携带人MST4或人dnMST4转基因的肺癌细胞株构建

目的:利用慢病毒感染分别建立稳定过表达MST4和dnMST4的人肺癌细胞株。方法:分别以pcDNA3.1-MST4、pcDNA3.1-MST4 T178A质粒为模板,PCR分别扩增MST4、MST4 T178A序列(均为1.251 kb),片段两侧分别添加EcoR I/BamH I和Xba I/BamH I酶切位点,分别In-Fusion克隆至pCDH-RFP和pHEZG中,次日挑选单克隆菌落,提取质粒并进行测序和酶切鉴定;所构建的载体分别命名为pCDH-MST4-RFP和pHEZG-dnMST4。按标准程序进行慢病毒包装,并确认是否成功生产慢病毒;用携带MST4和RFP基因的慢病毒分别感染人肺癌细胞A549和HCC827,用携带dnMST4和GFP基因的慢病毒分别感染人肺癌细胞A549和HCC827,以建立稳定过表达MST4和dnMST4的人肺癌细胞系。应用qRT-PCR和Westernblot检测所建立肺癌细胞系中MST4和dnMST4在RNA层面和蛋白层面的表达水平。结果:测序和酶切鉴定的结果均证实成功构建了pCDH-MST4-RFP和pHEZG-dnMST4,按标准程序生产的携带MST4和RFP基因以及携带dnMST4和GFP基因的慢病毒均能成功感染人肺癌细胞。结论:成功构建稳定过表达MST4或dnMST4的人肺癌细胞株,为进一步研究MST4在肺癌恶性进程中的生物学功能及机制打下了良好基础。

Trim26/ZNF173条件性基因敲除小鼠的制备

目的:制备Trim26/ZNF173条件性基因敲除小鼠,为研究Trim26基因在肝癌发生中的作用及其机制提供动物模型。方法:设计基因敲除策略,Trim26的外显子5~7缺失引起的移码突变会破坏蛋白结构域,进而导致Trim26蛋白功能丧失。为此,我们拟删除Trim26基因的外显子5~7,以借助Cre/lox P系统构建Trim26基因条件性敲除的小鼠。简单地说,先获得嵌合体小鼠,选择高嵌合率小鼠与B6/N小鼠交配获得F1代Trim26fl/wt基因型的杂合子小鼠。F1代杂合子小鼠自交得到F2代Trim26fl/fl基因型的纯合小鼠和对照野生型小鼠。提取鼠尾基因组DNA并行PCR鉴定基因型,在DNA水平确定小鼠的基因型。结果:成功构建了打靶载体,打靶载体经限制性内切酶线性化后,成功电转导入了B6/BLU ES 细胞中,ES克隆经过LR-PCR初筛及Southern blot进一步验证,确定得到了3株中靶ES细胞(即3D、6A和10F),将中靶ES细胞扩增后进行囊胚注射,获得了12只Trim26的嵌合体小鼠(嵌合率不小于50%)。选择性成熟后的高嵌合率小鼠与B6/N小鼠交配繁育,得到F1代小鼠,PCR鉴定基因型确认获得了Trim26fl/wt基因型的F1代杂合子小鼠。性成熟后的F1代杂合子小鼠合笼交配后得到F2代小鼠,PCR鉴定基因型确认获得了纯合的Trim26条件性基因敲除小鼠(基因型为Trim26fl/fl)。结论:成功制备了Trim26条件性基因敲除小鼠,为进一步解析Trim26在肝癌发生中的作用及机制打下了良好基础。

血清miR-26a、miR-122、AFP联合检测对肝癌的诊断效能

目的分析血清微小RNA(miR)-26a、miR-122联合甲胎蛋白(AFP)检测对肝癌的诊断效能。方法分别选择肝癌患者114例纳入肝癌组、肝炎患者87例纳入肝炎组、健康体检者94例纳入对照组。采集三组血清样本,采用qRT-PCR法检测miR-26a、miR-122,采用电化学发光法检测血清AFP。构建受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC)来评估miR-26a、miR-122、AFP检测诊断肝癌的敏感度及特异度。结果肝癌组miR-26a相对表达量低于肝炎组和对照组,AFP水平高于肝炎组和对照组,肝癌组、肝炎组、对照组miR-122相对表达量依次降低(P均<0.05)。miR-26a单项检测诊断肝癌AUC为0.738,敏感度和特异度分别为52.1%、94.3%;miR-122单项检测AUC为0.828,敏感度和特异度分别为79.9%、84.8%;AFP单项检测AUC为0.801,敏感度和特异度分别为59.2%、93.7%;miR-26a、miR-122、AFP联合检测AUC为0.926,敏感度和特异度分别为86.4%、82.5%,三项指标联合检测对肝癌的诊断效能高于单一指标检测。miR-26a单项检测鉴别诊断肝癌与肝炎AUC为0.752,敏感度和特异度分别为73.9%、72.4%;miR-122单项检测AUC为0.688,敏感度和特异度分别为78.2%、59.4%;AFP单项检测AUC为0.701,敏感度和特异度分别为58.3%、92.6%;miR-26a、miR-122、AFP联合检测AUC提高到0.865,敏感度和特异度分别为76.5%、85.1%,三项指标联合检测对肝癌和肝炎的鉴别诊断效能优于单项指标检测。结论血清miR-26a、miR-122单项检测在肝癌诊断、肝癌与肝炎鉴别诊断中均有一定应用价值;miR-26a、miR-122、AFP联合检测的诊断效能高于单一指标检测。

经鼻高流量湿化氧疗在艾滋病并急性低氧性呼吸衰竭中的应用研究

目的探讨经鼻高流量湿化氧疗(HHFNC)在艾滋病(AIDS)并急性低氧性呼吸衰竭(AHRF)中的应用疗效。方法选择2016年1月至2018年3月在大理大学附属昆明市第三人民医院成人AIDS并AHRF患者65例,根据治疗方法分为HHFNC组、无创正压通气组(NIPPV组)、普通吸氧组(对照组)。比较各组患者主要症状和体征消失时间、住院时间和耐受性、舒适性、漏气率、腹胀发生率和治疗效果。结果①HHFNC组和NIPPV组呼吸困难消失时间[(2.1±0.8)d、(2.2±0.7)d]、紫绀消失时间[(1.7±0.5)d、(1.8±0.6)d]和住院时间[(14.6±0.9)d、(15.1±0.8)d]均较对照组[(4.9±1.1)d、(4.2±0.9)d、(22.3±1.7)d]明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。②HHFNC组耐受性(1.5±0.5)分、舒适性(1.8±0.5)分较NIPPV组[(2.7±0.9)分、(3.1±0.9)分]和对照组[(2.1±0.6)分、(2.9±0.8)分]更好,对照组耐受性(2.1±0.6)分优于NIPPV组(2.7±0.9)分,差异均有统计学意义(P<0.05)。HHFNC组[0(0)、1(5.0%)]和对照组[0(0)、1(4.0%)]的漏气率和腹胀发生率较NIPPV组[7(35.0%)、9(45.0%)]更低,差异有统计学意义(P<0.05)。③与对照组比较,HHFNC组和NIPPV组治疗后各时间点呼吸频率(RR)和脉搏血氧饱和度(SpO2)、动脉血氧分压(PaO2)、氧合指数(PaO2/FiO2)改善更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。HHFNC组治疗后12 h、24 h的RR改善[(23.1±3.4)次/min、(21.6±2.7)次/min]较NIPPV组[(26.3±4.7)次/min、(25.9±4.1)次/min]更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。④HHFNC组[16(80.0%)、2(10.0%)]和NIPPV组[15(75.0%)、3(15.0%)]较对照组[14(56.0%)、9(36.0%)]治疗有效率更高,有创机械通气率更低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HHFNC治疗AIDS并AHRF疗效优于普通氧疗,较无创呼吸机及普通氧疗具有更好的舒适性和耐受性,腹胀发生率和漏气率更低,在早期治疗降低RR方面具有显著优势,是一种适合推广的无创呼吸支持技术。

乙醇喂养小鼠诱导肝损伤模型的制作

目的:通过慢性酒精喂养加急性酒精灌胃来制作肝损伤的小鼠模型。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组。前十天每天给予对照组不含酒精液体饲料喂养,给予模型组酒精液体饲料喂养,第十一天给对照组灌胃麦芽糊精溶液(20 μL/Kg),模型组灌胃酒精(20 μL/Kg)。实验结束后检测血清肝功能指标、脂质代谢相关指标,并观察肝脏组织病理变化。结果:与对照组小鼠比较,模型组小鼠血清中胆固醇(P 0.05, n = 14~15)在实验组中均高于对照组,且胆固醇(P < 0.01, n = 14~15)在两组间有显著差异。苏木精–伊红结果显示,与对照组相比,造模组的肝组织破坏程度较重。结论:模型组小鼠出现了肝细胞损伤,脂肪累积,运用慢性喂养加上急性灌胃的方法成功模拟酒精肝损伤,这对于之后的临床治疗和新机制的研究具有实践意义。

非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的构建

目的:构建特殊饲料饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis, NASH)小鼠模型。方法:将40只8周龄的C57BL6/J雄性小鼠分成四组,分别予以高脂高果糖高胆固醇饮食(FFC)及对照饮食喂养4个月、6个月,期间每周称量小鼠体重,分别于喂养4个月和6个月取材,取动物血清和肝脏,进行血清学检测与肝组织病理学检测。结果:与对照组相比,FFC组体质量(P < 0.05)、肝湿重(P < 0.01)和肝体比(P < 0.01)均显著升高;FFC组脂肪变性明显比对照组严重(P < 0.001);FFC组肝脏甘油三脂较对照显著升高(P < 0.001),FFC组血清总胆固醇(TC)显著高于对照组(P < 0.001),FFC组血清ALT (P < 0.05)、AST (P < 0.001)较对照显著升高。而且,FFC饮食喂养6个月比喂养4个月的小鼠具有更为严重的NASH疾病特征。结论:建立了不同严重程度的NASH小鼠模型,为研究NASH发病机制以及治疗等研究提供模型参考。

非生物型人工肝技术治疗肝衰竭合并肝肾综合征

目的探讨不同类型的非生物型人工肝技术对肝衰竭合并肝肾综合征的临床疗效.方法选取2014年1月至2015年12月在昆明市第三人民医院住院的肝功能衰竭合并肝肾综合征患者60例作为研究对象,共行人工肝治疗317人次.入院后根据治疗方案的不同分为观察组和对照组,每组30例,观察组给予血浆置换联合血液透析滤过(plasma exchange+hemo-diafiltration,PE+HDF)治疗,对照组给予血浆置换(plasma exchange,PE)治疗.观察2组治疗后肝肾功能、凝血功能及电解质的变化及近期疗效.结果 (1)治疗后,观察组血清总胆红素、尿素氮、肌酐、钾等指标水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组凝血酶原活动度指标明显上升,且高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)在近期疗效方面,观察组达到78.95%,高于对照组(50%),差异有统计学意义(P<0.05).结论相对血浆置换来说,血浆置换联合血液透析治疗肝衰竭合并肝肾综合征方面更具优势,能够有效改善肝肾功能及维持电解质平衡,近期治疗有效率更高.

艾滋病患者外周血转化生长因子-β1、血管紧张素-Ⅱ、趋化因子配体12表达意义的探讨

目的 探究外周血转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)、趋化因子配体12(CXCL12)在艾滋病患者中的表达意义。方法 选取2016年5月至2020年5月昆明市第三人民医院60例艾滋病患者作为观察组,另选取同期60例健康体检人员作为对照组。比较两组外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12水平,分析外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12水平与人免疫缺陷病毒(HIV)-RNA定量的关系,分析外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12水平与艾滋病发病的关系,比较不同外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12水平的艾滋病患者的预后情况。结果 观察组外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12水平高于对照组(P<0.05);艾滋病患者HIV-RNA定量为(3.81±1.04)Log copies/mL,外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12水平均与HIV-RNA定量呈正相关关系(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12水平是艾滋病发病的独立危险因素(P<0.05);外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12高水平的艾滋病患者1年内间质性肺炎、隐孢子虫腹泻发生率高于外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12低水平的艾滋病患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 艾滋病患者外周血TGF-β1、Ang-Ⅱ、CXCL12水平明显升高,临床检测其水平,有助于预测艾滋病的发病及预后。

敲除ARID2基因对肺癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的研究敲除ARID2基因对肺癌细胞生物学行为的影响及可能机制。方法于肺癌细胞A549、H460中敲除ARID2,运用RT-PCR检测细胞ARID2及MMP2/TIMP2通路相关基因表达,MTT、流式细胞术、Tran-Swell法检测敲除ARID2后A549、H460细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力,免疫印迹检测端粒酶hTERT表达。结果敲除ARID2后,A549、H460增殖、侵袭、迁移能力增强、凋亡能力降低、hTERT表达升高(P<0.05)。敲除ARID2后,MMP-2mRNA与miR-4443表达升高,TIMP2mRNA表达降低(P<0.05)。结论敲除ARID2基因能通过激活MMP2/TIMP2信号通路促进肿瘤细胞侵袭、迁移并抑制凋亡,并通过促进端粒酶活性维持肿瘤细胞稳定增殖。

结核丸联合乙胺丁醇治疗耐药肺结核的效果及对PD-1信号通路和视力的影响

目的探讨结核丸联合乙胺丁醇治疗耐药肺结核(DR-TB)的效果及对视力、程序性死亡因子-1(PD-1)信号通路的影响。方法前瞻性选取2019年7月至2021年7月收治的80例DR-TB患者,按随机数字表法分为对照组和观察组,每组各40例。对照组采用乙胺丁醇进行治疗,观察组在对照组的基础上采用结核丸进行治疗。统计2组痰培养转阴率、病灶吸收情况和视力相关不良反应,比较治疗前后中医症状积分、肺功能[第1秒用力呼气容积/用力肺活量比值(FEV_(1)/FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%)、第1秒用力呼气容积(FEV_(1))]、T淋巴细胞亚群、自然杀伤(NK)细胞、PD-1的m RNA和蛋白表达水平。结果观察组痰培养转阴率及病灶改善情况高于对照组(P<0.05);治疗后观察组PD-1的m RNA、蛋白表达水平及中医症状积分低于对照组,差值高于对照组(P<0.05);治疗后观察组CD4^(+)/CD8^(+)、CD4^(+)、NK细胞含量、FEV_(1)/FVC、FEV_(1)%、FEV_(1)及差值均高于对照组(P<0.05);2组视力相关不良反应比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论结核丸联合乙胺丁醇治疗DR-TB效果确切,能通过调节PD-1信号通路,增强机体免疫功能,缓解临床症状,改善肺功能,且对视力具有一定保护作用。

重楼抗痨汤联合抗痨药物治疗气阴两虚耐多药肺结核临床研究

目的观察重楼抗痨汤联合抗痨药对耐多药肺结核的疗效及免疫功能的影响。方法将2016年3月至2019年3月昆明市第三人民医院结核科住院的诊断为耐多药肺结核患者160例随机分为治疗组(84例)和对照组(76例)。对照组采用6LfxLzdCsPtoZAm/12PtoCsZ抗痨治疗,治疗组在6LfxLzdCsPtoZAm/12PtoCsZ抗痨治疗基础上加用重楼抗痨汤治疗。观察两组患者临床疗效、治疗6个月胸CT病灶吸收率、治疗后痰菌转阴等。结果治疗组患者临床疗效明显优于对照组,治疗6个月胸部CT病灶吸收率、治疗后痰菌转阴率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论重楼抗痨汤联合抗痨药治疗耐多药肺结核患者疗效显著,同时能提高建筑免疫功能,降低抗痨药不良反应发生率,值得临床推广应用。

肺内成熟畸胎瘤误诊肺结核1例并文献复习

目的探讨肺内畸胎瘤(IPT)的诊治要点。方法回顾性分析昆明市第三人民医院1例IPT患者的临床资料, 并进行文献复习。结果该女性患者10年前曾因咯血于外院诊断为肺结核并接受抗结核治疗, 3年前及该次入院前咯血均复发, 均于外院再次接受抗结核治疗。入院后经支气管镜检查疑似畸胎瘤, 外科胸腔镜下切除术后病理组织学结果为成熟畸胎瘤。给予充分引流及有效抗感染治疗后患者病情好转。结论 IPT临床少见, 因其临床表现缺乏特异性, 需要与肺结核进行鉴别诊断。仅依靠影像学诊断容易误诊, 应尽早做病理学检查确诊后行手术治疗, 以减少误诊误治。