地西他滨对NB4及K562细胞增殖和凋亡的影响

本研究旨在观察去甲基化药物地西他滨(DAC)对NB4及K562细胞增殖和凋亡的影响。用台盼蓝染色法检测DAC对NB4及K562细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测不同浓度DAC作用后细胞周期的变化和CD11b的表达水平;瑞氏染色法观察药物作用后细胞形态变化;DNA梯形片段电泳分析细胞凋亡。结果表明,DAC显著抑制NB4及K562细胞的增殖(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性,DAC作用NB4及K562细胞72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.113μmol/L和0.138μmol/L;不同浓度DAC作用72 h后,0.15μmol/L DAC处理组两种细胞株G0/G1期细胞比例均显著增高,而S期细胞比例降低(P<0.05);两种细胞株的髓系分化抗原CD11b表达水平均升高(P<0.05);两种细胞株经不同浓度DAC处理48 h后,0.15μmol/L DAC处理组均出现典型的凋亡梯形DNA条带。结论:DAC抑制NB4及K562细胞增殖,诱导细胞分化,促进细胞凋亡;DAC对NB4细胞作用更明显。

姜酚和姜酚肟对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究生姜活性成分姜酚及其衍生物姜酚肟对慢性粒细胞系K562细胞的增殖活性、细胞周期及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测姜酚和姜酚肟对K562细胞增殖活性的影响,PI单染检测其对K562细胞周期的影响,Annexin V-PI双染检测早期细胞凋亡,Hochest 33258染色观察细胞形态学的变化。结果:(1)姜酚作用于K562细胞48、72 h后,显著抑制K562细胞增殖,48 h的IC50值为15.75μg/mL,且具有时间及剂量依赖性。姜酚肟的抑制作用亦有时间及剂量依赖性,但较姜酚抑制作用弱。(2)姜酚15μg/mL组细胞周期阻滞于S期,姜酚肟作用组细胞周期与对照组比较无明显差异(P>0.05)。(3)姜酚和姜酚肟作用48 h后出现早期凋亡群,姜酚各浓度组间的早期凋亡率差异显著(P>0.05),随着药物浓度的增加凋亡率升高。(4)荧光显微间观察出现少量的细胞胞核固缩,核边集,出现凋亡小体。结论:姜酚和姜酚肟对K562细胞有显著的抑制作用,姜酚较姜酚肟抑制作用强,姜酚的抑制机制可能与影响细胞周期及诱导细胞凋亡有关,姜酚肟的抑制机制可能与诱导细胞凋亡有关。

叶酸受体在血液肿瘤细胞株的表达及叶酸-聚乙烯亚胺共聚物的制备

目的：研究叶酸受体（folatereceptor，FR）在血液肿瘤细胞表达的特点，合成叶酸-聚乙烯亚胺（FA—PEI）聚合物，探讨其作为靶向性基因输送载体的可行性。方法：用实时荧光定量PCR（realtimePCR）法检测α、β、γ3种FR在血液肿瘤细胞K562、K562／A02、U266细胞株上的表达；利用叶酸（FA）活性酯在微碱性条件下与聚乙烯亚胺（polyethylenimine，PEI）的支链氨基反应，合成FA-PEI共聚物；用葡聚糖凝胶柱G-25分离、纯化；用紫外分光光度计波长扫描法及氢核磁共振谱（1HNMR）法验证交联是否成功。结果：α、β、γ3种FR在K562、K562／A02、U2663种细胞株上均表达，其中，α-FR的表达占优势，较β-FR和γ-FR表达量高；紫外分光光度计扫描图谱在365nm处出现叶酸的特征性吸收峰；核磁共振（1HNMR）示：在2．5～3．2处出现PEI亚甲基质子的特征性化学位移，在6．5～9．0处出现叶酸芳香质子的特征性氢信号。结论：FR在K562、K562／A02、U2663种细胞株上均有较高表达；FA—PEI偶联成功，为其作为血液肿瘤治疗中1种潜在的靶向性基因输送载体提供了依据。

不同马铃薯品种(系)钾营养特性的差异

采用盆栽试验研究了28个马铃薯品种(系)的钾营养特性。结果表明:钾营养对块茎产量、水分含量和淀粉含量均存在显著影响:低钾显著降低了马铃薯块茎产量和块茎水分含量,而对淀粉含量变化因品种(系)而异。本实验筛选得到:在低钾下,N6-22的单株产量极显著高于供试品种(系)的平均值,中农Ⅷ-1、J-阿坝、疫红皮、971-12和中农Ⅷ-3显著高于平均值,以上6个品种(系)为钾高效品种(系);中农Ⅷ-2、高原七号、米拉等6个品种(系)低钾相对产量均大于95%,为耐低钾品种(系)。研究还表明,低钾胁迫导致马铃薯块茎产量的降低,主要与块茎内水分含量的减少有关。

6-姜酚诱导白血病细胞凋亡中细胞内活性氧及线粒体跨膜电位的改变

目的:研究细胞内活性氧(ROS)及线粒体跨膜电位(ΔΨm)在6-姜酚诱导慢性粒细胞白血病K562细胞、人急性T淋巴细胞白血病MOLT4细胞凋亡中的变化,探讨线粒体途径在白血病信号转导中的作用。方法:用不同浓度6-姜酚作用K562细胞和MOLT4细胞,以2,7-二氯荧光素(2,7-d ichloro fluoresce inc iactate,DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,罗丹明-123为反映线粒体膜电位荧光探针,流式细胞仪检测ROS水平和线粒体膜电位的变化。结果:不同浓度6-姜酚作用K562细胞后,ROS水平显著高于对照组(P<0.01),ΔΨm显著低于对照组(P<0.01)。姜酚作用MOLT4细胞后,ROS显著高于对照组(P<0.05)。结论:6-姜酚能诱导白血病细胞株K562及MOLT4细胞ROS水平升高,降低细胞ΔΨm,通过线粒体途径介导白血病细胞凋亡。

6-姜酚诱导K562细胞凋亡的差异蛋白表达

目的:建立白血病细胞的蛋白质二维凝胶电泳图谱,结合质谱技术鉴定,分析6-姜酚诱导K562细胞凋亡的差异表达蛋白。方法:6-姜酚作用K562细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,2D-DIGE提取细胞总蛋白,SDS凝胶扫描成像,用ImagineMaster2DPlatinum6.0软件分析差异蛋白质点,利用基质辅助激光解析即串联飞行时间质谱对候选表达差异蛋白作质谱鉴定和功能分类。结果:6-姜酚能显著抑制K562细胞增殖,其作用呈时间及剂量依赖性,24、48、72h的IC50值分别为22.86、15.75、11.18μg/mL。鉴定42个差异表达蛋白,发现35个非重复性差异,其中19个高表达,16个低表达。结论:用蛋白质组学方法筛查出与姜酚抗白血病相关的多种蛋白质,涉及氧化应激反应、细胞周期调节、细胞凋亡信号转导、蛋白质生物合成及糖代谢等。

尼古丁诱导人脐带间充质干细胞凋亡的机制

目的:探讨尼古丁作用人脐带间充质干细胞(MSCs)前后,一氧化氮(NO)、细胞内钙离子(Ca2+)的变化及α7nAchR的表达情况。方法:采用硝酸还原酶法检测不同质量浓度尼古丁作用于MSCs后24、36、48 h,MSCs内NO的释放情况;尼古丁作用MSCs 24 hf,luo-3/AM染色,流式细胞仪检测MSCs内Ca2+变化;用RT-qPCR检测尼古丁作用后α7nAchR的表达情况。结果:尼古丁作用MSCs 24、36 h后,各实验组NO水平显著高于对照组(P<0.05),呈时间、质量浓度依赖性,但在48 h,质量浓度0.8与1.0 mg/mL组,NO水平低于对照组。尼古丁作用后,各实验组质量浓度(0.6、0.8、1.0 mg/mL)的Ca2+荧光强度分别为(141.26±16.01)(、164.90±18.39)、(198.76±17.63),均高于对照组(119.30±14.14),其中质量浓度0.8、1.0 mg/mL组与对照组相比有显著差异(P<0.05)。MSCs可表达α7nAchR,且尼古丁作用后表达水平增高,呈时间浓度依赖性。结论:尼古丁可上调人脐带MSCs的α7nAchR表达,并通过刺激MSCs释放NO、升高细胞内Ca2+从而致MSCs凋亡。

骶髂关节MR特征对强直性脊柱炎生物制剂疗效的观察

目的探讨强直性脊柱炎(AS)在治疗过程中,使用MR检查研究骶髂关节(SIJ)骨髓水肿的变化与临床活动性指标变化的相关性。方法选择8例患者应用生物制剂(益赛普或恩利)。分别在用药前、后3、6、9、12个月进行检查。MR检查采用SPARCC评分,同时测量T2WI信号强度,应用BASDAI评分评估AS病情活动指数,实验室检查ESR及CPR,评估SPARCC评分变化值、T2信号强度变化值与BASDAI评分、ESR及CPR变化值的相关性,同时评估ESR及CPR变化值的相关性。结果结果显示SPARCC评分变化值与BASDAI评分变化值呈正相关(r=0.888,P<0.05);T2信号变化值与BASDAI评分变化值呈正相关(r=0.670,P<0.05)。结论 SPARCC评分变化值、T2信号强度变化值可以定量的检测AS患者的治疗效果,因而为患者提供一个可视性的观察指标。

定量CT测量强直性脊柱炎患者髋臼骨密度

目的探讨定量CT（QCT）测量成年男性强直性脊柱炎（AS）患者髋臼骨密度（BMD）的价值,研究此类患者髋臼骨量变化。方法选取25例经临床确诊的成年男性AS患者为志愿者,年龄20-44岁,平均（28.6±7.1）岁。分别行双侧髋关节（50个）双能X线吸收仪（DXA）和QCT检查。按照全髋部DXA测定结果,将Z值≤-2.0S的27个髋关节设为试验组,Z值〉-2.0S的23个髋关节设为对照组,比较2组髋臼坐骨体、耻骨体和髂骨体BMD的差异。结果试验组耻骨体、坐骨体BMD值分别为（71.965±35.695）、（87.093±38.413）mg/cm^3,显著低于对照组的（110.526±62.466）、（121.883±39.380）mg/cm^3,差异有统计学意义（P〈0.05）,试验组髂骨体BMD（156.822±41.472）mg/cm^3与对照组（177.948±55.804）mg/cm^3差异无统计学意义（P〉0.05）;AS患者髋臼髂骨体BMD均显著高于坐骨体和耻骨体BMD（均P〈0.05）;AS患者坐骨体和耻骨体BMD差异无统计学意义（P〉0.05）。结论QCT可敏感地反映髋臼不同部位BMD变化。AS患者髋臼的坐骨体、耻骨体较髂骨体更易出现骨密度减低。

Bcr/abl融合基因的小干扰RNA对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的观察特异性bcr/abl融合基因的siRNA对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并化学合成bcr/abl融合基因融合位点b3:a221个核苷酸siRNA作用于K562细胞,用WST-8法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR检测bcr/abl mRNA表达水平;PI单染流式细胞仪检测细胞周期;AnnexinV-PI双染测定细胞凋亡比例;Hochest33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果①Bcr/ablsiRNA作用K562细胞24,48,72h后,明显抑制K562细胞增殖,各浓度组间的增殖抑制率差异无显著性(P>0.05);②Bcr/ablsiRNA能显著下调bcr/abl mRNA水平,各浓度组间差异无显著性(P>0.05);③Bcr/ablsiRNA作用组细胞周期阻滞于G1期;④Bcr/ablsiRNA作用后细胞出现明显的早期凋亡群,各浓度组间的早期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变。结论特异性bcr/ablsiRNA可显着抑制K562细胞bcr/abl融合基因的表达,抑制细胞的增殖,诱导凋亡,但其作用未显示明显的剂量依赖性。

异基因外周血干细胞移植后影响生存的危险因素65例分析

目的探讨异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）后与长期生存相关的危险因素。方法对2000年6月至2008年12月65例行allo-PBSCT患者进行回顾性分析,选择年龄、性别、移植时疾病状态、供者类型、HLA相合情况、供受者血型、急性移植物抗宿主病（aGVHD）、慢性移植物抗宿主病（cGVHD）、出血性膀胱炎（HC）、巨细胞病毒（CMV）感染10个临床参数进行Cox单因素分析。将在单因素分析中P〈0.05作为有统计学意义的因素进行Cox多因素回归分析。生存率采用Kaplan-Meier曲线。结果除1例患者外,余64例均达稳定植活,0~Ⅰ度aGVHD为29例（45.3%）,Ⅱ~Ⅳ度aGVHD 35例（54.7%）。发生cGVHD共29例（45.3%）,其中局限型cGVHD 9例（31.0%）,广泛型cGVHD 20例（69.0%）。1年总生存率（OS）为64.6%,5年OS为20.5%。随访至2009年12月,33例（50.8%）存活,生存期12~104个月,中位生存期51个月,死亡32例（49.2%）,生存期1~96个月,中位生存期9个月。Cox回归分析移植时疾病状态和重度aGVHD的相对危险度分别是3.440和2.213。结论移植时疾病状态和重度aGVHD是影响造血干细胞移植长期生存的主要危险因素;在合适的疾病状态进行移植、积极防治aGVHD对移植成功非常重要。

CD40配体-受体载体介导的CpG ODN靶向脐血B淋巴细胞的特异传递及其免疫效应(英文)

背景:CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值,但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍。目的:拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异靶向传递及其免疫效应的增强作用。设计、时间及地点:观察对比实验,于2004-04/2007-10在广州暨南大学附属第一医院血液科、儿科完成。材料:取健康新生儿的肝素抗凝新鲜脐血,事先征得父母知情同意并获医院伦理委员会审核批准。方法:制备CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸交联复合物,与脐血单个核细胞共培养。分别于24,48,72,96h应用流式细胞仪检测单个核细胞对FAM标记CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度;培养96h后用直接免疫荧光标记法标记CD19,CD20,CD22单抗,以流式细胞仪检测阳性表达率;细胞悬液加入96孔板,3组分别加入CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸、单纯CpG寡核苷酸及ddH2O,培养92h,以四甲基偶氮唑盐比色法测细胞增殖能力;以酶联免疫吸附法测以上3组细胞培养上清IgG水平。主要观察指标:单个核细胞对CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度,淋巴细胞亚群的表达,细胞增殖能力,培养上清IgG水平。结果:与单纯CpG寡核苷酸未交联组相比,单个核细胞对交联复合物摄取率更高(>98%),达摄取峰值时间更早。共培养后CD19+,CD22+,CD20+细胞表达升高,细胞增殖量及上清IgG水平均高于对照组(P<0.05)。结论:CD40配体-受体载体系统有助于CpG寡核苷酸特异高效的B细胞靶向投递,并增强其免疫效应。

负压蒸发工艺性能的研究

通过对现有成熟混合油负压蒸发工艺在浸出生产过程的理论分析，得出该工艺具有节能和提高浸出毛油质量的特性。并通过实际测试、分析，验证了负压蒸发的毛油和常规蒸发毛油质量上的差异，及能量消耗上的不同，展示了负压蒸发在实际运用中的优越性和良好的经济性。

初中英语教学中如何构建高效课堂

传统的英语教学方式往往是教师机械地讲,学生被动地听,既不利于学生自主学习能力的培养、知识体系的建构、独立思考能力的提高,同时也降低教学效率,使课堂在教学中变得低效而枯燥乏味。英语作为一门语言,应该发挥语言教学的优势,引导学生主动积极地参与进课堂中来,在主动交流、思考中真正掌握语言技能和知识,最终创造高效教学课堂。那么如何在初中英语教学中进行高效课堂建设呢?

子宫动脉频谱形态异常可预测系统性红斑狼疮患者的妊娠结局

目的探讨子宫动脉多普勒在预测系统性红斑狼疮(SLE)合并妊娠母胎结局中的应用价值。方法回顾性选取45例系统性红斑狼疮合并妊娠孕妇,分析两组患者的临床情况及新生儿结局,并根据子宫动脉多普勒频谱是否出现切迹、搏动指数(PI)值增高,将患者分为正常组(n=31)及异常组(n=14),比较两组间的差异。结果45例孕妇中,15例(33%)出现子痫前期、狼疮性肾炎及抗磷脂综合征,胎儿出现不良结局共9例(20%)。子宫动脉频谱正常组31例(69%),5例(11%)孕妇发生子痫前期,1例(2%)胎儿发生小于胎龄儿。子宫动脉频谱异常组14例(31%),10例(22%)孕妇出现并发症,包括子痫前期、狼疮性肾炎,抗磷脂抗体(+)及抗磷脂综合征;8例(18%)胎儿发生不良结局:包括小于胎龄儿、胎儿生长受限及胎儿丢失。3例(7%)妊娠期新发SLE患者,孕妇子宫动脉波形均出现异常(波形出现切迹、PI值增高),3例胎儿均于围生期死亡。子宫动脉波形异常组母体并发症及胎儿不良结局的发生率均高于波形正常组,组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论孕妇子宫动脉频谱形态异常是预测妊娠期SLE加重及胎儿发生不良结局的敏感指标。

优化英语教学环节 打造高效初中课堂

初中英语教学由多个重要环节组成,这些环节缺一不可,同时这些环节之间环环相扣。在教师设计教学环节中,应该通过不断地创新来激发学生的学习兴趣和提升学生的学习能力。高效课堂是当今初中教师应该思考的重要教学形式,如何在短短的课堂时间提升教学质量是当今教师所要面临的挑战。教师要在课前通过仔细的备课,并发挥学生的主体作用,设计出环节清晰,思路透彻的教学方案,并通过合理的教学手段来提升课堂教学的有效性。

扩散加权成像与对比增强MRI评估强直性脊柱炎活动性的对比研究

目的比较DWI与对比增强MRI（CE—MRI）评估强直性脊柱炎（AS）骶髂关节炎活动性的价值。方法前瞻性收集符合修订的AS纽约标准的96例连续患者作为AS患者组，21名健康志愿者作为对照组。根据AS病情活动指数调查表评分、红细胞沉降率和C反应蛋白结果判断AS患者的活动性，将AS患者分为活动期组（60例）和稳定期组（36例）。所有受试者均行双侧骶髂关节常规扫描、DWI和CE-MRI检查。观察患者的影像表现，并测量病灶ADC值和信号强度增强率（△SI）。采用单向方差分析比较活动期AS患者、稳定期AS患者和对照组间ASI和ADC值的差异，以AS病情活动指数调查表评分、实验室检查结果的综合标准为金标准，采用ROC分析ASI和ADC值判断AS活动性的效能，并采用配对t检验比较ASI、ADC值ROC下面积。结果96例AS患者中，MRI显示骶髂关节炎骨髓水肿62例（活动期57例、稳定期5例），骶髂关节表面侵蚀11例（活动期4例、稳定期7例），骶髂关节骨质硬化15例（活动期6例、稳定期9例），骶髂关节脂肪沉积58例（活动期27例、稳定期31例）。AS活动期、AS稳定期和对照组间的ASI分别为（2．51±1．69）％、（1．19±0．67）％、（0．75±0．21）％，ADC值分别为（1．33±0．33）×10^-3、（1．00±0．43）×10^-3、（0．38±0．13）×10^-3mm^2／s，差异均有统计学意义（F值分别为18．375、16．366，P均〈0．01），且ASI和ADC值两两比较的差异也均有统计学意义（P均〈0．05）。ASI与ADC鉴别AS患者活动性的ROC下面积分别为0．814和0．730，差异无统计学意义（t=1．632，P=0．103）。以ASI=I．44％鉴别AS患者活动性的敏感度和特异度分别为81．67％及80．00％；以ADC值=1．15×10^-3／mm^2鉴别AS患者活动性的敏感度和特异度分别为76．67％及71．43％。结论DWI与CE．MRI检测AS活动性的价值相似。

强直性脊柱炎骶髂关节ADC值、T1强化率与炎性活动指标的相关性

目的 评估扩散加权序列及对比增强MRI观察强直性脊柱炎活动组、稳定组及对照组的意义,探讨强直性脊柱炎骶髂关节ADC值、T1强化率与临床活性指标的相关性.方法 前瞻性的筛选2010年5月至2013年4月南方医科大学第三附属医院风湿免疫科56例强直性脊柱炎患者,活动组32例、稳定期24例,健康对照组20例.MR检查测量骶髂关节的表观扩散系数（ADC）值及T1强化率（△SI）,炎性活动指标：Bath强直性脊柱炎病情活动指数（BASDAI评分）、血沉及C-反应蛋白,统计学分析强直性脊柱炎活动组、稳定组及对照组的各参数差异是否有统计学意义,评估ADC值、T1强化率与BASDAI评分、血沉及C-反应蛋白的相关性.结果 ADC值活动组、稳定组及健康对照组分别为（1.45±0.25）× 10-3、（0.67±0.10）×10-3及（0.32±0.11）×10-3 mm2/s,与活动组比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）.T1强化率3组差异均有统计学意义（均P＜0.01）,ADC值、△SI与BASDAI评分显著相关（r=0.824,0.794;均P＜0.01）.结论 扩散加权序列及对比增强序列对判断AS活动性优于临床活动性指标,结合临床活性指标可明显提高评价AS是否活动的准确性.

依那西普联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎疗效分析

目的:探讨依那西普联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎的疗效。方法:选取2011年至2013年风湿免疫科的60例类风湿关节炎患者,分为对照组和治疗组,其中对照组15例,治疗组45例,两组患者都应用甲氨蝶呤治疗,治疗组患者联合使用依那西普治疗,总疗程12周。比较两组患者治疗前后的临床及实验室指标。采用美国风湿病学会的核心标准作为疗效评定标准。结果:治疗组患者肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)和白细胞介素(interleukin,IL-1)下降明显,与对照组患者相比差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后两组患者超敏C反应蛋白(hs-CRP)均较治疗前明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组患者关节疼痛、关节肿胀和晨僵情况较对照组均有显著的改善(P<0.05);治疗组患者的休息痛、患者评分以及HAQ评分均显著优于对照组(P<0.05);治疗组患者ACR20和ACR70缓解的比例均高于对照组,且治疗组患者达ACR50缓解的比例显著高于对照组(P<0.05)。结论:依那西普联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎的疗效优于单纯的甲氨蝶呤治疗。