miR⁃30a⁃5p靶向与调控SNAIL1抑制人胃癌细胞BGC⁃823的迁移

已有研究表明,miR-30a-5p在胃癌中发挥抑癌基因的作用,抑制胃癌细胞的增殖与侵袭,但其抑制胃癌发生发展的机制尚不清楚。本文研究miR-30a-5p如何靶向调控SNAIL 1,进而影响人胃癌细胞BGC-823的迁移。通过qRT-PCR检测和TCGA数据库分析发现,miR-30a-5p的表达水平在胃癌组织与胃癌细胞BGC-823中均降低。利用划痕实验和Transwell实验检测发现,在BGC-823细胞中转染miR-30a-5p mimics过表达miR-30a-5p后细胞迁移和侵袭明显被抑制,而转染miR-30a-5p inhibitor降低miR-30a-5p表达水平时细胞迁移和侵袭能力提高。qRT-PCR和Western印迹及免疫荧光检测发现,过表达miR-30a-5p细胞中波形蛋白(vimentin)和N-钙黏着蛋白(N-cadherin)的mRNA及蛋白质表达水平降低,而E-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达水平升高。在miR-30a-5p inhibitor组中结果恰恰相反。通过生物信息学预测、双荧光素酶基因报告、Western印迹及免疫荧光验证SNAIL 1是miR-30a-5p作用的靶基因。在过表达miR-30a-5p的BGC-823细胞中进一步过表达SNAIL 1,可以逆转miR-30a-5p的作用。该研究表明,miR-30a-5p可通过负调控靶基因SNAIL 1的表达,进而抑制BGC-823胃癌细胞的迁移。本研究将为miR-30a-5p在胃癌发生发展中的作用机制提供理论依据,并有望为胃癌治疗提供新靶点和生物标志物。

C型产气荚膜梭菌保护性抗原的免疫原性

目的研究C型产气荚膜梭菌α-β2-β1融合基因重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1抗原的免疫原性。方法在对重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1进行优化表达的基础上,制备包涵体粗提物、全细胞培养物及全细胞乳糖诱导培养物3种抗原,对ICR小鼠进行攻毒保护试验。结果重组工程菌BL21(DE3)/pXETAB2B1能够表达α-β2-β1融合蛋白,该融合蛋白能够有效刺激免疫小鼠产生特异性抗体,达到保护的目的。结论已获得具有一定免疫原性的重组工程菌,可作为预防产气荚膜梭菌所引起疾病的候选菌株。

ABCA1 DNA甲基化水平与AS及血脂的关系

目的探讨动脉粥样硬化(AS)患者血中三磷酸腺苷结合盒运转体A1(ABCA1)DNA甲基化水平与AS的发生、发展及血脂变化的关系。方法用颈动脉多普勒超声对患者检查、用全自动生化分析仪检测患者血脂水平,以确诊AS患者;收集AS组及正常对照组外周血标本各30例,以荧光定量PCR检测2组的ABCA1 mRNA表达,采用巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测其ABCA1 DNA甲基化水平,并分析其与血脂水平相关性。结果与正常组相比,AS组甘油三酯(TG)含量升高2.17倍(P<0.01),胆固醇(CHOL)含量升高1.21倍(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)升高0.83倍,低密度脂蛋白(LDL)升高1.18倍(P<0.05);与正常对照组相比,AS组患者ABCA1 mRNA水平降低了63.3%(P<0.01),ABCA1 DNA甲基化水平,AS组较正常对照组升高了1.38倍(P<0.01);血脂水平与ABCA1 DNA甲基化水平呈正相关(r=0.489 8,P<0.01)。结论外周血中ABCA1 DNA高甲基化与AS的发生、发展密切相关。

产气荚膜梭菌α-β_2-β_1融合基因的构建及表达

目的构建产气荚膜梭菌α-β2-β1融合蛋白基因表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法利用PCR技术,从含α毒素基因的质粒pXCPA02中扩增出α毒素基因,经NcoⅠ酶切,回收0·95kb的α基因片段,再与经NcoⅠ酶切并含融合基因β1-β2的质粒pXETB1B2连接,获得重组质粒pXETAB2B1,经NcoⅠ、BamHⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定,并对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重组质粒pXETAB2B1含有α-β2-β1融合基因。表达产物相对分子质量约为95000,并可被特异性抗体识别。结论已获得高效表达α-β2-β1的重组菌株。

医学检验专业实验教学模式改革

医学检验是一门发展迅速、多技术、多学科交叉的实践性很强的学科。其新的培养目标提出＂本专业培养具有基础医学、临床医学、医学检验等方面的基本理论知识和基本能力的从事医学检验、医学类实验室工作的医学高级专门人才＂。但是,由于受应试教育和现行的＂单学科叠加式＂模式的影响,使医学检验专业教学中存在重理论教学、轻实践教学、轻技能培训,不利于培养学生的创新能力和创新思维。为了促使学生从知识型向能力型、从模仿型向创新型、从单一型向复合型转变,本文提出＂多学科渗透式＂实验课程教学模式改革。

以临床应用兼过程为导向的临床生物化学检验课程评价体系的建立与实践

通过建立过程考核、实验考核、闭卷考核"多层次、多形式、多特色"的临床应用兼过程为导向的临床生物化学检验课程评价体系的指标,阐述其具体做法,并就其实施的效果进行讨论分析,旨在缩短学生适应将来岗位的时间,强化学生的实践能力和动手能力,提高学生分析问题、解决问题的逻辑思维能力,进一步促进课程教学质量的提高。

大肠杆菌中外源基因的表达调节

大肠杆菌已经被广泛地应用于表达各种外源基因,但基因的表达受到多种因素的调节,而且不同的外源基因在大肠杆菌中的表达效率也有很大差异。本文从转录水平调节、翻译水平调节、培养条件调节等方面综述了大肠杆菌中外源基因的表达调节,以便认识其规律,有助于使用有效的方法提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率。

C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE_3)pXETAB_2B_1表达条件的优化

目的优化C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE3)pXETAB2B1融合蛋白表达的条件。方法以IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)为诱导剂,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳比较pH值、培养温度、诱导时间、菌体生长密度等因素对重组α-β2-β1融合蛋白表达进行表达条件的影响。结果C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE3)pXETAB2B1的表达优化条件是:最适培养基pH值是7.5,最适诱导时间是5小时,最适表达温度是37℃,最适菌体生长密度是OD6001.0,IPTG最适诱导浓度是0.4 mmol/L。结论获得C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE3)pXETAB2B1融合蛋白的最佳表达条件。

C型产气荚膜梭菌α-β_2-β_1融合蛋白的免疫原性研究

目的研究含α-β2-β1融合基因的重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)的免疫原性。方法用重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)制备包涵体和全细胞培养物两种抗原,采用氢氧化铝胶体作为免疫佐剂,免疫ICR小白鼠,用C型产气荚膜梭菌外毒素粗提物进行攻毒,观察小鼠的保护情况。结果包涵体加氢氧化铝凝胶制备的抗原保护效果对于1LD100和2LD100的攻毒均达到100%;全细胞培养物加氢氧化铝凝胶制备的抗原保护效果对于1LD100和2LD100的攻毒达到50%和20%。结论已获得具有一定免疫原性重组菌株,可作为预防C型产气荚膜梭菌所致疾病的候选菌株。

临床生物化学检验实践操作技能评价体系探讨

医学检验是一门发展迅速、多技术、多学科交叉的实践性很强的学科,实验教学是完成这门课程的重要环节,而要提高学生的实践能力、创新能力和综合素质,必须进行严格的实践操作技能评价。但在目前的临床生物化学检验课程中,测定的实验项目繁多,测定的方法多,不利于老师对学生进行实践操作技能评价。笔者在教学过程中,根据教学大纲的要求对临床生物化学检验课程进行了适当的改革和总结,并探索出了一个较好的实践操作技能评价体系。

医学检验专业《分子诊断学》课程调查分析

目的:分析医学检验专业开设的分子诊断学课程的重要性和必要性。方法:对本校已开设分子诊断学课程的2004级和2005级医学检验本科班的学生进行问卷调查,其内容是学生对分子生物学基础知识感兴趣程度和接触程度;开设分子诊断学课程的必要性;如何上好分子诊断学课程。结果:学生对分子生物学基础知识感兴趣程度为88.31%,接触程度92.21%;学生认为检验系开设分子诊断学课程必要的为85.71%。学生认为要上好分子诊断学,需要增设实验课为75.32%,增加课时的为89.61%。结论:医学检验专业开设分子诊断学课程是很重要的。

某细胞培养室污染调查及污染源鉴定结果分析

目的调查某细胞培养室污染情况,并进行污染源的调查与鉴定,以了解细胞培养污染状况并帮助制定行之有效的防控方案。方法对某高校及附属医院细胞培养室相关人员共74例进行调查问卷,同时对已被污染的细胞进行污染源的鉴定分析。结果该细胞培养室污染的比例为83.8%,各种污染源均可见,其中以微生物污染最常见比率为78.4%。格兰染色以阳性菌为多见。结论该细胞培养室污染情况较严重,认清污染的来源,采取有效措施,对于污染的预防及控制起到至关重要的作用。

酸奶对心肌梗死大鼠自由基代谢影响的研究

目的研究酸奶对心肌梗死鼠的抗氧化作用。方法采用异丙肾上腺素复制大鼠心肌缺血模型,测定心肌组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果通过饮食酸奶,能显著增加心肌梗死模型大鼠心肌组织的SOD活性,降低MDA含量。结论饮食酸奶对心肌梗死鼠有一定的抗氧化作用。

宁夏葡萄副产品中白藜芦醇含量测定及比较

目的:测定宁夏葡萄副产品中白藜芦醇的含量,提高葡萄副产品的利用率。方法:采用紫外分光光度法测定白藜芦醇的含量,检测波长为306nm。结果:宁夏葡萄副产品中白藜芦醇的含量由高到低依次为叶片>果皮>梗>种籽,葡萄品种叶片中白藜芦醇含量最高,其次为葡萄皮、梗、籽,尤其是13年赤霞珠中各组织白藜芦醇含量最高;同品种之间比较发现,蛇龙珠葡萄皮中白藜芦醇含量较高,达2.57mg/g。结论:葡萄皮、叶等组织中白藜芦醇含量丰富,加以利用可变废为宝,有利于提高葡萄副产品的利用价值。

临床生物化学检验教学中培养学生创新能力探索

临床生物化学检验是医学检验专业的主干课程之一,也是一门发展非常迅速的重要的应用性学科。如何加强对学生创新能力的培养,是近年来不断探索和研究的一项工作。我们提出了一些设想和探索,贯穿于整个临床生物化学检验教学的理论和实验改革当中。在理论中针对每章节的特点设计病例,采用以问题、案例为中心的讨论式教学的方法或引导法等方式进行教学,在实验中通过基本操作技能训练、综合性实验和设计性实验,在考核中尝试将综合性实验、设计性实验等,按一定的比例计入课程总成绩,及在其他方面加强对学生创新能力的培养。

市售马铃薯转基因成分检测

[目的]检测市售马铃薯转基因成分。[方法]采用CTAB法提取样品的基因组DNA,分别设计花椰菜花叶病毒35s启动子(pro-moter from canliflomer mosaic virus,CaMV 35s)和胭脂碱合成酶3’转录终止子(nopaline synthase lerminator,NOS)作为特异性引物,然后对基因组DNA进行PCR扩增检测,根据扩增后产物的琼脂糖凝胶电泳图可分析出其中是否含有转基因成分。[结果]10份马铃薯样品中5份检测出含有转基因成分,占检测样品的50%。[结论]由结果推断出市场上销售的转基因马铃薯占总马铃薯销售量的50%左右。

C型产气荚膜梭菌BL21(DE3)pXETAB2B1三价灭活苗的免疫效力试验

目的研究C型产气荚膜梭菌BL21(DE3)(pXETAB2B1)三价灭活苗的免疫效力。方法制备C型产气荚膜梭菌BL21(DE3)(pXETAB2B1)三价灭活苗,免疫接种奶牛及ICR小鼠,分别进行静脉采血,观察抗血清中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物的情况。结果奶牛抗血清中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物达到60%;ICR小鼠抗血清中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物达到100%。结论C型产气荚膜梭菌BL21(DE3)(pXETAB2B1)三价灭活苗能中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物。

基于智能合约的云会计数据安全

随着云计算技术的发展和普及,云会计已成为当前财务工作的主流模式。然而,由于云计算模式中数据存储、传输等环节存在的风险,云会计面临着数据安全问题。针对云会计数据的安全问题,提出了基于智能合约的云会计数据安全模型。首先,介绍了现有云会计数据的安全问题,然后详细叙述了智能合约的基本概念和运作流程。其次,提出了基于智能合约的云会计安全框架,并对该框架进行了论证和分析。

提高本科生临床应用能力的分子诊断学教学探索

通过组建专门的项目教学团队,利用现有《分子诊断学》课程教学计划和安排,以提升本科生临床应用能力,适应当前医学检验技术专业的就业需求为目标,开展核酸提取扩增、临床基因扩增实验室建设及质量控制等方面基础知识讲解和实验操作,阐述教学中的做法并就教学效果进行讨论分析,旨在提高学生生物安全意识,培养专业素质高,理论基础扎实,临床技能强的创新型人才,有效提升临床检验技术人才培养质量。

奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪测定电解质项目的性能验证研究

目的：评价奥林巴斯 AU2700全自动生化分析仪测定电解质项目的分析性能。方法：按照美国临床实验室标准化组织（CLSI）指南文件和其他相关文献的实验方案,分析奥林巴斯 AU2700全自动生化分析仪测定电解质项目的精密度、准确度、线性及可报告范围等。结果：AU2700全自动生化分析仪检测K＋批内CV分别为1.84%、0.89%,批间 CV 分别为2.08%、4.20%,Na＋批内 CV 分别为0.05%、0.94%,Na＋批间 CV 分别0.64%、0.81%,Cl-批内 CV 分别为0.88%、0.75%,Cl-批间 CV 分别为1.12%、1.21%,均满足CLIA88标准。正确度：检测结果在室间质评的允许范围。线性：K＋ Y=1.0085X-0.0312,a=1.0085,r 2=0.99；Na＋ Y=9998X-0.0055,a=0.9998,r 2=1；Cl- Y=0.9895X＋1.8413,a=0.9895,r 2=0.99。可报告范围：K＋0.68-11.8 mmol/L,Na＋37-288.6 mmol/L,Cl-37.1-246.6 mmol/L。结论：奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪检测电解质项目在精密度、准确度、线性范围等方面均达到了生物化学检验实验室的要求,可用于临床标本检测。