PACAP对培养大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的 观察垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)对谷氨酸和葡萄糖缺乏所致海马神经元损伤的保护作用。方法 取新生SD大鼠海马 ,采用B2 7无血清培养基培养神经元 ,MTT法测定神经元存活率 ;分别给予谷氨酸、NMDA或葡萄糖缺乏处理 ,造成原代培养的海马神经元损伤。结果 谷氨酸、NMDA呈剂量依赖性降低海马神经元的存活率 ,葡萄糖缺乏也能明显降低海马神经元的存活率 ,而预先给予PACAP能明显增加海马神经元的存活率。结论 PACAP能保护原代培养的海马神经元 ,减轻谷氨酸和葡萄糖缺乏引起的损伤。

短蛋白聚糖研究进展

短蛋白聚糖 (brevican)是一种中枢神经系统特有的硫酸软骨素蛋白聚糖 ,是脑内最丰富的细胞外基质分子之一。Brevican的表达仅限于中枢神经系统 ,在神经发育和脑损伤后胶质增生过程中均有明显增高。近来的研究表明 ,brevican在脑胶质瘤中有高度特异的表达并与其侵袭性相关 。

胃癌术后经肝动脉化疗的临床研究

胃癌术后血行转移是影响胃癌术后生存率的重要因素之一。本文报告21例胃癌病人在行胃癌根治术中经胃十二指肠动脉肝动脉插管并右上腹皮下埋泵,术后第1,3,6,12月经皮下泵向肝动脉内灌注抗癌药物(5-Fu,丝裂霉素,表阿霉素),并与同期54例胃痛根治术后经静脉全身化疗进行比较。结果显示两组病人的肝、肺转移率、腹腔内转移率,毒副反应及生存率均存在统计学差异(P＜0.01及P＜0.05),我们认为胃癌术后经肝动脉插管化疗比全身静脉化疗能更有效地防止胃癌术后的血行转移且毒副反应小,并能提高生存率。

分泌型短蛋白聚糖髓芯蛋白的mRNA在大鼠垂体中的表达

目的 :研究分泌型短蛋白聚糖 (brevican)髓芯蛋白的mRNA在大鼠垂体组织中的表达。 方法 :采用RT PCR和原位杂交方法。结果 :RT PCR反应得到一段约 4 0 0bp的DNA片段 ;原位杂交结果显示 ,腺垂体和神经垂体均可见分泌型brevican髓芯蛋白mRNA阳性细胞 ,胞质中可见杂交信号。腺垂体中分泌型brevican髓芯蛋白mRNA阳性细胞大小不一。 结论 :神经垂体和腺垂体均有分泌型brevican髓芯蛋白mRNA表达 ,brevican可能不是中枢神经系统特有的细胞外基质成分。

Brevican基因敲除小鼠的制备

目的制备brevican基因敲除小鼠。方法采用ET克隆方法,构建brevican打靶载体。线性化打靶载体,电转化胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),将正确同源重组的ES细胞注射入囊胚腔,生育嵌合体,再交配繁育杂合子及纯合子。PCR法鉴定小鼠的基因型。结果将PGK启动子指导的NEO表达框敲进Bcan第3外显子,敲除第3～8外显子序列,得到打靶载体,上游臂为2.4 kb,下游臂为4.8 kb。基因打靶后,得到双臂均发生正确同源重组的克隆数14个。利用阳性ES细胞克隆注射入囊胚,得到3只嵌合率大于50%的雄鼠,繁育得到6只Brevican-/-纯合子小鼠。结论利用同源重组方法,成功敲除干细胞靶基因,建立Brevican-/-建系小鼠。

胰腺囊腺瘤和囊腺癌的临床与病理

胰腺囊腺瘤和囊腺癌临床少见,起源于胰腺导管上皮,分别具有潜在恶性和低度恶性。本院自1969年以来共收治13例,均经手术和病理证实,现就其临床和病理特点分析如下。 临床资料 本组男4例,女9例,平均42岁,平均病程32个月。肿瘤位于胰头部4例,颈部1例,体尾部8例;肿瘤最大14cm×12cm×12cm。临床表现:上腹部肿块10例,上腹隐痛10例,皮肤、巩膜黄染1例。影象学检查:11例行B超检查,其中8例肿块来自胰腺,呈囊性、多房、有分隔,内部回声欠均匀;另3例仅提示上腹部及中腹部混合性肿块,部分为囊性,内部回声不均。

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻大鼠缺血性脑水肿作用的实验研究

目的 :研究垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)在缺血性脑水肿中的作用及其可能的受体机制。方法 :采用大鼠四动脉结扎脑缺血模型 ,分别运用干湿重法和酶学法测定脑组织含水量及Na+ 、K+ 含量。结果 :大鼠四动脉结扎脑缺血 30min ,再灌流 1h ,脑组织含水量明显增加 ,Na+ 含量增高 ,而K+ 含量降低。缺血前经测脑室分别给予 1× 10 -9mol、1× 1110 mol及 1× 11-11mol的PACAP均能抑制脑组织含水量、Na+ 含量的增加和K+ 含量的降低。特异性PACAPⅠ型受体拮抗剂PACAP6 38能完全阻断PACAP的上述作用 ,而单纯给予PACAP6 38对脑缺血后脑组织含水量、Na+ 、K+ 含量无显著影响。结论 :外源性PACAP对缺血性脑水肿具有保护作用 ,该作用是由I型受体介导的。

脂质体介导增强型绿色荧光蛋白和胶质细胞生长因子双基因载体在脊髓内共转染表达

目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)和胶质细胞生长因子2(glialgrowthfactor2,GGF2)的双基因真核表达载体pIRES2EGFPGGF2,研究GGF2在大鼠脊髓内的表达。方法:采用RTPCR方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出GGF2全序列cDNA,利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖进入位点(internalribosomeentrysite,IRES),构建GGF2与EGFP双基因真核表达载体pIRES2EGFPGGF2。采用基因注射法将阳离子脂质体Transfectam和pIRES2EGFPGGF2基因混合后转染至大鼠胸段脊髓组织中,观察GGF2在大鼠脊髓中的表达。结果:成功构建pIRES2EGFPGGF2质粒,在转染的局部脊髓内观察到GGF2mRNA表达显著增加。荧光显微镜下观察发现,注射局部灰质和白质神经元内均有较多绿色荧光蛋白表达。结论:阳离子脂质体能介导EGFP和GGF2双基因载体在脊髓内同时表达,EGFP可作为报告基因观察GGF2在脊髓内的表达。

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻一氧化氮介导的谷氨酸神经毒作用

研究垂体腺苷酸环化酶激活肽 ( PACAP)是否通过作用于一氧化氮 ( NO)代谢途径 ,减轻谷氨酸的神经毒作用。取新生 SD大鼠海马 ,用 B2 7无血清培养基培养神经元 ;重氮化反应法测定 NO浓度 ,MTT法测定神经元存活率 ,PACAP能减少谷氨酸引起的海马神经元死亡 ;谷氨酸呈剂量依赖性地增加海马神经元培养液中 NO的含量 ,PACAP能不同程度地减少 NO的含量 ;分别给予 2 mmol/L L - Arg,1 0 0μmol/L SNP和 2 0 0 μmol/L SNAP处理后 ,海马神经元存活率明显下降 ,给予不同浓度的 PACAP( 1 0 -9,1 0 -11,1 0 -13mol/L)能增加神经元的存活率。上述结果提示 ,PACAP通过抑制 NO释放及其神经毒作用 ,减轻谷氨酸引起的海马神经元损害。

垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻谷氨酸引起的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度升高的可能机理

目的 探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽 38(PACAP 38)稳定海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 + ]i)作用的可能机理。方法 取新生SD大鼠海马 ,用B2 7无血清培养基培养神经元 ;经Fura 2 /AM标记后 ,共聚焦显微镜下测定 [Ca2 + ]i。结果PACAP 38(10pmol·L- 1)能抑制谷氨酸 (5 0 0 μmol·L- 1)所致海马神经元 [Ca2 + ]i 升高 ,而Rp型硫化环腺苷酸 (2 0 μmol·L- 1)或氯化白屈菜赤碱 (0 .1μmol·L- 1)能阻断PACAP 38的抑制作用。二丁基环腺苷酸 (0 .1～ 10 0 μmol·L- 1)和豆寇酰佛波醇乙酯(0 .0 1～ 10 μmol·L- 1)也能抑制谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高。结论 PACAP 38减轻谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i

胆囊癌手术方式的选择

目的 探讨胆囊癌治疗的手术方式。方法 对 1980～ 1999年收治 132例胆囊癌患者的临床资料进行回顾性分析。结果 本组患者的平均年龄为 5 5岁 ,女与男之比为 1 5∶ 1。80 %的胆囊癌合并胆囊结石。胆囊癌以腺癌为主 (87 1% )。前期组 (1990年 12月前 ) :单纯胆囊切除 11例 ,胆囊癌根治术 9例 ,胆囊癌扩大根治术 5例 ,姑息性内或外引流术 15例 ,剖腹活检术 30例 ,手术死亡 4例 ,术后并发症 2 0例 ,其中胆漏 4例 ,胰漏 2例。后期组(1991年元月起 ) :根治性单纯胆囊切除 3例 ,单纯胆囊切除 2例 ,胆囊癌根治术 16例 ,胆囊癌扩大根治术 2 4例 ,姑息性内或外引流术 9例 ,剖腹活检术 8例 ,手术死亡 1例 ,术后出现并发症 12例 ,其中胆漏 1例 ,胰漏 1例。胆囊癌前期组根治切除率 35 7% ,后期组根治切除率 72 6 %。结论 外科技术提高和新的手术器械彭氏多功能解剖器 (PMOD)的应用能提高胆囊癌切除率。扩大根治术是治疗中晚期胆囊癌积极和有效的措施。

胰腺粘液性囊腺瘤及囊腺癌的诊断和治疗

本院自1969年以来收治胰腺粘液性囊腺瘤3例,囊腺瘤伴局限区域癌变2例,粘液性囊腺癌3例。术前平均病程3.5年。肿瘤最小8×8×8cm,最大14×12×12cm。上腹部隐痛、不适及上腹部肿块为本病的主要临床表现。B 超和 CT 多能显示肿瘤的来源、囊性、实性及分隔。最好的治疗方法是手术切除,认为多数为不规则圆形或分叶状肿瘤,一般较大,包膜完整,表面光滑,与正常胰腺分界明显。切除率高,预后较好。

脑胶质瘤的致性与侵袭性的相关研究

目的 探讨胶质瘤所致癫与不同级别胶质瘤侵袭性的相关作用及其临床意义。方法 根据临床资料 ,将胶质瘤所致癫组 5 5例病人定为实验组 ,其他非胶质瘤所致癫组 38例病人定为对照组。实验组又根据病理分型分为良性组 37例和恶性组 18例。放免技术测定血清LN及IV型胶原含量 ,流式细胞仪技术测定 93例患者肿瘤与正常脑组织交界处 1cm× 2cm× 2cm区域的CD4 4含量及DNA倍体含量分析 ,高效液相色谱仪测定交界处脑组织的GABA浓度。结果 恶性胶质瘤组 (18/ 5 5 )交界处标本中CD4 4含量为 5 0 3%± 1 2 3% ,与良性胶质瘤组(37/ 5 5 )CD4 4含量 3 4 7%± 0 80 %及对照组CD4 4含量 1 93%± 0 90 %相比有显著差异 (q1=3 95 ,q2 =4 5 2 ,P <0 0 5 ) ,恶性肿瘤组GABA浓度明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ,而良性组则低于对照组 (P <0 0 5 )。恶性胶质瘤组患者血清中LN、IV型胶原含量与对照组相比有显著差异 (P <0 0 5 ) ,但与良性胶质瘤组患者无明显差异 (P >0 0 5 )。 5 5例胶质瘤患者术后LN和Ⅳ型胶原含量全部下降 ,手术效果有显著差异 (P <0 0 5 )。恶性胶质瘤所致癫组 18例患者中有 15例DNA倍体呈异倍体 ,细胞增殖活跃。良性胶质瘤组 37例中仅 3例出现异倍体 ,大多呈二倍体。

胶质细胞生长因子真核表达载体的构建及其在脊髓内的表达

目的:构建胶质细胞生长因子2真核表达载体pEGFP-N1-GGF2,观察其在大鼠脊髓内的表达。方法:实验于2004-01／10在解放军第二军医大学长征医院神经外科实验室完成。出生1周SD大鼠2只和体质量250-300 g雄性成年SD大鼠12只。将成年大鼠分为对照组和实验组,每组6只。①采用反转录聚合酶链反应方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出胶质细胞生长因子2 的全序列cDNA。②以融合蛋白方式克隆到增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1-GGF2。③采用基因注射法将阳离子脂质体Transfectam和pEGFP-M1-GGF2混合后转染至实验组大鼠胸段脊髓组织中;对照组大鼠只注射脂质体和空白质粒pEGFP-N1的混合物。基因注射后1周,两组各取3只大鼠麻醉后取材行反转录聚合酶链反应,另取3只大鼠麻醉后取出T8,T9脊髓,冰冻切片后行荧光照相,观察绿色荧光蛋白表达情况。结果:12只大鼠均进入结果分析。①大鼠胶质细胞生长因子2 cDNA的克隆结果:成功克隆胶质细胞生长因子2 cDNA。②重组质粒pEGFP- N1-GGF2的构建结果:酶切鉴定及测序分析证实成功构建胶质细胞生长因子真核表达载体pEGFP-N1-GGF2。③反转录聚合酶链反应证明胶质细胞生长因子mRNA表达:实验组基因转染1周后局部脊髓内胶质细胞生长因子2 mRNA的表达显著增加。④pECFP-N1-GGF2基因体内转染结果:实验组注射局部脊髓内灰质和白质神经细胞内均有较多绿色荧光蛋白表达;而对照组未见荧光蛋白表达。结论:阳离子脂质体介导胶质细胞生长因子2基因体内转染的方法是可行的,增强型绿色荧光蛋白可作为报告基因观察胶质细胞生长因子2 基因在体内的表达。

单纯性腹膜后血肿的诊断和治疗

单纯性腹膜后血肿(Simple Retroperetoneal Hematoma,SRH)是指无腹内或腹膜后脏器和大血管损伤的腹膜后血肿,临床上较易误诊,从而导致不必要的手术探查。我院近5年来共收治因误诊而手术的SRH13例,现就其诊断和治疗问题讨论如下。

紫外光强化钛柱撑型蒙脱土除砷吸附剂的研制

制备了对水体中的砷具有良好吸附效果的柱撑蒙脱土。研究了在紫外光照射的强化作用下的除砷效果,并确定了适宜的吸附砷工艺条件。结果表明经过压力溶弹处理的钛柱撑蒙脱土,Ti元素有效地替换了蒙脱土层间的Al元素,形成锐钛矿型TiO2柱撑结构,晶型发育比较完全,可以有效地去除水体中的砷。