斑点核酸杂交检测同一组宫颈疾患标本中人乳头瘤病毒和人巨细胞病毒核酸

应用人巨细胞病毒(HCMV)和人乳头瘤病毒(HPV)11、16、18型四个DNA探针,通过斑点分子杂交技术,在同一宫颈疾患标本中同时对HPV11、16、18型和HCMV DNA进行了检测,结果表明,HPV16、18和11 DNA在慢性宫颈炎、宫颈不典型增生及浸润性宫颈癌中的阳性率分别为:13％,0,13％;17％,17％,17％和43％,8％,4％;宫颈癌组织及宫颈不典型增生组织中HCMV DNA的检出率(73％)均高于宫颈慢性炎症组(44％),且差别具有显著性(p<0.05)约有46％的宫颈癌标本同时测到了HPV16和HCMV两种病毒的DNA。

基因工程重组人乳头瘤病毒亚基因致癌的分子生物学及超微结构研究

我们用基因分子生物学结合超微结构的方法在318例人宫颈癌标本中证明人乳头瘤病毒16型(HPV-16)与中国妇女宫颈癌的发生关系密切。它的亚基因片段,E_6-E_7早期基因可能是HPV-16的致癌基因。本文采用近年来开始发展起来的基因工程方法,将HPV-16的全部早期区基因及E_6-E_7基因分别重组至逆转录病毒(小鼠白血病病毒)的基因组中,将比重组的逆转录病毒导入培养细胞,在细胞中大量牛成并释放病毒颗粒到培养液中(此细胞称为重组病毒生成细胞)。借助重组病毒感染方式介导基因转移进行体外转化研究。采用重组逆转录病毒感染方式研究属于DNA病毒的HPV-16的致癌潜能,国内外尚未见报道。我们证明它是目前体外研究转化功能效率最高,最稳定的方法。

宫颈癌病毒病因研究 Ⅰ.宫颈癌活检组织中疱疹病毒Ⅱ型核酸及抗原的检测

自Naib提出生殖道HSV-2感染与宫颈癌发生有关这一假设以来,许多学者试图在宫颈癌组织中证明HSV-2 DNA的存在。1972年Frenkel等首先报道在宫颈癌组织中发现HSV-2 DNA序列,此标本含有39％的病毒基因组,以后许多学者应用相似的方法在有限量的标本中均未证实这一观察。

人乳头瘤病毒、疱疹病毒Ⅱ型及人巨细胞病毒与宫颈癌关系的研究

用人乳头瘤病毒(HPV)16,18,11型、疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)N/BglⅡ,L/HindⅢ片段和人巨细胞病毒(HCMV)DNA等6个核酸探针,通过分子杂交技术对宫颈疾患活检标本进行了检测和分析,结果在同一标本中未发现3种病毒DNA均阳性者,但宫颈癌标本中46%HPV和HCMV DNA同时存在,2例HSV-2 DNA阳性的宫颈癌标本中有1例同时存在HCMV DNA。提示宫颈癌的病毒病因是多因素的,HPV,HSV-2和HCMV均可能有关,在宫颈癌发生过程中3者之间可能有某些内在联系。

人宫颈癌与人乳头瘤病毒关系的基因

人宫颈癌与人乳头瘤病毒（HPV）的关系是当今国际重视的研究课题之一。在我国有关研究鲜有报道。本文在国内五个地区（新疆、北京、湖北、黑龙江,贵州）共获得经病理学确诊的人宫颈鳞状上皮癌318例,宫颈上皮内新生物（CIN）14例,宫颈及外阴湿疣48例,慢性宫颈类34例及正常宫颈上皮组织24例。将上述组织提取DNA后,以32p标记的HPV-11,16,18三型病毒DNA为探针与上述组织进行核酸杂交。

人乳头瘤病毒16型E_6基因表达产物单克隆抗体的制备研究

将含有人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ_（１６））Ｅ_６基因的重组质粒ＰＡＳ１－ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６转染大肠杆菌ＡＲ１２０，在萘啶酮酸诱导下进行表达，表达产物经分离、纯化和鉴定获得一种分子量为１９０００的Ｅ_６表达蛋白。用纯化后的Ｅ６蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０－Ａｇ１４在ＰＥＧ_（４０００）作用下进行融合，经ＨＡＴ培养基筛选杂交瘤细胞株，甲基纤维素半固体培养基克隆，克隆筛选，ＥＬＩＳＡ检测和再克隆，得到一株持续稳定分泌抗ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤株ＲＡＣ_６。

口腔粘膜下纤维性变的超微结构研究

本文通过１６例口腔粘膜下纤维性变的电子显微镜观察研究，发现１５例上皮细胞增生肥大，伴有空泡变性，１６例上皮下组织中大量胶原原纤维增生，错杂排列并伴有显著退行性变，增生的胶原原纤维来源于纤维细胞。

人生殖道疣和子宫颈癌中病毒基因检测及超微结构研究

本实验用透射电镜观察了32例子宫颈癌,6例宫颈湿疣和2例外阴疣的超微结构,同时以～(32)P-dCTP标记的HPV 16 DNA为探针,检测了宫颈癌活检组织中的病毒DNA相关序列。电镜下,生殖道疣各例均可见典型凹空细胞病变,细胞核内的核小体,染色质之间颗粒,染色质周围颗粒显著增多。核酸杂交显示23例宫颈癌组织中存在病毒DNA相关序列。杂交呈强阳性及中强阳性组织中的癌细胞核中的核小体明显多于弱阳性及阴性标本。。

宫颈癌病毒病因研究的过去与未来

自60年代中期以来,国内外对宫颈癌病毒病因学进行了深入的研究。回顾过去的20年,大致可分为两个阶段:60年代中期至80年代初,重点研究了单纯疱疹二型病毒(HSV-2)与宫颈癌相互间的关系;70年代末期至今则偏重研究了人乳头瘤病毒(HPV)

人乳头瘤病毒和人子宫颈鳞状上皮细胞癌关系的超微结构与基因分子

以人乳头瘤病毒(HPV)DNA为探针,通过核酸杂交方法,检测宫颈癌病人活体细胞DNA中的病毒相关序列,用透射电镜观察癌细胞的形态特点。32例宫颈癌组织中23例与HPV16型探针杂交呈阳性反应,阳性率为72％。杂交阳性的癌细胞核内小体的出现率增加。

宫颈癌患者单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体和人乳头状瘤病毒核酸检测的相关性

自1966年Naib首次提出单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)与宫颈癌发生有关以来,经过20多年的研究,虽然大量的资料支持这一设想,但也存在许多不能解释的问题,因此人们对HSV-2的单一作用开始怀疑。1977年Zur Hausen提出人乳头状瘤病毒(HPV)可能是宫颈癌的又一危险因素。1982年Zur Hausen又提出HSV-2作为“启动子”与HPV协同致癌学说,但此假设尚缺乏实验依据,仅是理论上的推测。本实验通过对宫颈癌患者血清HSV-2抗体及癌活检组织HPV DNA的检测,试图探讨HSV-2和HPV的可能联系。

口腔粘膜下纤维变病理发生的超微结构研究

口腔粘膜下纤维变(Oral submucous fibrosis,OSF)在湖南,广东,广西一些地区及印度、东南亚一些地区居民具有咀嚼槟榔的习惯的地方是一种常见病。OSF发生在口腔各部位有时侵犯咽和食管。它是一种粘膜下纤维化伴有上皮增生、萎缩、白斑等慢性过程,继而引起牙关紧闭和进食困难,有的发生癌变。因此有些学者视该病为癌前病变的一种严重危害人民健康的常见病。国内虽已有少量病理学的光镜报告,但在国内外尚未见超微病理发生学的报导。本研究材料来源于湘潭市整群抽样流行病学调查的11046人。

人乳头瘤病毒DNA在宫颈癌组织中的整合状态

人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈癌组织中是否整合,各家报道不一。多数研究证实良性病变中的HPV以游离状态存在,而恶性病变中的HPV DNA则已与宿主细胞基因整合。本实验从HPV 16杂交阳性病例中随机抽取5例标本。应用四种方法研究HPV 16在宫颈癌组织中的整合状态,旨在阐述HPV的致癌机理提供实验依据.

乳头瘤病毒核酸及其功能研究进展

近年来人们发现人乳头瘤与某些恶性肿瘤密切相关,从而对其核酸结构及其功能进行了深入研究。本文主要综述近3年来的研究进展,详述牛乳头瘤病毒(BPV)1型结构与功能的关系,人乳头瘤病毒(HPV)16、18型结构、功能及其在宫颈癌组织、细胞系中的整合、表达;比较了不同乳头瘤病毒(PV)基因组的异同。

宫颈癌及宫颈癌细胞系内人乳头瘤病毒18、11型DNA相关序列和转录产物的检测

近年来,国外的研究表明人乳头状瘤病毒16型、18型与人宫颈癌密切相关。在宫颈癌中可检出它们的核酸序列,在宫颈癌细胞系内可检测到它们的表达产物。为研究中国妇女子宫颈癌与HPV相互间的关系。我们用HP V18、11DNA探针检测了72例宫颈癌和一株来自中国妇女子宫颈癌细胞系中的病毒基因,并初探了它们在宿主细胞中的整合状态及其在转录水平上的表达。

人乳头瘤病毒16型亚基因DNA体外转化功能的细胞学研究

利用HZIP16和HZIP16K(见材料和方法)质粒,将人乳头瘤病毒16型(HPV-16)的全早期区基因及其开放读码框架(ORF)E6-E7分别转入ψ2细胞,所产生的重组病毒能诱导NIH3T3细胞发生转化。转化细胞具有恶性细胞的生物学和形态学特征,可在0.3％软琼脂中形成集落,可使裸鼠致瘤。Southern blot证明,HPV-16 E6-E7 ORFs序列以整合形式存在于转化细胞和裸鼠肿瘤细胞DNA中,表明HPV-16 DNA具有体外诱导NIH3T3细胞恶性转化的作用,E6-E7 ORFs是诱导细胞转化的关键基因。

中国妇女宫颈癌与人乳头瘤病毒关系的研究

<正> 人宫颈癌与人乳头瘤病毒(HPV)的关系是当前国际重视的研究课题之一。在我国有关研究鲜有报道。本文在国内五个地区(新疆、北京、湖北、黑龙江、贵州)共获得病理学确诊的人宫颈鳞状上皮癌318例,宫颈上皮内新生物(CIN)14例,宫颈及外阴湿疣48例,慢性宫颈炎34例及正常宫颈上皮组织24例。将上述组织提取DNA后,以~32P标记的HPV—11,16,18三型病毒DNA为探针与上述组织进行Dot Blot及Southern Blot核酸杂交。其中32例宫颈癌10例正常宫颈及27例宫颈及外阴湿疣还进行平行的电子显微镜对比研究。对于湿疣病例还进行了以酶标法代替H标记的原位核酸杂交的观察研究,结果表明:

核酸杂交,改良PCR对宫颈湿疣,宫颈癌的人乳头瘤病毒基因检测与超微结构对比研究

为明确人乳头瘤病毒(HPV)与人宫颈癌的关系及致癌的分子机理,取自宫颈癌高发区新疆、华北;中发区湖北、黑龙江;低发区贵州的宫颈癌318例,慢性宫颈炎39例,湿疣86例,宫颈上皮内新生物(CIN)14例及正常宫颈上皮24例在用斑点、Southern blot。原位核酸杂交进行HPV—11,16及18基因检测的同时进行同一标本的电镜对比观察。为更精确检测HPV基因及探素早期基因诊断的新法又发展了改良PCR对106例宫颈癌(新疆73,华北33例)。

空泡细胞在诊断宫颈人乳头瘤病毒感染中的意义

本文对空泡细胞(Koilocyte)的形态进行了光镜和电镜观察,并应用分子杂交技术和PAP染色的方法对宫颈疾患中人乳头瘤病毒(HPV)DNA和抗原进行了检测,分析HPV DNA及抗原检测结果与空泡细胞出现的关系发现,空泡细胞阳性的病例中HPV DNA及抗原的检出率较低,并且部分空泡细胞阳性的病例中也可测出疱疹病毒Ⅱ型(HSV_2)抗原,结果提示:空泡细胞并不是HPV感染所特有的,空泡细胞作为诊断宫颈HPV感染的特征性指标值得怀疑。

宫颈疾患中人乳头瘤病毒和疱疹病毒Ⅱ型DNA的检测

本文应用HPV11,16,18型和HSV-2N/BglⅡ、HSV-2L/HindⅢDNA片段等五个分子探针,通过斑点杂交技术对79例宫颈疾患(包括50例宫颈癌和29例宫颈糜烂)组织DNA进行了检测,结果发现宫颈癌组织HPV16,18和11的阳性率分别为44％,12％和4％,而宫颈糜烂组织中HPV16,18和11的阳性率分别为14％,7％和14％;且3例标本HPV16和HPV18均呈弱杂交反应;在被检的所有宫颈癌组织中各有2例分别与HSV-2N/BglⅡHSV-2L/HindⅢ弱杂交,宫颈糜烂组织无一例阳性。结果提示,HPV在宫颈癌的发生过程中可能起主要作用,HSV-2的作用尚不确定,可能与HPV起协同作用。