抑制肿瘤血管生成治疗肿瘤的研究进展

抑制肿瘤新生血管生成是治疗肿瘤的新途径。目前的研究重点是通过抑制内源性促血管生成因子 ,利用内源性血管生成抑制因子和外源性血管生成抑制因子来抑制血管生成。

细胞周期特异性Survivin启动子在胶质瘤细胞T98G中活性的初步研究

目的 研究在细胞周期G2 /M期特异性的Survivin基因启动子在多型性胶质母细胞瘤 (glioblastomamultiform ,以下简称胶质瘤 )细胞株T98G中的活性 ,为该启动子在胶质瘤靶向性基因治疗中的应用提供依据。方法 用RT PCR法检测Survivin基因在胶质瘤细胞株T98G及正常肝中的表达 ,用转染荧光素酶报告基因的方法 ,比较不同长度的Survivin基因启动子在非同步化和阻断于G1期细胞中的活性。结果 Survivin基因在T98G胶质瘤细胞中表达 ,而在正常肝细胞中不表达。Survivin基因启动子在非同步化细胞中的活性大约是G1期细胞中的 11倍。结论 Survivin启动子在转录水平上可以选择性地使报告基因在胶质瘤细胞中表达 ,这使它成为一个在胶质瘤基因治疗中有潜力的启动子。

亚甲基四氢叶酸还原酶多态性的临床应用研究进展

叶酸属于B族维生素,是体内极为重要的甲基供体,参与DNA合成和修复,维持细胞内正常甲基化和基因组稳定性。叶酸主要存在于食物中,人体无法依靠自身合成。叶酸摄入不足或代谢障碍均会引起叶酸缺乏,进而引起各种疾病。亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是叶酸代谢通路中的关键酶之一,其中位于MTHFR上的rs1801131和rs1801133的多态性与肿瘤的发生和用药、心脑血管疾病的发病风险、女性优生优育以及新生儿先天性缺陷等密切相关。

应用Bhas42细胞实验检测佛波酯对22个肿瘤促长基因表达的影响

目的探索目标基因与Bhas42细胞转化试验结合成为检测化合物致癌促长活性新的筛选方法的可能性。方法取促癌化合物佛波酯(TPA)作为阳性物,采用Bhas42转化细胞作为实验体系。接种当日为第0天(d 0),d 4将培养基换成含有TPA 0.05 mg·L-1或0.5%DMSO的DF5F培养基,在加入相应受试化合物的24,48及72 h后取样。样品经过预处理后对抽提的RNA进行质量评价,采用RT-PCR方法检测Ccnb1,Rif1,Mcm3,Chek1,Jun,Fosl1,Hells,Vegfa,Stmn1,Prl2c3,Scarb1,Phex,Orm1,Orm2,Nup54,Slc2a1,Il1rl1,Rad51ap1,Tfrc,Ab1,Car13和Pik3r5在不同时间点的表达。结果与阴性对照组相比,TPA组加样后24 h有3个基因出现上调,分别为Vegfa,Il1rl1和Pik3r5;加样后48 h有11个基因出现上调,分别为Chek1,Hells,Mcm3,Rad51ap1,Vegfa,Il1rl1,Prl2c3,Slc2a1,Tfrc,Stmn1和Rif1;加样后72 h有10个基因出现上调,分别是Chek1,Hells,Rad51ap1,Vegfa,Il1rl1,Prl2c3,Slc2a1,Tfrc,Stmn1和Ccnb1。结论 TPA处理后所选取的22个促长阶段相关基因的表达在不同时间点呈现出不同的敏感性,说明22个肿瘤促长基因与Bhas42细胞体系结合,有望成为一种更快捷高速的致癌性筛选方法。

基因工程技术制备以组蛋白为核心的新型基因导入系统

目的 构建以组蛋白为核心的新型靶向性基因导入系统。方法 将各功能肽与核心区成分设计成融合基因 ,在大肠杆菌中加以表达 ,获得的融合蛋白通过静电效应与DNA结合形成靶向性的基因导入系统 ,通过体内外报告基因导入试验检测生物学活性。结果 经体内外基因导入实验证明 ,制备的融合蛋白能将外源报告基因靶向性地导入肿瘤细胞和组织。结论 运用基因工程方法制备的融合蛋白适合大规模生产 ,便于质控 ,为靶向性基因导入系统应用于基因治疗提供了新的思路。

胃镜下采集的疑似胃癌组织的基因表达谱分析

背景:基因芯片等高通量的研究手段已在肿瘤研究中得到广泛的应用,胃癌方面的研究主要集中在手术切除标本,对胃镜下取得的疑似胃癌组织的基因表达比较研究则较少报道。目的:比较胃镜下取得的病理诊断为胃癌和非癌样品的基因表达谱特征,为识别胃癌早期诊断的指标和疾病的分子分型奠定基础。方法:内镜下取47例胃癌疑似病变组织和对应非病变组织,经病理学诊断为胃癌28例,非癌病变19例。提取RNA,采用含14592个点的人cDNA芯片,经RNA放大技术进行基因表达谱的检测,检测结果采用GeneSpring软件分析,数据标准化用局部加权回归分析(LOWESS)处理,胃癌和非癌两组样品的组内和组间差异的显著性分析应用差异显著性分析(SAM)方法。结果:以30%样品中的表达调节水平大于1.5倍作为差异基因筛选标准,胃癌组表达上调的基因有133个,下调的有143个。非胃癌样品中有51个基因表达上调,22个表达下调,其中分别有18个上调基因和13个下调基因与胃癌组相同。组间差异分析筛选出40个基因,其表达调节可以由之进行胃癌和非癌组样品的区分。结论:基因表达谱芯片技术可以有效地应用于识别胃癌和非癌样品中的差异表达基因,并可用于肿瘤发病机制和分子分型的研究。

谷胱苷肽 S 转移酶 T_1基因缺失与肝癌易患性关系的研究

从来自广西河北两地肝癌病例对照研究对象的血凝块标本提取ＤＮＡ，用ＰＣＲ法检测谷胱苷肽Ｓ转移酶Ｔ１和Ｍ１基因。结果显示：在两地对照人群中ＧＳＴＴ１基因缺失比例为３５％，而在两地肝癌病例中其缺失比例为５５％，ＯＲ值为２．３０（９５％ＣＩ１．０６～４．９９）。比较肝癌病例和对照ＧＳＴＴ１与ＧＳＴＭ１联合基因型的分布情况发现，至少有一种基因缺失者较两种基因均存在者患肝癌危险增加了３．７倍。提示ＧＳＴＴ１基因的多态性与个体肝癌易患性有关。

新一代测序技术在生命科学研究中的应用

新一代测序技术又称为第二代测序技术，是对传统测序技术的一次革命性改变，其特点是测序通量高、速度快、成本低。第一台新一代测序仪在2005年上市，在不到十年的时间里，技术发展十分迅速，测序成本直线下降，已被广泛用于生命科学研究中，对生命科学研究和生物医药产业的发展将产生积极、深远的影响。本文简要概述了新一代测序技术在基因组学、表观遗传学和转录组学等研究领域中的应用。

肝脏类器官芯片在生物医学中的研究进展

肝脏类器官芯片是一种基于三维培养并搭配微流控系统的特殊芯片。肝脏类器官可依托芯片技术,在体外构建出具有三维结构的人体肝脏生理微系统。该文概述了肝脏类器官芯片在生物医学领域的最新研究成果,归纳总结包括三维肝细胞芯片、肝血窦芯片和肝小叶芯片在内的不同类型的肝脏类器官芯片特点,分析肝脏类器官芯片领域发展面临的诸多机遇和挑战,展望了肝脏类器官芯片未来的发展方向。肝脏类器官芯片技术将为人类疾病和健康领域开创新的研究途径。

血管内皮生长因子受体介导的靶向性非病毒载体的改进与体内导入实验

目的 通过构建一种有相对靶向性的基因治疗载体 ,将外源基因导入新生血管内皮细胞 ,为开展靶向于肿瘤新生血管的基因治疗奠定基础。方法 根据血管内皮生长因子 (VEGF)与VEGF受体结合位点 ,修改本实验室已有的配体寡肽GV1、GV2氨基酸序列 ,并合成了基因转移载体系统。用载体包裹外源DNA(β gal) ,进行体内实验 ,观察外源基因在体内的分布和不同时间的表达情况。结果 报告基因在心、肺、肝和肾中无明显地表达 ,脾有少量基因表达。对外源基因的表达于荷肝高转移瘤裸鼠皮下瘤周注射后第 1天起即有表达 ,至第 3天达到高峰 ,以后逐渐减少 ,至第 2 1天无表达。用载体包裹外源基因皮下注射荷瘤裸鼠 ,共 9种肿瘤模型 ,其中SK OV 3和宫颈癌细胞表达量较高 ,H12 8、BCaP 37和A375的表达较低。与免疫组化的结果基本一致。结论 两种配体寡肽GV1和GV2构建的复合体 ,对外源基因的转导效率有一定差别 。

靶向性非病毒载体介导p21^(WAF-1)基因对肝癌细胞的抑制作用

利用研制开发的靶向性非病毒载体GE7基因导入系统转导外源基因pCEP-p21WAF-1, 检验其介导p21WAF-1基因进入肝癌细胞后, 在体内外抑制肝癌细胞的生长的效率. 体外实验证明, 导入外源基因后, SMMC-7721和BEL-7402细胞的生长受到抑制, 第8天抑制率分别达到56%和66.7%. 而体内实验结果是, 荷SMMC-7721裸鼠皮下瘤周注射该基因导入系统, 转导pCEP-p21WAF-1 3周后, 实验组肿瘤的重量(平均为(0.083 ( 0.043)g)与对照组(平均为(0.281 ( 0.173) g)相比明显减小, 且在统计学上有显著差别(P < 0.05). 以上结果表明, GE7基因导入系统可以介导外源基因pCEP-p21WAF-1进入细胞内, 并在体内外抑制肝癌细胞的生长.

非病毒载体介导Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因治疗卵巢癌的体外研究

目的 探讨靶向非病毒载体GE7在卵巢癌细胞株CAOV3细胞中的转导效率 ,及其介导的Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶 (HSV1 tk) /更昔洛韦 (GCV)基因治疗系统在卵巢癌治疗中的应用。方法 构建由表皮生长因子受体 (EGFR)介导的非病毒载体GE7,分别与外源基因 [即报告基因 β 半乳糖苷酶 (β gal)和治疗基因HSV1 tk]构成载体复合物 ,体外转导CAOV3细胞 ,通过 5 溴 4 氯 3 吲哚 β D半乳糖苷 (X gal)染色、核酸分子印记杂交分析 ,观察非病毒载体GE7对外源基因 β gal及HSV1 tk基因的转导情况 ;将GCV加入转导HSV1 tk基因的CAOV3细胞 ,通过细胞生长抑制曲线、流式细胞仪分析等 ,观察其对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 β gal基因的转导效率可达 80 % ,呈瞬时表达 ;加入 10mg/L的GCV时 ,转导HSV1 tk基因的CAOV3细胞的生长抑制率可达 95 % ;流式细胞仪分析显示 ,CAOV3细胞S期比例上升 ,最高达 90 % ,凋亡指数高达 30。结论 GE7载体系统能高效地将外源基因导入CAOV3细胞 ,GE7/HSV1 tk /GCV基因治疗系统在卵巢癌治疗中可能具有良好的应用前景。

基于DNA技术的非对称加密与签名方法

结合现代基因工程技术和密码学技术设计了一个非对称加密与签名系统DNA-PKC,这是在生物密码研究领域的初步探索.类似于传统的公钥密码,DNA-PKC的密钥由加密钥和解密钥组成,加密者之间互相不能解密,只有解密钥的拥有者才能解密所有密文.不同于传统的公钥密码,DNA-PKC的密钥与密文均为生物分子实物,在应用协议等方面具有不同的要求.在安全性方面,DNA-PKC主要依赖于生物学问题而不是传统的计算困难问题,因而对未来的量子计算机的攻击免疫.

阴道念珠菌病患者阴道分泌物总RNA提取方法的研究

目的探索一种简单有效的人体阴道分泌物标本总RNA提取方法并验证其可行性。方法采用人体上皮细胞与念珠菌标准菌株的混合物（10^6：10^6），对匀浆、玻璃珠和液氮研磨三种破壁方法，纯化柱、酚两种提取方法组合产生的5种不同RNA提取方法进行比较：并将提取效果最好的方法应用于临床标本。结果5种方法均可提取出总RNA，其中，热酚法提取质量浓度最高，达到0．6546g／L，其次为RNeasy试剂盒提取方法为0．6010g/L．玻璃珠法为0．2678g／L，匀浆后TRlzol法为0．2284g／L，液氮研磨后TRlzol法为0．2115g／L。但电泳结果显示，以液氮研磨后TRlzol提取质量最好，而且标准菌株及培养细胞混合物两种细胞成分RNA均被提取，RT—PCR以及荧光定量PCR验证结果显示，该方法可以应朋于临床标本RNA提取，结论液氮研磨后TRlzol法是一种简单而有效的阴道分泌物临床标本RNA提取方法，而且提取物可以满足常规下游实验的需求。

miRNA-21在人黑素瘤细胞系A375和M14中的表达及功能初探

目的探讨miRNA-21在人黑素瘤细胞系A375、M14中的表达及对其细胞活性的影响。方法采用荧光定量PCR法，以U6基因为内参，分别检测A375、M14细胞中miRNA-21的相对含量。利用Lipofectamine^TM2000脂质体将三种浓度的miRNA-21抑制剂分别转染这两种细胞系，用CCK-8检测转染前后实验组、对照组的细胞活性。用SPSS13．0统计软件分析细胞活性的变化情况。结果荧光定量PCR法检测提示，miRNA-21在A375细胞系中的表达（2^-△CT值为1．2928±0．1509）明显高于M14细胞系（2^-△CT值为0．1894±0．1803）。miRNA-21抑制剂浓度为90nmol／L时，A375、M14细胞活性受到极显著抑制，细胞活性（R值）分别为0．7362±0．1662、0．7295-4-0．1478；当浓度为180nmol／L、270nmol／L时，A375细胞活性显著下降，R值分别为0．7248±0．3204、0．6767±0．2998，而M14细胞活性无显著变化。结论miRNA-21在A375、M14两种人黑素瘤细胞系中均有不同程度的表达。miRNA-21在A375、M14细胞系中可以促进细胞增殖，可能下调了某些肿瘤抑制因子而起到癌基因样作用。

microRNA在人皮肤黑素瘤与色素痣中共同差异表达的研究

目的筛选人皮肤黑素瘤组织中表达的已知hsa—microRNA。方法采用SBC microRNA芯片技术，将6例人皮肤黑素瘤组织总RNA分别与9例健康人色素痣总RNA混合物对比，筛选已知的468条hsa—microRNA表达情况。用qPCR分别检测这6例人皮肤黑素瘤组织中各候选hsa—microRNA的表达。将芯片和qPCR两种方法检测结果一致的候选hsa—microRNA确定为有意义的共同差异表达hsa—microRNA。结果2倍以上差异表达miRNA占所检测miRNA的12．18％～86．53％，5倍以上差异表达miRNA占1．28％～19．02％，10倍以上差异表达miRNA占0．43％～5．34％。此6例人皮肤黑素瘤中miRNA-21明显上调表达，miRNA-320和miRNA-494明显下调表达。结论人皮肤黑素瘤组织中miRNA-21明显上调表达，miRNA-320和miRNA-494明显下调表达。

高通量单细胞转录组测序发展与展望

近年来,单细胞转录组测序技术发展迅猛,为人们研究细胞的异质性及在单个细胞分辨率下理解生命体系、过程和不同疾病状态提供了有效手段。基于微流控技术发展而来的高通量单细胞转录组测序技术是实现大量细胞平行检测的主要方法。现从高通量单细胞转录组检测平台研究进展、单个细胞捕获及检测的常用方法——特别是微滴与微孔技术原理与特点、数据分析流程、数据挖掘手段、现有存在问题和未来发展方向等角度进行阐述,希望该技术对生命科学研究起到促进和推动作用。

肿瘤治疗中小分子激酶抑制剂的研究进展

激酶在肿瘤细胞的生长、增殖和凋亡过程中起着重要作用,因此,研发相关的激酶抑制剂调控相应的信号转导通路已是现今抗肿瘤药物开发的趋势。至今,已有29个肿瘤小分子激酶抑制剂经美国食品药品监督管理局批准进入临床。现就肿瘤小分子激酶抑制剂的分类和作用机理进行分析和总结,并系统阐述肿瘤小分子激酶抑制剂的研究进展和发展趋势。

溶瘤病毒在抗肿瘤临床治疗中的研究进展

近年来,溶瘤病毒因其能够特异性地在肿瘤细胞内复制并造成肿瘤细胞裂解而不影响正常细胞,已经成为非常有应用前景的肿瘤免疫治疗药物,并且受到越来越多科研和生物医药产业的重视。本文概述了溶瘤病毒的定义、分类、特性和作用机制,回顾了已经批准上市和仍在临床试验阶段的溶瘤病毒的抗肿瘤临床表现,以及溶瘤病毒联合化疗、放疗和免疫治疗等方法对异质性肿瘤和肿瘤微环境的临床治疗效果。本文还讨论了这些联合治疗策略对改善恶性肿瘤耐药效果的临床评估结果。

Oligo基因芯片和小鼠模型研究外阴阴道念珠菌病的发病机制

目的探讨外阴阴道念珠菌病的发病机制。方法将来自感染组、阴性对照组及空白对照组小鼠模型的标本分别与自制的疾病相关因子基因表达谱芯片杂交，将感染组与对照组中各疾病相关因子信号值进行比较，筛选出表达升高或降低2倍的因子，并绘制成差异基因表达谱进行分析。结果与空白对照组相比在感染组中可以出现表达上调的基因有39个，可以出现表达下调的基因有4个。在宿主免疫方面，炎性趋化因子普遍表达增高，适应性免疫调节因子IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、NF—κB以及TGF—β均有不同程度增强，全部标本天然免疫成分TLR4的表达增高，TLR2仅表达增高于1／3的标本。在致病菌株毒力方面，菌丝生成调控因子EFG1、分泌型天冬氨酸蛋白酶（SAP）2、4、5、6、10、脂酶（LIP）2、LIP4和菌丝胞壁蛋白（HWP）1表达显著增强。其中，单核细胞趋化蛋白（MCP）-1、巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α和MIP-2、IL-1、Toll样受体（TLR）4、LIP4、HWP1在全部感染组标本中显著增高，这些因子涉及白念珠菌胞外水解酶、菌丝形成、表型转换及宿主天然免疫过程。结论适应性免疫的功能不足以及致病菌株的毒力增强均参与小鼠阴道念珠菌病的发病机制，TLR4在该病局部宿主免疫机制中可能起较为重要的作用。