.11)ms减小到了加药后的(0.78±0.90)ms(n=7,P<0.01);同时,IK1的电导值变大,从(2.53±0.17)nS／pF增加到了(2.82 ±0.20)nS／pF(n=7,P<0.05)。结论:PSS对L-型Ca2+电流有抑制作用,对内向整?

氟康唑对HERG钾通道电生理功能的影响

目的：观察咪唑类抗真菌药氟康唑（fluconazole）对HERG钾通道电生理功能的影响。方法：采用磷酸钙瞬时转染的方法，将质粒cgi—GFP，HERG转染到人胚肾细胞（HEK一293）中进行表达，随后应用全细胞膜片钳的方法，观察不同浓度的氟康唑对HERG电流的影响。结果：氟康唑浓度依赖性的抑制HERG电流（Istep）和尾电流（Itail）。当浓度为0．01、0．1、1、3、10、30和100μM时，其抑制率分别为105±1．69％（P〉0．05）；92．39±1．00％：80．46±2．39％；69．67±53．26％；46．84±2．62％；40．24±2．06％；34．06±1．21％（P〈0．05），其ICEn值为3．41±1.93μM。但氟康唑对HERG钾通道的激活曲线和失活曲线均无影响。

瑞舒伐他汀抑制JNK1/2的活化对急性心力衰竭大鼠心脏血流动力学、氧化应激及免疫应答的调节

目的:探究瑞舒伐他汀(RST)抑制JNK1/2的活化对急性心力衰竭(HF)大鼠心脏血流动力学、氧化应激及免疫应答的调节机制。方法:将100只雄性SD大鼠随机选取20只作为健康对照组(Control),80只制成急性HF模型后设为模型组(Cardiac failure)、低浓度RST组(2.5 mg/kg)、中浓度RST组(5 mg/kg)和高浓度RST组(10 mg/kg)。检测各组大鼠平均动脉压(MAP)、左室收缩压(LVSP)及心率(HR);ELISA检测血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和IL-1β水平;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平;HE染色观察大鼠心肌损伤;免疫组化检测IL-6表达;Western blot检测大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9、JNK1/2蛋白表达情况。结果:相比于健康对照组,模型组大鼠MAP、LVSP、HR、SOD显著降低(P<0.05),CK、Mb、CK-MB、ROS、MDA、IL-1β、iNOS水平、IL-6阳性率、Caspase-3、Caspase-9、p-JNK1/2蛋白表达显著升高(P<0.05),JNK1/2蛋白表达无显著变化(P>0.05);相比于模型组,RST各组MAP、LVSP、HR、SOD水平显著升高(P<0.05),且呈浓度依赖性,CK、Mb、CK-MB、ROS、MDA、IL-1β、iNOS水平、IL-6阳性率、Caspase-3、Caspase-9、p-JNK1/2蛋白表达显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性,JNK1/2蛋白表达无显著变化(P>0.05)。结论:RST可通过抑制JNK1/2的活化调节急性HF大鼠心脏血流动力学及免疫应答并抑制氧化应激反应,且在一定浓度范围内呈浓度依赖性。

槲皮素对CVB3诱导的新生小鼠病毒性心肌炎氧化应激损伤和炎性反应的调节

目的:心肌炎是由多种不同的感染因子引起的心脏炎症性病变,会造成致命性伤害,尤其是对年轻人。本文旨在探索槲皮素对柯萨奇B3m病毒(CVB3)诱导的新生小鼠病毒性心肌炎氧化应激损伤和炎性反应的影响。方法:CVB3感染建立急性病毒性心肌炎模型。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)水平通过商业化试剂盒进行检测。ELISA检测IL-1β、IL-6和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)水平。蛋白印迹分析TGF-β1、p-NF-κB P65和TNF-α表达。结果:与正常组相比,CVB3组乳鼠存活率明显降低,心脏重量/体重(HW/BW)比值和血糖浓度明显升高(P<0.05)。槲皮素可抑制CVB3诱导的存活率下降,HW/BW比值和血糖浓度的上升(P<0.05)。与正常组相比,CVB3组SOD水平下降,MDA和LDH水平上升(P<0.05)。槲皮素可减弱CVB3诱导的SOD水平的降低,MDA和LDH水平的升高(P<0.05)。而且,CVB3组乳鼠IL-1β、IL-6和i NOS水平高于正常组(P<0.05)。槲皮素组乳鼠IL-1β、IL-6和i NOS水平低于CVB3组(P<0.05)。与正常组相比,CVB3组TGF-β1、p-NF-κB P65和TNF-α的表达增强(P<0.05)。槲皮素可抑制CVB3诱导的TGF-β1、p-NF-κB P65和TNF-α表达水平的升高(P<0.05)。结论:槲皮素可减轻CVB3诱导的新生小鼠病毒性心肌炎氧化应激损伤和炎症反应。

限制能量摄入对老龄大鼠抗衰老效应的实验研究

目的研究限制能量摄入对老龄大鼠抗衰老的生物效应,并探讨其可能机制。方法雄性11月龄大鼠34只,随机分为三组,分别给予实验组大鼠对照组食量的80%和60%,6个月后测量血清SOD,MDA,IL-2,脑组织MAO,NO及肝细胞凋亡指数。结果实验组大鼠血清SOD,IL-2水平,脑组织NO含量较对照组明显提高;血清MDA水平,脑组织MAO活性,肝细胞凋亡指数较对照组显著降低。结论自老龄期开始限制能量的摄入,具有抗衰老的生物学效应。

安妥沙星延长离体豚鼠心肌动作电位

目的观察氟喹诺酮类抗菌药安妥沙星(ATFX)对豚鼠心肌动作电位的影响。方法微电极记录豚鼠右心室乳头肌动作电位。结果(1)当刺激周长为1000 ms时,各浓度的司帕沙星(SPX)均显著性延长APD50和APD90(P<0.05),而左氧氟沙星(LVFX)和ATFX在浓度超过10μmol/L时明显延长APD90(P<0.05),且ATFX延长APD90的效应明显弱于LVFX和SPX。(2)用E-4031阻断IKr电流,ATFX延长APD90的效应部分被逆转;而用Chro-manol 293B阻断IKs电流,ATFX延长APD90的效应仍存在(P<0.05);但E-4031和Chromanol 293B共同作用阻断IK电流后,ATFX延长APD90的效应可明显被逆转。(3)在药物浓度为10μmol/L时,随着刺激周长的延长,3种药物虽呈不同程度延长APD90,但相差无显著性,提示药物引起的APD延长无明显的频率依赖性。结论ATFX可能通过抑制IKr电流而延长APD,但其效应明显弱于LVFX和SPX。

高血压左心室肥厚与肥厚型心肌病患者体表心电图表现及鉴别分析

目的分析高血压左心室肥厚(H-LVH)与肥厚型心肌病(HCM)患者体表心电图(ECG)表现及鉴别诊断要点。方法纳入2013年11月至2017年11月海南省第三人民医院诊治的H-LVH(60例,H-LVH组)、HCM患者(40例,HCM组)为研究对象,均行体表ECG检查,对比两组12导联T波峰与末间期(Tp-e间期)的差异性及ROC曲线下面积,比较其最大Tp-e间期、矫正Tp-e间期(cTp-e)、最小Tp-e间期,评估Ⅱ导联的Tp-e间期、异常Q波、T波倒置诊断HCM的敏感性、特异性,并分析两组最大QTe、QTp、cQTe、cQTe与最大左室壁厚度的相关性。结果 HCM组肢体导联Ⅰ、Ⅱ、a VR、a VF及胸前导联V5、V6的Tp-e间期较H-LVH组延长(P <0. 05);Ⅱ导联的Tp-e间期曲线下面积最大,为0. 805; HCM组最大Tp-e间期(111±21) ms、cTp-e间期(89±18) ms、最小Tp-e间期(59±11) ms较H-LVH组延长(P <0. 05);异常Q波标准2诊断HCM的敏感性、特异性高于标准1及标准3,T波倒置标准2诊断HCM的敏感性、特异性高于标准1及标准3,满足Ⅱ导联Tp-e间期> 75 ms、异常Q波、T波倒置任一项诊断HCM的敏感性、特异性为58. 8%、92. 0%; HCM患者最大QTe、QTp、cQTe、cQTp与最大左室壁厚度有相关性(P <0. 05),而H-LVH无(P> 0. 05)。结论 HCM的体表ECG表现与H-LVH存在差异,尤其是Ⅱ导联的Tp-e间期或异常Q波、T波倒置有较高敏感性、特异性,可用于与H-LVH的鉴别诊断。

左氧氟沙星延长离体豚鼠乳头肌的动作电位时程

目的观察左氧氟沙星(LVFX)对豚鼠心肌动作电位的影响,并以司帕沙星(SPX)为阳性对照物比较二者对心肌的毒性作用。方法微电极记录豚鼠右心室乳头肌动作电位。结果刺激频率为1 Hz时,各浓度的SPX均显著性延长APD50和APD90,而LVFX浓度超过10μmol/L时明显延长APD50和APD90。结论LVFX和SPX均引起APD延长,前者效应较后者弱,仅在大剂量时有导致QT间期延长的潜在毒性。

前列腺素E_1预处理对豚鼠缺血/再灌注心室肌细胞钾通道的影响

ATP敏感钾通道和延迟整流钾通道在心肌缺血预适应及心肌电活动中分别发挥着重要作用，但这两个通道在前列腺素E1（prostaglandinE，，PGE，）预处理抗心肌缺血／再灌注损伤的保护机制中有何作用未见报道，本实验应用全细胞膜片钳技术研究PGE1预处理对缺血／再灌注心肌细胞IK（ATP）和IK的影响，探讨其心肌保护作用机制。

乳酸左氧氟沙星对豚鼠心肌细胞延迟整流钾电流的影响

目的:观察氟喹诺酮类药物左氧氟沙星(levofloxacin,LVFX)对豚鼠心肌细胞延迟整流钾电流(IK)的影响。方法:采用酶消化的方法分离出单个豚鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的LVFX对豚鼠心室肌细胞IK的影响。结果:①SPX和LVFX浓度依赖地抑制IK的脉冲电流和尾电流,但不影响其原有的电压和时间依赖性。②当LVFX作用浓度分别为0.1,1,10,100,1000μM时,在+50 mV去极化电压下,测得IK的脉冲电流较对照组依次减少了(11.81±1.71)%,(14.51±2.12)%,(22.78±3.58)%,(29.59±2.89)%,(38.13±2.44)%;尾电流依次减少了(6.05±251)%,(12.19±1.49)%,(17.75±2.74)%,(30.05±1.49)%,(48.18±3.71)%。结论:LVFX在不同的浓度下对豚鼠心肌细胞的IK有不同程度的抑制。

地高辛抑制豚鼠心室肌细胞Na^+,K^+-ATP酶和人胚肾上皮细胞系HERG钾通道电流

强心苷类药对Na^＋,K^＋-ATP酶的作用在低浓度时为兴奋、在高浓度时呈抑制作用[1]。应用膜片钳技术观察地高辛（Digoxin）对豚鼠心室肌细胞Na^＋,K^＋-ATP酶电流（Ip）的作用还未见报道。此外,由于很多药物的心脏不良反应是通过抑制人ether-a-go-go-related基因（HERG）编码的快速激活的延迟整流钾通道（IKr）而引起QT间期延长和尖端扭转性室速（TdP）。

司帕沙星和左氧氟沙星对豚鼠心电图QT间期的影响

目的:观察司帕沙星(sparfloxacin,SPX)和左氧氟沙星(levofloxacin,LVFX)对豚鼠心电图QT间期的影响。方法:豚鼠腹腔注射SPX和LVFX后,使用BL-410生理软件记录心电图Ⅱ导联中QT间期的变化。结果:SPX和LVFX引起的QT间期延长,具有剂量依赖性。当剂量为50 mg/kg时,SPX和LVFX均无明显的延长QT间期的作用;当剂量为100 mg/kg时,SPX引起QT间期延长,LVFX不引起QT间期延长;当剂量为200mg/kg时,SPX和LVFX均引起QT间期延长。结论:SPX和LVFX两种药物在低剂量时,都不表现心脏副作用,但随剂量增加,都有引起QT间期延长的潜在危险,两者相比,LVFX较为安全。

罗红霉素对转染HERG基因人胚肾上皮细胞HERG钾通道的抑制作用

目的:研究罗红霉素对转染HERG基因人胚肾上皮细胞(HEK-293)HERG钾通道的抑制作用。方法:采用磷酸钙瞬时转染法分别将野生型、Y652A和F656C突变型HERG基因转染HEK-293细胞。观察不同浓度的罗红霉素对野生型HERG钾通道电流量效曲线、激活和失活曲线的影响,以及对突变型HERG钾通道电流的作用;HERG钾通道电流的记录采用全细胞膜片钳技术。结果:罗红霉素(0.1、1、3、10、30、100和300μmol/L)浓度依赖性地抑制野生型HERG钾通道电流,其IC50为(55.8±9.1)μmol/L,对野生型HERG钾通道电流的激活曲线和失活曲线无影响(激活曲线:tV1/2=1.011,tk=1.824;失活曲线:tV1/2=0.749,tk=0.859,P均>0.05);与野生型HERG比较,Y652A和F656C突变型HERG可显著减弱100、300和1000μmol/L罗红霉素对HERG钾通道电流的阻断作用(tY652A=18.908、18.184和26.738,tF656C=2.926、4.260和4.143,P均<0.05)。结论:罗红霉素能阻断HEK-293细胞HERG钾通道,Y652A和F656C是罗红霉素与HERG钾通道结合的关键位点。