家蚕自噬受体蛋白Bmp62与Bmref(2)P形成聚集体的研究

p62聚集体在自噬体形成和抗氧化应激过程中起着十分重要的作用。人源p62通过PB1结构域自我寡聚。家蚕基因组只含有一个p62基因。该基因表达两个蛋白,即Bmp62和Bmref(2)P。Bmref(2)P比Bmp62缺少PB1结构域。在家蚕细胞中瞬时表达Bmp62和Bmref(2)P,发现Bmp62和Bmref(2)P在细胞质中共定位且形成聚集体。为研究Bmp62和Bmref(2)P各结构域在聚集体形成中的作用,构建Bmp62和Bmref(2)P的缺失突变体并与eGFP融合表达,发现缺失氨基酸残基1—101的Bmref(2)P在细胞质中弥散分布且不能形成聚集体,而含有PB1的Bmp62缺失突变体都能在细胞质中形成聚集体。对p62同源蛋白的结构域进行分析发现,部分p62不含有PB1结构域。

用于拟南芥染色体着陆的一套InDel标记的设计与应用

在拟南芥图位克隆中SSLP(simple sequence length polymorphism)是首选分子标记,当无可用SSLP时才会考虑CAPS(cleaved amplified polymorphic sequence)、d CAPS(designed CAPS)及SNAP(single nucleotide amplified polymorphism)等标记。图位克隆的第1步就是染色体着陆,需逐个检测覆盖全基因组的标记,工作繁琐,更加依赖操作相对简单的SSLP标记。但是,SSLP标记在染色体上分布不均,有些标记缺乏物理位置记录,而且很多标记的PCR反应体系和扩增条件不同,这些瑕疵增加了染色体着陆乃至图位克隆其他步骤的工作量,有碍图位克隆的顺利开展。针对上述不足,以InDel多态性位点为基础设计一组标记,专门用于染色体着陆,以弥补现有SSLP标记的不足。这套标记有确切的物理位置,每个标记所控制的染色体区间小于30 cM,而且这套标记可采用相同的PCR反应体系和反应程序。随即用这套标记成功地实现了6个Ler背景的隐性突变体的染色体着陆,显示这组标记能够满足实验要求,使得拟南芥图位克隆得到简化。