德都红花-7味散优化方对肝纤维化模型胶原蛋白的影响

目的:观察德都红花-7味散优化方对CCl4所致实验性肝纤维化的影响。方法:将24只C57BL/6小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、实验组。小鼠i P10%CCl4橄榄油混悬液建立肝纤维化模型。同时正常组和模型组均灌胃给予等量蒸馏水;实验组灌胃给予德都红花-7味散0.75 g/kg,每天1次。连续给药30 d后处死小鼠,取肝脏HE染色观察炎症反应、masson染色观察纤维化程度。结果:HE染色:正常组小鼠肝组织细胞整齐、形态完整,细胞核结构清晰;模型组小鼠细胞紊乱、肝细胞体积明显增大,形态不规整,炎症细胞明显;实验组与模型组相比肝细胞、炎症细胞较少。Masson染色:正常组小鼠肝组织胶原分布均匀,相邻的胶原纤维网完好,未见纤维增生;模型组肝组织内胶原纤维明显增多,胶原纤维网断裂,胶原纤维相互连接,说明模型成功;与正常组比较,肝纤维化小鼠肝组织胶原沉积明显增加,纤维化程度为14.11±5.89,胶原分数明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),德都红花-7味散优化方组与模型组相比,肝纤维化肝组织胶原纤维较少,纤维化程度为4.02±1.68,胶原分数低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:德都红花-7味散优化方具有降低肝纤维化程度的作用。

德都红花-7味散及其主要成分对肝纤维化小鼠CCR1、DNMT1蛋白的作用研究

目的探索德都红花-7味散及其主要成分通过调控趋化因子受体(CCR1)DNA甲基转移酶1(DNMT1)抑制四氯化碳(CCl4)所致肝纤维化的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、德都红花-7味散组(灌胃0.75g·kg^(-1)德都红花-7味散)、蓝盆花组(灌胃0.75g·kg^(-1)蓝盆花)和木犀草素低、高剂量组(分别灌胃0.02、0.04g·kg^(-1)木犀草素)。除空白组外,其余各组均腹腔注射10%CCl4橄榄油溶液建立肝纤维化模型,各组均用0.5%CMC-Na溶解灌胃药物,每日1次,连续给药4周,末次给药后采集血液和肝组织。用酶联免疫吸附试验法检测血清DNMT1、CCR1、平滑肌肌动蛋白(α-smA)、Ⅲ型前胶原(precollagenⅢ)含量,用蛋白质印迹法检测DNMT1、CCR1、α-smA、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)蛋白表达情况。结果空白组、模型组、德都红花-7组、木犀草素低剂量组、木犀草素高剂量组、蓝盆花组血清DNMT1含量分别为(4.56±0.69)、(6.09±0.59)、(5.21±0.33)、(4.99±0.68)、(5.03±0.45)和(5.17±0.61)pg·mL^(-1)CCR1含量分别为(13.38±0.47)、(11.20±0.73)、(12.97±0.80)、(12.89±0.75)(12.88±0.95)和(12.92±0.58)pg·mL^(-1),α-smA含量分别为(181.80±24.50)、(281.30±26.60)、(220.90±22.30)(193.70±16.10)、(199.30±17.70)和(205.80±14.70)pg·mL^(-1),precollagenⅢ含量分别为(49.29±8.26)、(77.56±8.61)、(67.56±5.63)、(55.47±7.07)、(64.93±8.66)和(59.66±8.51)pg·mL^(-1),肝组织DNMT1蛋白相对表达水平分别为0.08±0.03、0.26±0.08、0.13±0.01、0.12±0.05、0.13±0.05和0.15±0.03,CCR1蛋白相对表达水平分别为0.18±0.03、0.13±0.02、0.21±0.06、0.22±0.07、0.17±0.07和0.18±0.06,α-smA蛋白相对表达水平分别为0.03±0.01、0.27±0.11、0.09±0.05、0.12±0.08、0.09±0.07和0.11±0.07,ColagenⅠ蛋白相对表达水平分别为0.09±0.04、0.65±0.22、0.28±0.12、0.26±0.19、0.30±0.22和0.25±0.12。模型组的上述指标与空白组比较,各给药组上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论木犀草素是德都红花-7味散减轻CCl_(4)引起肝纤维化的药效物质基础之一,其通过CCR1、DNMT1、α-smA、CollagenⅠ蛋白,抑制或延缓肝纤维化的形成。