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茶树谷氨酸脱羧酶基因(GAD)的原核表达及酶活快速检测
1
作者
韩洁云
宛晓春
邓威威
《安徽农业大学学报》
CAS
CSCD
2018年第1期1-5,共5页
L-谷氨酸经脱羧酶反应可生成γ-氨基丁酸(GABA),此过程受谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)催化。从茶树转录组库中筛选GAD基因,通过NCBI比对获得其cDNA序列(GenBank登录号为KT728367.1)。序列分析表明,GAD基因的ORF全长为...
L-谷氨酸经脱羧酶反应可生成γ-氨基丁酸(GABA),此过程受谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)催化。从茶树转录组库中筛选GAD基因,通过NCBI比对获得其cDNA序列(GenBank登录号为KT728367.1)。序列分析表明,GAD基因的ORF全长为1 482 bp,共编码493个氨基酸,该蛋白为细胞质蛋白,分子量为55.49 kDa,理论等电点为5.44。从舒茶早茶树根部中克隆该基因,并构建pMAL-c5X-GAD表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,得到分子量约为55 kDa的目的蛋白。体外酶活反应后用薄层色谱法(TLC)分析,经BAW(Butanol:Acetic acid:H_2O,4:1:2)和75%苯酚水溶液(Phenol:H_2O,3:1)2种展开剂分离酶促产物,均可检测到GABA的生成。通过实时荧光定量PCR对GAD基因在不同茶树组织的表达水平进行检测,发现GAD在根中表达量最高,而在芽中表达量最低,在其他组织中表达各不相同,其表达具有组织特异性。
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关键词
茶树
谷氨酸脱羧酶
原核表达
TLC
实时荧光定量PCR
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职称材料
开展高中英语课外活动提高学生的阅读能力
2
作者
韩洁云
《课程教育研究(学法教法研究)》
2016年第21期11-11,共1页
首先《普通高中英语课程标准》在情感态度方面,要求高中学生能保持学习英语的愿望和兴趣,主动参与有助于提高英语能力的活动,有正确的英语学习动机,明确英语学习的目的是为了沟通和表达,敢于用英语进行交流;在学习中有较强的合作...
首先《普通高中英语课程标准》在情感态度方面,要求高中学生能保持学习英语的愿望和兴趣,主动参与有助于提高英语能力的活动,有正确的英语学习动机,明确英语学习的目的是为了沟通和表达,敢于用英语进行交流;在学习中有较强的合作精神,愿意与他人分享各种学习资源。其次,《普通高中英语课程标准》对学生在阅读量方面的“六级”要求是:
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关键词
《普通高中英语课程标准》
英语课外活动
高中学生
阅读能力
英语学习动机
学习英语
情感态度
英语能力
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职称材料
题名
茶树谷氨酸脱羧酶基因(GAD)的原核表达及酶活快速检测
1
作者
韩洁云
宛晓春
邓威威
机构
安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室
出处
《安徽农业大学学报》
CAS
CSCD
2018年第1期1-5,共5页
基金
安徽省自然科学基金(1608085QC60)
国家自然科学基金(31300576)共同资助
文摘
L-谷氨酸经脱羧酶反应可生成γ-氨基丁酸(GABA),此过程受谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)催化。从茶树转录组库中筛选GAD基因,通过NCBI比对获得其cDNA序列(GenBank登录号为KT728367.1)。序列分析表明,GAD基因的ORF全长为1 482 bp,共编码493个氨基酸,该蛋白为细胞质蛋白,分子量为55.49 kDa,理论等电点为5.44。从舒茶早茶树根部中克隆该基因,并构建pMAL-c5X-GAD表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,得到分子量约为55 kDa的目的蛋白。体外酶活反应后用薄层色谱法(TLC)分析,经BAW(Butanol:Acetic acid:H_2O,4:1:2)和75%苯酚水溶液(Phenol:H_2O,3:1)2种展开剂分离酶促产物,均可检测到GABA的生成。通过实时荧光定量PCR对GAD基因在不同茶树组织的表达水平进行检测,发现GAD在根中表达量最高,而在芽中表达量最低,在其他组织中表达各不相同,其表达具有组织特异性。
关键词
茶树
谷氨酸脱羧酶
原核表达
TLC
实时荧光定量PCR
Keywords
Camellia sinensis
glutamic acid decarboxylase
prokaryotic expression
TLC
qRT-PCR
分类号
S571.1 [农业科学—茶叶生产加工]
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职称材料
题名
开展高中英语课外活动提高学生的阅读能力
2
作者
韩洁云
机构
江西省婺源县天佑中学
出处
《课程教育研究(学法教法研究)》
2016年第21期11-11,共1页
文摘
首先《普通高中英语课程标准》在情感态度方面,要求高中学生能保持学习英语的愿望和兴趣,主动参与有助于提高英语能力的活动,有正确的英语学习动机,明确英语学习的目的是为了沟通和表达,敢于用英语进行交流;在学习中有较强的合作精神,愿意与他人分享各种学习资源。其次,《普通高中英语课程标准》对学生在阅读量方面的“六级”要求是:
关键词
《普通高中英语课程标准》
英语课外活动
高中学生
阅读能力
英语学习动机
学习英语
情感态度
英语能力
分类号
G633.41 [文化科学—教育学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
茶树谷氨酸脱羧酶基因(GAD)的原核表达及酶活快速检测
韩洁云
宛晓春
邓威威
《安徽农业大学学报》
CAS
CSCD
2018
0
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职称材料
2
开展高中英语课外活动提高学生的阅读能力
韩洁云
《课程教育研究(学法教法研究)》
2016
0
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职称材料
已选择
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参考文献
引证文献
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