霍乱毒素B亚基与草鱼呼肠孤病毒VP7融合基因的合成和原核表达

草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)是一种致病力强,严重危害水产养殖业健康发展的病毒。免疫接种疫苗是预防GCRV的有效途径,而口服免疫接种对生活在水中的鱼类是一种理想的接种方式。GCRV衣壳蛋白VP7具有较好的免疫原性。霍乱毒素B亚基(cholera toxin B subunit, CTB)是一种较好的黏膜佐剂。本研究采用PCR技术,将CTB基因和VP7基因进行柔性融合,获得1260 bp的CTB-VP7融合基因,构建重组表达质粒pET28a-CTB-VP7,转化大肠杆菌BL21 (DE3),获得了表达CTB-VP7融合蛋白的菌株。当采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导时,获得CTB-VP7融合蛋白的分子量约49 kDa,与预期的分子量大小一致。当IPTG浓度为0.08 mmol·L^(-1),诱导温度为37℃,诱导转速为100 r·min~(-1),诱导表达5.0 h时,CTB-VP7融合蛋白的表达量最大,达到2.45 mg·L^(-1)。CTB-VP7融合蛋白在菌体中主要以包涵体的形式存在。在融合蛋白纯化时,洗脱缓冲液中咪唑浓度为200 mmol·L^(-1),目标蛋白纯度达96%。本研究通过基因合成和原核表达得到CTB-VP7融合蛋白,为进一步验证CTB-VP7融合蛋白能否作为抵抗GCRV的粘膜疫苗奠定了基础。