山羊PGCs用于分离与克隆类ES细胞

选择健康成年本地白山羊 ,自然发情、配种后 4 4 d取胎儿 ,以传统的原始生殖细胞 (PGCs)分离与克隆的方法和PGCs与其胎儿生殖嵴周围组织细胞共同培养的方法获得类胚胎干细胞 (类 ES细胞 ) ,并对山羊类 ES细胞在不同饲养层上进行培养。结果表明 ,采用传统方法和共培养的方法并添加细胞因子均能分离获得类 ES细胞。分离获得的类ES细胞在同源 (山羊 )胎儿细胞饲养层上生长效果较好 ,可传 4代或 5代 ,而在小鼠原代成纤维细胞饲养层上类 ES细胞仅传 3代。另外 ,共培养不添加细胞因子组仅获 1个类 ES细胞集落 。

家兔胚胎细胞核移植的研究

研究改进了兔胚胎细胞核移植的技术体系 ,并对核移植胚胎的体外培养以及克隆胚胎的体内发育进行了试验。结果表明 :卵母细胞去核率为 88.9% (8/ 9) ,重组胚融合率为 76 .7% (176 / 2 2 9) ,将融合的重组胚与兔胎儿成纤维细胞共同培养 ,其 2～ 4细胞发育率、8～ 16细胞发育率以及桑椹胚和囊胚的发育率分别为 6 5 .7% (2 3/35 )、2 8.6 % (10 / 35 )、2 2 .9% (8/ 35 ) ,显著高于“TCM - 199+10 %FCS”系统培养的 43.3% (13/ 30 )、2 6 .7% (8/30 )、16 .7% (5 / 30 )。 16及 32细胞期卵裂球的重组胚可发育到产仔 ,将 111枚重组胚移植给 9只同期处理的受体母兔 ,2只妊娠 ,其中 1只产出 2只足月克隆仔兔 ,1只在产前 1周 (妊娠 2 2d)

体细胞克隆技术与我国奶牛业发展

自 1997年“多莉”出生后 ,体细胞克隆成为各国学者研究的热点 ,其技术也不断的完善和成熟 ,并逐渐显示出其巨大的经济价值和应用潜力。我国奶牛业的发展远落后于其他发达国家 ,而且面临加入 WTO后的激烈竞争。像 MOET、IVF等技术在短时间内不能改变我国奶牛业落后面貌的情况下 ,体细胞克隆技术不失成为一条有效途径。我国是独立掌握此技术的国家之一 ,某些技术处于国际前沿 ,在目前条件下 ,利用体细胞克隆发展我国奶牛业 ,使其率先在我国实现产业化 。

哺乳动物PGCs用于多能性干细胞培养的研究进展

综述了哺乳动物原始生殖细胞 (PGCs)研究进展 ;归纳了PGCs用于多能干细胞培养的影响因素 ;阐述了PGCs用于干细胞培养研究中存在的问题及其前景。

哺乳动物细胞核移植有关机理研究进展

综述了哺乳动物细胞核移植的有关机理 ,包括哺乳动物早期胚胎基因组的转录激活与分化 ,体细胞核全能性的恢复 ,核受体卵母细胞的激活和MPF在细胞周期中的变化及其调节细胞周期的机理。

哺乳动物PGCs用于胚胎干细胞培养的研究

本文综述了哺乳动物原始生殖细胞 (PGCs)的研究进展 ;归纳了影响用 PGCs分离胚胎干细胞培养的因素 ;阐述了在 PGCs用于胚胎干细胞培养研究中存在的问题及应用前景。

哺乳动物细胞核移植(克隆)研究进展(上)

细胞核移植是一种有效的动物克隆技术。本文谨将哺乳动物胚胎核移植和体细胞核移植技术及其历史现状、价值意义、存在问题和应用前景作以综述和评述。

热应激对荷斯坦种公牛精液品质的影响及机理

用 5头荷斯坦种公牛研究了热应激对其生理常值、精液品质、血清生化指标、精清生化指标的影响。结果表明 :(1)热应激可造成种公牛精液品质显著下降 ,使原精活力、冻精活力、精子密度、活精子百分数和顶体完整率分别比春季下降 3.13% (P<0 .0 1)、1.11% (P<0 .0 1)、34.8% (P<0 .0 1)、15 .0 % (P<0 .0 1)和 17.8% (P<0 .0 1) ,精子畸形率比春季上升 2 5 .5 % (P<0 .0 1)。(2 )夏季慢性热应激使荷斯坦种公牛的直肠温度和呼吸频率极显著高于春、秋、冬 3个非热应激季节 (P<0 .0 1)。 (3)夏季荷斯坦种公牛血清睾酮、T3、皮质醇和促黄体素的含量分别为 3.4 1ng/ L、1.2 9ng/L、5 .0 5 ng/ L和 4 5 .11ng/ L,与非热应激季节相比 ,均处于较低的水平。 (4)热应激可显著降低血糖和血清钠、钾、钙、镁水平 (P<0 .0 1) ,使血清 GPT、GOT处于最高水平 (P<0 .0 1)。 (5 )夏季荷斯坦种公牛精清睾酮含量仅为 4 .31ng/L,极显著低于非热应激季节 (P<0 .0 1)。 (6 )热应激造成荷斯坦种公牛精清钾、钙、镁处于最低水平 (P<0 .0 1) ,精清AL P、ACP处于最高水平 (P<0 .0 1) ,使精清钠由春季至夏季呈显著下降趋势。上述结果显示 :热应激使体内微环境发生了显著变化 ,抑制了下丘脑 -垂体 -睾丸轴的功能 ,从而影响了精子的生成?

应用生殖激素对小尾寒羊同期发情效果研究

应用羊用孕酮栓、孕马血清促性腺激素和氯前列烯醇相结合的方法对 99只空怀小尾寒羊和 36只哺乳母羊 (产后 2 5～ 35d)进行同期发情试验研究。结果表明 ,99只空怀母羊在 2 4h内的同期发情率达到 81 8% ,4 8h内为 89 9%。孕酮栓在空怀母羊阴道内埋置不同时间 (12d与 14d)的同期发情率无显著差异 (P >0 0 5 ) ;对空怀母羊注射不同剂量 (330IU/只和 2 5 0IU/只 )孕马血清促性腺激素对羊的同期发情率的影响无显著差异 (P >0 0 5 )。 36只哺乳母羊在 2 4h与 4 8h内的同期发情率均为 80 6 % (2 9/36 ) ,对哺乳母羊注射孕马血清促性腺激素 2 5 0IU/只的同期发情率为 90 0 % (18/2 0 ) ,优于注射 330IU/只的同期发情率 6 8 8% (11/16 )。

影响波尔山羊超排效果的因素

对204只(次)波尔山羊采用CIDR+FSH+PG法超数排卵(以下简称超排),发情配种后第6天采用手术法从子宫角采胚,采胚成功率为92.16%(188/204),头均获胚(16.68±7.89)枚,其中头均获可用胚(14.11±8.37)枚,可用胚率84.66%(2 654/3 135).对不同国家产FSH、不同剂量FSH、注射LRH+P4、不同季节、重复超排、左右侧卵巢等因素对波尔山羊超排效果的影响进行了研究.结果表明,以日本和国产(动物所)FSH超排效果为佳,头均获可用胚分别为(15.66士8.26)枚(n=89)和(15.39±6.91)枚(n=23);日本产FSH 14～16 mL组效果最佳,头均获可用胚(19.63±8.96)枚(n=19);注射LRH+P4组头均获可用胚(16.04土8,84)枚(n=80),极显著高于对照组(12.16士7.68)枚(n=62);春季、秋季、冬季超排头均获可用胚分别为(10.86±5.10)枚(n=7)、(11.30土8.29)枚(n=23)、(11.00±6.17)枚(n=10),差异不显著;重复超排(间隔12月)第1次头均获可用胚(15.08±5.12)枚(n=26),第2次头均获可且胚(16.92±8.32)枚(n=26).

山羊类ES细胞的分离与克隆

采集山羊交配后 6～ 8d的桑椹胚、囊胚和孵化囊胚 ,将桑椹胚和囊胚分别放在小鼠原代胎儿成纤维细胞(PMEF)饲养层和同源原代胎儿成纤维细胞 (PGEF)饲养层上比较其脱带时间及脱带率。脱带后 ,将各自一半胚胎切割 ,把含 ICM的半胚分别放在相应饲养层上进行培养 ,另一半整胚在各自饲养层上继续培养 ,而孵化囊胚直接于PGEF饲养层上培养。当 ICM增殖一定程度时进行传代 ,以比较其类 ES细胞分离与克隆的效果。结果表明 ,在 2种不同饲养层上 ,囊胚的脱带时间均短于桑椹胚 ,囊胚的脱带率均高于桑椹胚 ,而饲养层的种类对胚胎的脱带时间以及脱带率影响不大。脱带切割囊胚不论在 PMEF还是在 PGEF饲养层上 ,其贴壁时间均短于脱带整胚及孵化囊胚 ,而贴壁率高于脱带整胚 ,与孵化囊胚相似。脱带整胚及脱带切割胚在 PMEF饲养层上所获类 ES细胞只能维持 3代 ,而在PGEF饲养层上 ,脱带切割半胚和孵化囊胚所获类 ES细胞传至 5代。由此认为 ,对脱带后的胚胎进行切割处理 ,有利于 ICM的贴壁和增殖 ;应用同源原代胎儿成纤维细胞饲养层培养系统 ,有利于类

利用孕酮栓+PMSG+PG法对羊同期发情效果的试验研究

利用孕酮栓+PMSG+PG法对大群体羊进行同期发情处理,比较不同季节、地区、埋栓时间及品种对同期发情效果的影响。结果表明:该方法在春季、秋季和冬季对山羊均可获得较好的同期发情效果,并且发情时间主要集中于处理结束后的0～24 h和25～48 h;对于山区及平原的山羊,0—24 h及25—48 h同期率差异不显著(P>0.05);埋栓时间长短对于山羊在0—24 h、25～48 h及0～72 h的同期率差异均不显著(P>0.05);绵羊同期效果显著低于山羊(P<0.05)。

山羊类胚胎干细胞的分离、克隆研究

从胚胎发育阶段、饲养层、生长因子等方面对影响山羊胚胎干细胞的分离、克隆的因素进行了研究。结果表明 :囊胚期可作为分离山羊胚胎干细胞收集胚胎适宜阶段 ;小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)和山羊胚胎成纤维细胞 (GEF)对山羊类ES细胞分离效果影响不明显 ;生长因子LIF和SCF配合使用可分离到山羊的类ES细胞 ,并传至第 4代。

波尔山羊育肥期能量和蛋白质营养需要的研究

精选 1 35只 3月龄断奶的波尔山羊公羔分成 3组 ,每组 45只 ,每组设 3个重复。设计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组试验日粮的波尔山羊目标增重水平分别为 2 50 ,2 0 0和 1 50 g/d。结果 3组日增重分别达 2 2 3 ,1 79和 1 50g/d。根据Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组试验数据得出波尔山羊干物质采食量 (DMI,g/d)、粗蛋白质采食量 (CPI,g/d)、瘤胃降解蛋白 (RDP ,g/d)、瘤胃非降解蛋白 (UDP ,g/d)及消化能采食量 (DEI ,KJ/d)与羔羊日增重 (ΔW ,g/d)的回归关系 ,并根据回归方程求出波尔山羊育肥期 (3～ 5月龄 ) 0～ 2 50 g日增重的能量和蛋白营养需要量 。

提高波尔山羊超排效果及移植妊娠率研究初报

以波尔山羊为供体、本地白山羊及其用萨能奶山羊改良的高代杂种羊为受体,开展提高超排效果及移植妊娠率研究。结果表明:在提高超排效果研究方面,注射P4+LRH-A3组较对照组头均获胚胎数及可用胚胎的百分率分别提高5.4枚和17.7％;注射P4组、注射LRH-A3组较对照组头均获可用胚胎的百分率分别提高18.99％和14.87％。在提高受体移植妊娠率研究方面,移单胚、双胚、三胚的受体羊移植妊娠率组间差异不显著,但移三胚的受体羊产羔率较移单胚、双胚分别提高66.92％和36.09％,差异极显著;受体羊移入胚胎发育阶段相同的1枚或2枚同等级胚胎(A级或B级),妊娠率和产羔率无显著影响,但移入2枚A级囊胚受体羊的产羔率较移入2枚A级桑椹胚的产羔率高36.23％,差异显著;移植受体的一侧卵巢上有3个以上黄体的妊娠率显著高于1个黄体和2个黄体,分别高31.55％和29.23％,差异显著。移入胚胎的受体羊卵巢上黄体和卵泡同时存在,将卵泡刺破使卵泡液流失,与卵巢上只有黄体存在的受体羊移植妊娠率无显著差异;向子宫角方向和逆子宫角方向移植胚胎对受体羊移植妊娠率无显著差异。

提高萨福克羊超数排卵的效果研究

对 5 4只 (次 )萨福克羊采用CIDR +FSH +PG法进行超数排卵 (以下简称超排 ) ,发情配种后第 6天从子宫角采胚 ,只均获胚数和只均获可用胚数分别为 (6 89± 2 6 2 )枚 (372 / 5 4 )和 (6 0 7± 2 2 8)枚 (32 8/ 5 4 )。并对不同国家产FSH ,注射LRH -A3 +P4,重复超排 ,左、右侧卵巢等影响萨福克羊超排效果的因素进行研究 ,结果表明 ,以加拿大和日本FSH超排效果最好 ,只均获可用胚分别为 (9 2 0± 1 6 4 )枚 (n =10 )和 (7 75± 1 6 7)枚 (n =16 ) ;注射LRH -A3 +P4组只均获可用胚(7 2 5± 1 18)枚 (n =16 ) ,极显著高于对照组 (4 11± 1 38)枚 (n =9) ;重复超排 (间隔 12月 )第 2次超排只均获可用胚(9 19± 3 39)枚 (n =16 ) ,明显高于第一次只均获可用胚 (6 0 0± 3 2 7)枚 (n =16 ) ;左右侧卵巢对萨福克羊超排效果无显著差异。

羊胚胎移植手术速眠新麻醉意外的处理

速眠新注射液（又称846合剂）是一种由保定宁、氟哌啶醇和盐酸双氢埃托啡合成的复方麻醉注射液，具有高效、低毒、安全性好、实用性强等特点，已广泛应用于兽医临床上，对多种动物进行手术麻醉或药物保定。经过在羊胚胎移植手术巾的应用，取得了满意效果，但也有发生一些麻醉意外的情况。现介绍如下，供同行参考。

杜泊羊胚胎移植试验

48只杜泊绵羊供体用促卵泡素(FSH) 进行超排处理, 用手术法采胚, 39只羊共获250枚可用胚, 头均获可用胚为6 41 ( 250 /39 ) 枚,不同产地FSH及供体年龄对超排效果影响差异不显著(P>0 05)。将250枚可用胚植入209只小尾寒羊受体中, 产羔101只, 产双羔受体10只,产羔率为48 33% (101 /209)。结果表明: 移三胚、双胚的受体羊产羔率明显高于移单胚的产羔率, 差异极显著(P<0 01 ); 移植受体的移入侧卵巢上有3个及以上黄体的受胎率高于1个黄体和2个黄体, 但差异不显著(P>0 05); 不同饲养管理水平下羔羊初生重差异显著(P<0 05 ),但受胎率无显著差异。双羔平均初生重较单羔低0 58kg, 差异显著(P<0 05); 双羔成活率较单羔成活率低25 6%, 差异极显著(P<0 01 );单羔妊娠期较双羔长, 差异显著(P<0 05)。

提高波尔山羊胚胎移植妊娠率研究

本文就波尔山羊胚胎质量、胚胎发育阶段、胚胎数量、受体卵巢黄体数、受体注射LRH-A3、供、受体发情同期化程度以及胚胎移植的方向等因素与受体移植妊娠率的关系进行了研究。结果表明:移植囊胚较移植1枚B级桑椹胚妊娠率高;A级桑椹胚妊娠率显著高于移植1枚B级桑椹胚(P【0.05);移植2枚B级桑椹胚妊娠率比移植1枚B级桑椹胚的高39.4%(P【0.05);受体注射LRH-A3有助于提高妊娠率;供、受体发情同步差在48 h以上组妊娠率显著低于0~24 h和24~48 h组(P【0.05);向子宫角前端方向的移植妊娠率比向子宫角基部方向的高12.2个百分点。