大口黑鲈GHRH-LP和GHRH基因序列同源性、基因结构和时序表达研究

促生长激素释放激素(Growth hormone releasing hormone,GHRH)是生长激素释放调控的重要因子。过去人们一直将鱼类的促生长激素释放激素样多肽(Growth hormone releasing hormone like peptide,GHRH-LP)误认为是GHRH,直到最近才分离出GHRH基因。为了了解GHRH和GHRH-LP基因的结构特征及表达差异,研究克隆了大口黑鲈(Micropterus salmoides)GHRH和GHRH-LP基因,同时应用实时定量PCR技术研究了这两个基因的组织表达及发育时序表达情况。结果显示,大口黑鲈GHRH的成熟肽由27个氨基酸残基组成,GHRH-LP的成熟肽由44个氨基酸残基组成。两个基因均由5个外显子和4个内含子组成,但两者成熟肽编码区在外显子上的分布有明显不同。与其他脊椎动物比较,GHRH同源性为74%—100%,而GHRH-LP同源性为41%—96%,两者间具有一定的相似性(37%—63%)。GHRH基因仅在前脑和延脑中表达,而GHRH-LP基因在中枢神经系统及外周组织中均有表达;在胚胎发育过程中GHRH在神经胚后期检测到表达,其表达水平在仔鱼出膜1d后显著提高,而GHRH-LP在囊胚期及后续发育过程中均检测到表达。基因结构、序列同源性及表达谱研究均表明,GHRH和GHRH-LP存在显著差异,应为具有不同功能的两个基因。

RNA干扰技术在鱼类中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是真核生物体内利用双链RNA(double strand RNA,dsRNA)诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,从而导致转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)的现象。RNAi主要通过核酸酶Dicer切割dsRNA生成21～23nt的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),继而由siRNA识别并靶向降解同源靶基因mRNA,从而抑制靶基因的蛋白表达。文章综述了RNA干扰技术的原理、siR-NA的制备及在鱼类中的研究进展。

大口黑鲈“优鲈3号”繁育及养殖技术(中)

4.苗种培育(1)池塘培育。一是池塘条件。育苗用的池塘水深1.0~1.8米,水源充足,水质好,不受污染,面积以1~3亩为宜。二是浮游动物培育。鱼苗下塘前约10天用生石灰或茶粕清塘,经80目筛绢网过滤进水50~80厘米。消毒5天后,加注新水60~80厘米,进水口用80目网纱过滤。放苗前2~3天,使用发酵生物有机肥肥水,快速培养轮虫、枝角类等浮游动物,开启增氧机。

大口黑鲈“优鲈3号”繁育及养殖技术(下)

(3)科学饲养。配合饲料含粗蛋白质水平需达到40%~50%。在投喂时,定期在饲料中添加维生素、乳酸菌和护肝胆药物等,有助于提高大口黑鲈肝胆和肠道的健康水平和机体免疫力。根据鱼的大小选择饲料规格,每天分早、晚两次投喂,投喂遵循“慢、快、慢”的原则,投喂至大部分鱼不上水面抢食时为宜。平时注意巡池,观察鱼的摄食情况和水质、天气等情况,遇到异常情况及时解决。

草鱼GSTR基因外显子1、外显子2的SNPs筛选及其与生长性状的关联分析

根据草鱼EST数据库中的rho型谷胱甘肽硫转移酶基因cDNA序列设计引物,扩增预计存在的SNP位点。采用PCR产物测序法和PCR-RFLP法,在珠江水系草鱼养殖群体中筛选到2个SNP位点,分别位于外显子1和外显子2上,为C-T突变,且属于同义突变,统计了多态位点在群体中的分布:C+129T位点CC型占0.69%,TC型占8.75%,TT型占80.56%;C+192T位点CC型占25.4%,TC型占48.6%,TT型占26.1%。利用一般线性模型将SNPs与草鱼6个生长性状进行关联分析,结果表明,C+129T位点TT型个体6个生长性状均值比TC型高(P>0.05);C+192T位点TT型个体体质量均值高于TC型和CC型个体(P<0.05)。双倍型关联分析表明D1型个体的体质量均值明显高于D3型和D6型(P<0.05),因而可以考虑将GSTR基因作为影响草鱼体质量等生长性状的候选基因,应用于草鱼分子辅助育种。

大口黑鲈“优鲈3号”繁育及养殖技术(上)

大口黑鲈俗称加州鲈,是我国大宗特色淡水养殖品种之一,具有肉质鲜美、无肌间剌、适合冷(冻)藏和初深加工等特点。2019年中国水产科学研究院珠江水产研究所联合广东梁氏水产种业有限公司、南京帅丰饲料有限公司培育出大口黑鲈养殖新品种“优鲈3号”,实现了良种的更新换代,加速产业的转型升级。2019-2023年,我国大口黑鲈养殖总产量由43.4万吨提升至80.2万吨,增长了约84%,养殖区域覆盖全国29个省市。

大口黑鲈GHRH基因启动子区域序列分析及其活性检测

生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone,GHRH)是下丘脑弓状核合成和分泌的小分子多肽,其主要功能是调节垂体细胞合成和释放生长激素。为研究大口黑鲈(Micropterus salmoides)GHRH基因5’侧翼启动子区域的活性和该区域中潜在的转录因子对GHRH基因表达的调控作用,对该基因5’端启动子区域约1400 bp长度的片段进行序列分析,预测顺式作用元件,获得了Oct-1、SP1、NF-1、C/EBPalp和C/EBP等多个潜在的调控GHRH基因表达的调节因子结合位点序列。在包括外显子1和内含子1的GHRH基因5’侧翼区两侧加入两个限制性酶切位点Xho I和Bam H I,对其进行改造,并将该片段插入红色荧光蛋白报告基因载体p DsRed2-1,构建了重组表达质粒pGHRH1-RFP。同时,用不含有外显子1和内含子1的GHRH基因5’侧翼区构建重组表达质粒p GHRH-RFP。将质粒pGHRH1-RFP和p GHRH-RFP转染鲤(Cyprinus carpio)上皮细胞(epithelioma papillosum cyprinid,EPC)。经过48 h的培养,在pGHRH1-RFP转染的部分细胞中检测到红色荧光蛋白表达。又将pGHRH1-RFP或p GHRH-RFP质粒注射到斑马鱼(Danio rerio)一细胞或二细胞期的胚胎中,注射了pGHRH1-RFP的胚胎在受精后48 h约有22.5%能检测到有红色荧光蛋白表达,受精后72 h约有29%的仔鱼检测到红色荧光蛋白表达。实验结果表明,目前分离到的GHRH基因5’侧翼序列具有启动基因表达的活性,且该基因的内含子1和外显子1是启动子的活性所必需的。另外,pGHRH1-RFP质粒注射的斑马鱼胚胎只能在胚胎和仔鱼的脊椎和肌肉中检测到RFP的表达,而在脑中没有检测到表达。推测扩增到的大口黑鲈GHRH启动子序列1407 bp(-1043 bp^362 bp)只是起到了驱动RFP脊椎和骨骼肌表达的作用,而不包括驱动在脑组织中特异性表达的启动子,本研究为GHRH基因功能的深入分析奠定了基础。

草鱼F2代选育家系的生长性能分析

草鱼(Ctenopharyngodon idella)是我国重要的淡水养殖鱼类,属于草食性鱼类,分布广泛,北至我国的黑龙江水系,南至珠江水系,和青、鲢、鳙一起统称为“四大家鱼”,已经有1700多年的养殖历史[1]。目前我国草鱼的年产量在国内淡水养殖鱼类中产量排名第一,据渔业统计年鉴显示,2015年草鱼养殖总产量为5670000t,约占中国淡水鱼养殖总量的20%[2]。由于江河、湖泊的环境变迁,捕捞过度等原因,近些年来草鱼自然资源量锐减,个体的经济性状指标也有所下降。目前养殖的草鱼主要是通过从江河中捕捞的野生草鱼直接作为亲本用于繁殖苗种,由于缺乏人工选育改良,加之有些苗种生产单位不注重亲本留种规程,造成了养殖草鱼的种质退化,主要表现为抗逆性差、生长性能下降[3-4],制约着草鱼养殖业健康可持续发展,因此,亟待培育生产性能优良的草鱼养殖新品种,促进草鱼产业的健康可持续发展。

草鱼生长性状的遗传参数和育种值估计

利用草鱼(Ctenopharyngodon idellus)生长性状选育核心群亲本,采用人工授精方式构建21个全同胞家系,并选用动物模型对16月龄草鱼生长性状进行遗传参数和育种值估计。结果显示,草鱼选育种群的生长性状存在丰富变异。采用约束极大似然法估计方差组分,发现草鱼体重、体长和体高性状的遗传力分别为0.39,0.47,0.21,属于中高遗传力;肥满度性状遗传力为0.11,属于低遗传力;4个性状的共同环境效应值相近且较小,范围为0.07~0.17。采用两性状动物模型分析相关性,发现体重、体长和体高性状间表型和遗传相关系数均达到高度正相关(r=0.88~0.97),而肥满度性状与三者间相关系数接近零,只与体高性状存在一定遗传正相关(r=0.43)。结合各性状遗传变异系数和相对遗传进度,分析表明,以体重为目标性状可便捷有效地改良草鱼生长性能。采用最佳线性无偏估计法预测个体育种值,发现4个性状育种值与表型值的相关系数范围为0.77~0.93。基于单性状育种值和表型值分别进行个体选择,按10%留种率,各性状选留个体相同率为68.75%~81.82%,秩相关系数范围为0.19~0.81,两种选择方式显示出较大差异,且差异大小与性状遗传力成反比例。本研究为草鱼生长性状选择育种提供了理论依据和技术支撑。

雌核发育草鱼的遗传结构分析和微卫星鉴别方法的建立

采用微卫星标记检测草鱼群体的遗传多样性,并根据纯合度的变化建立了雌核发育草鱼的鉴别技术。结果显示,8个位点共扩增出33个等位基因;在普通草鱼中,平均纯合度和PIC分别为0.203 1和0.552 8;在雌核发育群体中,则为0.716 1和0.357 2;2个群体间遗传相似度为0.873 3。其中,5个位点在雌核发育草鱼中纯合度明显提高,雌核发育草鱼在这5个位点的扩增总条带数为5~7个,普通草鱼则为8~10个,由此可100%区分2个草鱼群体。通过概率计算,理论鉴别概率达到99.92%。研究表明,雌核发育技术对草鱼的群体遗传结构改变较大,是快速建立纯系、固定优良性状的有效手段;根据群体遗传纯合度的改变、扩增条带数目差异,应用多态性微卫星分子标记可以简单、有效地区分雌核发育群体(或与之相似的高度近交群体)与普通群体。

生物絮团技术对室内培育小规格罗非鱼种的影响

本试验以罗非鱼鱼种[体质量(15.1±0.80)g]为对象,在罗非鱼养殖废水中添加合适的C:N,培养生物絮团,饲养罗非鱼鱼种,研究生物絮团对罗非鱼鱼种养殖效果。采用生物絮团的养殖系统培育罗非鱼鱼种,以不使用生物絮团系统的饲喂组为对照,56 d后,探讨生物絮团对罗非鱼鱼种生长性能、肌肉营养成分及水质的影响。结果显示:1生物絮团组罗非鱼鱼种增重率和特定生长率显著高于对照组(P<0.05)。2生物絮团组罗非鱼鱼种肌肉中粗蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),粗脂肪含量相反(P<0.05),两组间水分和灰分无显著性差异(P>0.05)。3生物絮团可显著降低养殖水体氨氮含量(P<0.05),试验结束时生物絮团组水体中的氨氮含量比试验前含量下降了35.8%,对照组上升了44.7%。生物絮团完全可以作为一种蛋白饵料被罗非鱼鱼种摄食利用,提高生长性能,对实现养殖水体的重复利用具有重要意义。

不同地理来源草鱼群体杂交后代的生长性能分析

为评估10个不同地理来源草鱼群体（佛山群体、肇庆群体、荆州群体1、荆州群体2、荆州群体3、鄂州群体、益阳群体、长沙群体1、长沙群体2和江苏群体）杂交后代的生长性能,对该10个群体为亲本构建的15个杂交组合进行同塘生长对比。对其4月龄、7月龄、8月龄、10月龄、12月龄、15月龄和18月龄的体质量进行测量。以4月龄体质量为协变量,运用协方差分析对不同杂交组合后代进行生长性能分析。结果显示,在18月龄时荆州群体2♀×佛山群体♂杂交组合后代平均体质量最高,为1892.90 g,比其他杂交组合平均体质量分别高3.51%~32.36%。经多重比较分析结果显示,荆州群体2♀×佛山群体♂和荆州群体1♀×佛山群体♂杂交组合后代的体质量显著高于其他杂交组合（P〈0.05）。生产上,应用这2个具有生长优势的组合生产优质苗种进行推广,可大幅度提高渔民的经济效益,另外该结果可为快速生长草鱼核心群体的确定奠定基础。

大口黑鲈“优鲈3号”养殖实例

2018年4-5月我们对大口黑鲈“优鲈3号”试验养殖的结果进行调查,养殖效果无论从产量还是经济效益都很明显。现分别从广东佛山和江苏南京选取1个实例介绍给大家,供养殖者参考。

两种杂交黄颡鱼的生长与形态差异分析

为评估两种杂交黄颡鱼生长和形态差异，以黄颡鱼早与乌苏里拟鳞♂、黄颡鱼♀与瓦氏黄颡鱼♂的杂交后代为实验组，全雄黄颡鱼群体为对照组，进行同塘生长对比和形态学测量试验。结果显示，在3个杂交后代群体中，黄颡鱼早与瓦氏黄颡鱼♂的杂交后代在5月龄和8月龄的体质量均显著大于其他两个杂交后代（P〈0．05），分别为（15．72±7．19）g和（78．09±25．37）g，并且绝对增重率也高于其他两个杂交后代，分别为0．23g／d和0．70g／d。对形态特征参数进行单因子方差分析，计算差异系数，其值为0．01-0．65，表明3个杂交后代群体的形态学差异处于种群间水平；主成分分析构建了4个主成分，其贡献率分别为28．52％、17．57％、11．83％、11．29％，累计贡献率为69．23％；同时，利用第一、第二主成分得分绘制散点图，显示黄颡鱼♀与瓦氏黄颡鱼古的杂交后代群体和全雄黄颡鱼群体基本重叠，而黄颡鱼早与乌苏里拟鳞♂的杂交后代群体偏离了全雄黄颡鱼群体，这一结果在聚类分析中更直观反映出来。由此可见，黄颡鱼早与瓦氏黄颡鱼♂的杂交后代群体生长速度表现最优，且体形更接近黄颡鱼。

池塘养殖草鱼两性体质量生长差异研究

为探明池塘养殖条件草鱼两性体质量生长规律,采用电子芯片标记技术和解剖鉴定性别方法,追溯不同性别草鱼在7月龄、8月龄、12月龄、16月龄、20月龄和32月龄的体质量生长状况,运用独立样本t检验比较雌、雄草鱼体质量差异。试验结果表明,7～16月龄雌、雄草鱼体质量差异均不显著(P>0.05);20月龄雌鱼和雄鱼平均体质量分别为2659.09 g和2530.06 g,32月龄分别为4868.21 g和4418.11 g,雌鱼比雄鱼体质量分别增加了5.10%和10.18%,雌、雄差异达到显著和极显著水平(0.01<P<0.05和P<0.01)。运用Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy 3种非线性模型对雌、雄草鱼体质量生长规律和生长曲线进行拟合,研究结果表明,3种非线性模型均能较好的描述雌、雄草鱼体质量生长规律,其中Logistic模型拟合效果更佳。体质量的最佳拟合参数的分析结果显示,雌、雄草鱼拟合精度(r^2)均为0.995,雌性草鱼和雄性草鱼的拐点月龄分别为19.73月龄和19.57月龄、拐点处体质量分别为2442.63 g和2220.13 g。研究结果有助于探明雌、雄草鱼在池塘条件下各自的生长模式,为草鱼单性品种选育和健康养殖提供参考。

不同地理来源草鱼群体杂交后代的生长性能分析（英文）

[目的]该研究旨在评估10个不同地理来源草鱼群体（佛山群体、肇庆群体、荆州群体1、荆州群体2、荆州群体3、鄂州群体、益阳群体、长沙群体1、长沙群体2和江苏群体）杂交后代的生长性能。[方法]以该10个群体为亲本构建了15个杂交组合进行同塘生长对比。对4月龄、7月龄、8月龄、10月龄、12月龄、15月龄和18月龄的杂交组合后代的体质量进行测量。以4月龄体质量为协变量,运用协方差分析对不同杂交组合后代进行生长性能分析。[结果]在18月龄时荆州群体2♀×佛山群体♂杂交组合后代平均体质量最高,为1 892.90 g,比其他杂交组合平均体质量分别高3.51%~32.36%。经多重比较分析结果显示,荆州群体2♀×佛山群体♂和荆州群体1♀×佛山群体♂杂交组合后代的体质量显著高于其他杂交组合（P〈0.05）。[结论]生产上,应用这2个具有生长优势的组合生产优质苗种进行推广,可大幅度提高渔民的经济效益,另外该结果可为快速生长草鱼核心群体的确定奠定基础。

大口黑鲈选育群体幼鱼转食配合饲料的驯食研究

将选育的大口黑鲈“优鲈3号”、“优鲈1号”和非选育群体幼鱼各15000尾饲养在3个网箱中,初始平均体质量分别为(0.105±0.020)、(0.106±0.017)g和(0.102±0.012)g,进行幼鱼转食配合饲料的驯化。第1 d投喂自池塘中捕捞的枝角类和桡足类,第2 d和第3 d将浮游动物与粉末状配合饲料按质量比5∶1和1∶1搅拌均匀后投喂,第4 d将浮游动物、粉末状配合饲料及直径0.8 mm的颗粒状饲料按质量比1∶2∶1混匀后投喂,第5 d和第6 d投喂颗粒状饲料,饱食投喂。试验结果显示,驯食结束后,“优鲈3号”、“优鲈1号”和非选育群体的体质量分别增长了83.82%、77.16%和61.30%,体长增长率分别为30.73%、31.03%和20.85%;选育群体显著高于非选育群体(P<0.05)。“优鲈3号”和“优鲈1号”的驯食成功率分别为96.67%和92.67%,显著高于非选育群体(74.0%)。“优鲈3号”、“优鲈1号”和非选育群体的养殖成活率分别为88.6%、81.4%和64.2%,三者间差异显著(P<0.05)。研究结果表明,“优鲈3号”幼鱼的驯食性状优于“优鲈1号”和非选育群体。

大口黑鲈北方亚种群体和“优鲈1号”群体及其正反杂交子代的遗传和生长性能比较

为解决国内养殖的大口黑鲈(Micropterus salmoides)群体遗传多样性下降问题,进一步培育快长和抗逆性强的大口黑鲈优良品种,以引进的大口黑鲈北方亚种群体(N)和大口黑鲈“优鲈1号”(G)为亲本,通过自交和正反杂交获得4个大口黑鲈群体,利用12对微卫星引物对其进行遗传多样性及遗传结构分析,采用金属丝线码(CWT)标记后在相同池塘养殖条件下对4个群体的生长性能进行比较分析。结果显示,12对微卫星引物在所有个体中均能扩增出清晰条带,在120尾样本中共扩增到126个等位基因,北方亚种自交群体(N)、“优鲈1号”自交群体(G)、正交群体NG[N(♀)×G(♂)]、反交群体GN[G(♀)×N(♂)]的平均期望杂合度(H e)分别为0.491、0.454、0.553和0.519,平均观测杂合度(H o)分别为0.519、0.480、0.729和0.664,平均多态信息含量(PIC)分别为0.407、0.412、0.454和0.425。结果表明,正反交群体的遗传多样性均高于自交群体,其中NG群体的遗传多样性最高。对群体间的遗传分化分析表明,GN群体与N和G群体间遗传分化最大,分别为0.125和0.149。UPGMA聚类分析显示,N群体和G群体首先聚为一支,再与NG群体聚为一支,最后与GN群体聚合。对4个群体的3~12月龄的子代生长性状进行对比,GN群体的体质量绝对增长率(AGR)和特定增长率(SGR)分别为1.44 g·d^-1和1.04%·d^-1,均高于其他群体。研究结果可为今后大口黑鲈良种培育和遗传改良提供科学依据。

对一起小水电站非同期合闸事故的分析

1事故经过 2007年11月21日7：30左右，某农村小水电站运行工杨某对1号机组清污完毕，在按下合闸按钮并网时，只听一声巨响，伴随着刺眼的电弧光，合闸断路器瞬间被烧得面目全非，化为一堆废铁，熔化的铁珠溅出数米远。高压跌落式熔断器U，V相同时熔断跌落，所幸无人员伤亡。

“四个提升” 推进服务创新

随着公众服务需求的提升以及企业自身发展的需要,供电企业也在不断与时俱进适应新形势,积极服务创新,用实际行动赢得客户信赖。近年来,陕西地电太白分公司（以下简称太白分公司）坚持＂服务致胜＂理念,从客户最满意的地方做起,从客户不满意的地方改起,不断反思和改进不足,通过＂四个提升＂行动加快推进服务创新步伐,努力实现企业发展与服务社会的＂双赢＂。