2014年中国KRAS基因突变检测室间质量评价

目的为保证KRAS基因突变检测质量，加强所使用试剂和方法的性能验证，本研究对2014年中国KRAS基因突变检测室间质量评价的总体情况及存在问题进行了分析和讨论。方法2014年两次室间质评样本盘均包含5支样本。要求各参评实验室收到样本后在规定的时间内检测样本并将检测结果上传至向中心数据库。依据回报结果计算各实验室和各检测试剂的成绩，汇总和分析每份样本的总体符合率、假阴性率和假阳性率。结果2014年两次室问质评分别收到58份和57份有效回报结果。检测结果完全正确实验室分别为79．31％（46／58）和94．73％（54／57）。阳性样本总体符合率为93．53％（217／232）和96．49％（165／171），阴性样本总体符合率为100％（58／58）和98．25％（112／114）。样本检测假阴性率分别为1．29％（3／232）和0％，假阳性率分别为4．14％（12／290）和3．15％（9／285）。结论各实验室在KRAS基因突变检测总体符合率上有显著提高，但假阳性和假阴性结果是影响KRAS基因突变检测的主要问题。各实验室需要标准化基因突变检测流程，严格执行扩增产物污染防治措施；各试剂厂家需要通过改良试剂探针设计，优化结果判读标准，最终提高KRAS基因突变检测质量。

全国新型冠状病毒德尔塔变异株核酸检测室间质量评价

目的明确我国现有核酸检测试剂对新型冠状病毒德尔塔变异株的适用性,了解全国临床实验室对德尔塔变异株的检测能力。方法采用基因工程方法制备无生物传染危险性的噬菌体病毒样颗粒模拟样本,发放到全国8488家实验室,开展全国新型冠状病毒德尔塔变异株核酸检测室间质量评价。样本盘包括3支不同浓度的德尔塔变异株样本(7.5×10^(2)、1.5×10^(3)、6.0×10^(3)拷贝/ml)、1支非变异株弱阳性样本(7.5×10^(2)拷贝/ml)和1支阴性样本。计算实验室检测不同浓度德尔塔变异株样本的符合率、同等浓度水平的德尔塔变异株和非变异株样本的符合率,以及使用实验室数≥100家的各检测试剂对不同浓度德尔塔变异株样本的检测符合率、同等浓度水平的德尔塔变异株和非变异株样本的检测符合率。结果本次室间质量评价共计收到8127份回报结果,成绩合格的实验室占98.77%(8027/8127)。样本的总符合率为99.64%(40490/40635),阴性符合率为99.73%(8105/8127),阳性符合率为99.62%(32385/32508)。德尔塔变异株阳性样本符合率随浓度减少相应降低。同浓度(7.5×10^(2)拷贝/ml)水平的德尔塔变异株和非变异株样本符合率分别为99.41%(8079/8127)、99.51%(8087/8127),差异无统计学意义(P=0.392)。使用实验室数≥100家的各检测试剂的样本总符合率、阴性符合率和阳性符合率均>98%,对7.5×10^(2)拷贝/ml的德尔塔变异株和非变异株样本检测的符合率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论德尔塔变异株未影响我国现有核酸检测试剂的适用性。临床实验室对德尔塔变异株和非变异株具有同等检测能力,但少部分实验室对弱阳性样本的检测能力需进一步提高。

循环肿瘤DNA检测的临床应用和挑战

循环肿瘤DNA(ctDNA)在肿瘤药物疗效预测、耐药监测、高危人群筛查、鉴别诊断、微小残余病变监测和预后判断等方面都展现出潜的在应用价值。其中基于ctDNA特定基因突变的标志物已写入部分肿瘤的临床诊疗指南,用于预测肿瘤药物疗效和监测耐药,国内外也有少量批准的伴随诊断试剂用于临床实验室检测。但是,大部分ctDNA相关标志物的临床有效性仍然处于医学研究阶段。实验室自建方法(LDT)的建立和性能确认,也是目前ctDNA临床应用亟需解决的问题。目前的ctDNA临床应用,是机遇和挑战并存的。

高通量测序技术临床规范化应用北京专家共识(第一版肿瘤部分)

随着个体化医学的发展和“精准医学”概念的提出,肿瘤药物治疗发展迅速,临床研究逐渐发现并证实更多与药物治疗疗效预测相关的基因突变[1]。传统的基因突变检测方法如Sanger测序、焦磷酸测序和实时荧光PCR等仅能对单个基因,或者单个基因的部分外显子突变进行检测,采用上述传统基因突变检测方法同时检测多个基因,一则需要的样本量大,其次需要更长的检测时间和更大的工作量。高通量测序(HTS)即下一代测序(NGS),能够同时对上百万甚至数十亿个DNA片段进行测序,可实现在较低的成本下,一次对多至上百个肿瘤相关基因、全外显子以及全基因组进行检测,而且需要的样本量并不增加。