网络药理学筛选天麻素防治糖尿病的分子机制

目的:基于网络药理明确天麻素发挥药理作用的分子机制。方法:天麻素化学结构基于中药系统药理学数据库和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)下载,靶标蛋白筛选基于SwissTargetPrediction(http://www.swisstargetprediction.ch/)数据库,基于DAVID数据库对靶点进行生物过程(biological process,BP)、细胞成分(cellular component,CC)以及分子功能(molecular function,MF)进行分析,100个靶标通过STRING进行相互作用分析,基于Cytoscape 3.5.1中的Cytohubba模块筛选出关键基因。结果:天麻素筛选出100个靶点,共参与102条通路(P<0.05);主要参与one-carbon metabolic process(碳代谢过程)、response to drug(药物反应)、proteolysis(蛋白水解)等生物过程;主要存在plasma membrane(质膜)、melanosome(黑素体)、dendrite cytoplasm(树突细胞质)等细胞成分;分子功能上,100个靶点主要有insulin receptor substrate binding(胰岛素受体底物结合)、phosphatidylinositol 3-kinase binding(磷脂酰肌醇3-激酶结合)等,甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为关键靶点。通过分子对接明确天麻素与GAPDH有较强的结合活性(Total-Score=7.5)。结论:初步明确天麻素调节的靶点,为动物、细胞实验提供理论依据。

HPLC同时测定苗药了哥王乙醇提取物中4种黄酮类成分的含量

目的:建立同时测定苗药了哥王乙醇提取物中黄酮类4种成分槲皮苷、木犀草素、芹菜素、山柰酚含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱Diamonsil C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1 mL/min,检测波长为350 nm;柱温为30℃,进样量为20μL。结果:槲皮苷、木犀草素、芹菜素、山柰酚的检测进样量线性范围分别为5.4~270.0μg(r=0.9999),5.8~290.0μg(r=0.9997),7.1~355.0μg(r=0.9999),8.1~405.0μg(r=0.9998);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3%;了哥王乙醇提取物中黄酮类4种成分槲皮苷、木犀草素、芹菜素、山柰酚的加样回收率分别为98.41%~101.55%(RSD=1.32%,n=9)、99.02%~100.55%(RSD=0.51%,n=9)、98.36%~100.94%(RSD=1.09%,n=9)、97.68%~101.60%(RSD=1.13%,n=9)。结论:该方法操作简单、结果准确、稳定性和重复性好,适用于苗药了哥王中黄酮类4种成分槲皮苷、木犀草素、芹菜素、山柰酚的含量测定及质量控制。

基于网络药理学对妇科再造丸治疗气血虚证的机理研究

目的运用网络药理学与分子对接探究妇科再造丸治疗气血虚证的作用机制。方法通过TCMSP等数据库筛选妇科再造丸活性成分,运用SwissTargetPrediction确定成分基因靶点。运用OMIM等数据库查找疾病靶点。取成分与疾病的交集靶点导入STRING数据库构建PPI网络,筛选核心靶点。将交集靶点导入DAVID数据库进行GO功能及KEGG通路分析。最后对主要活性成分和核心靶点进行分子对接。结果得到514个妇科再造丸活性成分及1489个成分靶点基因;筛选到气血虚证疾病靶点6337个,交集靶点843个。经PPI网络分析得到8个核心靶点。GO分析主要涉及生物过程1644条、细胞组分214条、分子功能397条;KEGG通路富集得到214条。分子对接结果表明主要活性成分与核心靶点的对接构象合理。结论妇科再造丸可通过癌症通路、钙信号通路、MAPK信号通路等通路治疗气血虚证。

铁筷子挥发油对慢性脑缺血致血管性认知功能障碍大鼠的作用及机制研究

目的 探究苗药铁筷子[腊梅Chimonanthus praecox及山腊梅C. nitens的干燥根]挥发油对慢性脑缺血(chronic cerebral hypoperfusion,CCH)致血管性认知功能障碍(vascular cognitive impairment,VCI)大鼠的作用及机制。方法 采用改良的双侧颈总动脉结扎(bilateral common carotid artery occlusion,BCCAO)法建立CCH模型,将造模成功大鼠随机分为模型组及铁筷子挥发油高、中、低剂量(80、40、20 mg/kg)组和丁苯酞(63 mg/kg)组,另设假手术组,给予相应药物干预28 d,采用水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力;采用旷场实验、Y迷宫实验检测各组大鼠自主活动性和新奇事物探索能力;采用苏木素-伊红(HE)染色、Nissl染色、TUNEL染色观察各组大鼠大脑皮层及海马CA1区神经细胞结构变化、尼氏小体以及凋亡细胞数量变化;采用ELISA法检测各组大鼠血清中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)水平;采用比色法检测各组大鼠海马组织中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)和乙酰胆碱转移酶(cholineacetyltransferase,ChAT)的活性;采用Western blotting法检测各组大鼠海马组织中BDNF、酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)、磷酸化TrkB(phosphorylated TrkB,p-TrkB)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylin-ositol-3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)蛋白表达。结果 与模型组比较,铁筷子挥发油组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05、0.01),穿越平台次数和跨格次数提高(P<0.05、0.01),在新异臂所待时间延长(P<0.05);神经细胞结构的变性得到改善,脑组织中尼氏小体的数量提高(P<0.05),细胞凋亡减少(P<0.05);血清中BDNF水平及海马组织中ChAT活性升高(P<0.05、0.01),海马组织中AChE活性降低(P<0.05);海马组织中BDNF、Trk B、p-TrkB、PI3K和p-Akt蛋白表达水平均显著升高(P<0.05、0.01),Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 苗药铁筷子挥发油可以改善CCH致VCI大鼠认知功能障碍,其作用机制可能与激活BDNF/Trk B/PI3K/Akt信号通路有关。

壳聚糖与芍药甘草膏方的抗菌效果

目的筛选不同浓度和分子量壳聚糖对大肠杆菌的抑菌效果,确定膏方用壳聚糖的条件及对比壳聚糖加入前后芍药甘草膏方的抗菌效果,验证壳聚糖应用于膏方的可行性。方法考察不同浓度与分子量壳聚糖的抑菌效果,明确膏方用壳聚糖的浓度与分子量;并以大肠杆菌为指标性微生物,测定抑菌圈直径和大肠杆菌的生长曲线,探究壳聚糖对芍药甘草膏方抑菌效果的影响。结果经过对抑菌圈直径和生长曲线的测定,筛选到壳聚糖的最佳抑菌浓度为1%,最佳抑菌分子量为80000。将分子量为80000的壳聚糖加入芍药甘草膏中制备成壳聚糖浓度为1%的抑菌清膏,通过检测芍药甘草清膏与抑菌清膏对大肠杆菌生长曲线的影响可知,芍药甘草清膏本身具有抑菌作用,加入壳聚糖后抑菌作用增强。结论壳聚糖可增强芍药甘草膏方的抗菌效果。