糖胺聚糖的荧光标记及其与硫酸软骨素抗体的相互作用

以1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺为催化剂,将糖胺聚糖(肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素A,B,C,D,E)中糖醛酸的羧基与氨基荧光素中氨基偶联,分别得到各荧光标记糖胺聚糖。将标记糖胺聚糖用点样仪点在硝酸纤维素包被玻璃芯片上,分别探讨其在硝酸纤维素薄膜上的保留率及其与硫酸软骨素抗体(克隆号CS-56)的相互作用。结果表明,各种糖胺聚糖在硝酸纤维素膜中保留率显著不同,硫酸软骨素E(51.7%)>硫酸软骨素A(19.5%)>硫酸乙酰肝素(16.4%)>肝素(14.1%)>硫酸软骨素B(12.3%)>硫酸软骨素D(10.8%)>硫酸软骨素C(10.7%);定量计算得各种糖胺聚糖与CS-56结合能力:硫酸软骨素C>硫酸软骨素D>硫酸软骨素A>硫酸软骨素E,硫酸软骨素B、肝素及硫酸乙酰肝素与CS-56无结合。

临床肝素类药物酶解分析二糖组成

肝素是一类结构复杂的高分子糖类,以N-硫酸、6-O硫酸氨基葡萄糖和2-O硫酸艾杜糖醛酸为主要成分组成二糖。常见的肝素注射液是以未分级肝素为原料纯化灭菌制备而来,在临床上使用更为广泛的是将肝素降解得到的低分子片段,低分子肝素保留了肝素糖链基本结构,但是不同制备工艺导致其具有不同的还原及非还原端。本研究以肝素类药物为研究对象,使用肝素裂解酶Ⅰ,Ⅱ及Ⅲ将肝素注射液、低分子肝素注射液(达肝素、那屈肝素、依诺肝素)、化学合成的类肝素(磺达肝素)进行酶催化降解产生二糖,结合强阴离子交换色谱(Strong anion exchange high performance liquid chromatography,SAX-HPLC)以及紫外检测器在线分析,使用市售肝素二糖标准品确定各种二糖结构。此外,使用反向离子对色谱和电喷雾质谱联用分析磺达肝素中的甲基二糖以及达肝素和那屈肝素中的脱氨二糖结构,为肝素以及类肝素药物的质量控制提供更为精确的结构信息。

刺松藻水溶性多糖的提取分离及理化性质研究

本文以刺松藻(Codium fragile)为原料,依次经冷水、热水提取,得到2种粗多糖CFC和CFH,经Q-SepharoseFF强阴离子交换色谱分离,分别从CFC和CFH中得到组分CFCP1～P6和CFHP1～P5,并对其理化性质进行了分析。分别运用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)、高效离子色谱法(HPIC)、傅里叶变换红外光谱法(FTIR)对其分子量、单糖组成和结构特征进行了分析。结果表明,刺松藻中多种结构复杂的多糖,CFCP1和CFCP6属于硫酸阿拉伯半乳聚糖,CFCP4和CFHP5属于丙酮酸化的硫酸半乳聚糖,CFHP1和CFHP2分别属于葡聚糖和甘露聚糖。多糖CFCP2、CFHP2和CF-HP3中除了含有半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和甘露糖外,还含有木糖、鼠李糖和岩藻糖。这些结构特殊的多糖为海洋药物研究与开发提供了良好基础。

利用糖芯片研究半乳寡糖与蓖麻凝集素和鸡冠刺桐凝集素间的相互作用

建立了用糖芯片技术研究寡糖与凝集素相互作用的方法。以新乳糖-N-四糖(LNnT)、乳糖-N-四糖(LNT)、λ-卡拉胶四糖(L4)和琼胶五糖(A5)为原料,经还原胺化法分别将其与1,2-十六烷基磷脂酰乙醇胺偶联得到拟糖脂,再将其与卵磷脂和胆固醇按4∶2∶5比例混合制备成脂质体后,用全自动芯片点样仪将其点印在硝酸纤维素膜包被的玻片上制成糖芯片,并进行寡糖与凝集素的结合实验。结果表明,蓖麻凝集素(Ricinus communis agglutinin 120,RCA120)特异性识别非还原端糖残基为Galβ(1#4)的寡糖,而鸡冠刺桐凝集素(Erythrina cristagalli lectin,ECL)特异性识别非还原端糖残基为Galβ(1#4)GlcNAc的LNnT。采用接触式芯片点样仪制备糖芯片,并用荧光扫描仪对糖与凝集素结合信号进行检测,增加了灵敏度和准确性。本方法不仅适合于糖与蛋白相互作用的研究,也有助于加快糖类药物的发现。

海洋硫酸多糖几种脱硫方法的比较研究

以κ-卡拉胶(硫酸基含量25.1%,分子质量83.1 kD)为原料,研究了二甲基亚砜-甲醇法(DMSO法)、三甲基氯硅烷法(CTMS法)以及苯并四甲酸-三氧化二锑法(PMA法)对其脱硫后多糖样品的得率、硫酸基含量及分子质量的影响。结果表明,κ-卡拉胶经三种方法脱硫后,样品得率分别为45.3%、50.6%和62.0%,脱硫率分别为42.2%、48.6%和82.8%,分子质量分别为15.7、22.3和4.75 kD。通过红外光谱和硫酸基含量分析表明,PMA法脱硫效果优于DMSO和CTMS法。PMA法不仅对κ-卡拉胶有效,而且适合于ι-卡拉胶、λ-卡拉胶和岩藻聚糖硫酸酯的脱硫。

5-羟基川陈皮素对肿瘤细胞糖胺聚糖含量和结构的影响

糖胺聚糖(GAGs)位于细胞膜及胞外基质,它通过与多种生长因子受体结合来介导细胞内的信号转导,进而调控细胞的增殖与分化。研究表明,GAGs结构或含量变化在肿瘤发生和发展中发挥了重要作用。黄酮类化合物可影响肿瘤细胞表面GAGs合成,前期研究发现,5-羟基川陈皮素(5HPMF)可通过干预细胞内多种信号通路进而抑制肺癌和结肠癌细胞增殖,然而,5HPMF如何影响GAGs结构和含量的变化进而介导信号转导通路的机制还不清楚。基于此,本研究利用BaF3细胞模型,流式细胞仪及HPLC技术,首次探讨了5HPMF对肺癌和结肠癌细胞GAGs含量和结构的影响。结果表明,来源于HT29和A549细胞的GAGs可增强FGF1介导的BaF3细胞生长而5HPMF(10μmol·L-1)则显著地抑制其生长作用,且5HPMF可显著地降低HCT116和A549细胞表面FGF2或FGF8介导的GAGs·FGF·FGFR三元复合物的荧光强度,但是5HPMF对GAGs中葡萄糖胺和半乳糖胺的含量及两者比例无明显影响,由此可推断5HPMF可能通过影响肺癌和结肠癌细胞表面GAGs结构而介导细胞内部信号转导。本研究为进一步探讨5HPMF对肺癌和结肠癌细胞表面GAGs二糖结构的变化与活性之间的相关性奠定了实验基础。

海洋糖类药物研究进展

海洋多糖具有抗凝溶栓、抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌,抗病毒等多种生物活性。过去11年(2002～2012)里有关海洋多糖生物活性的英文论文总数比前10年(1992～2001)增加了近4倍,同时伴随着世界范围内多个制药公司对海洋多糖药物的临床研发的资金投入。国家食品药品监督管理局批准的我国自主研发的第一个海洋多糖药物—藻酸双酯钠(PSS),已用于心脑血管类疾病的治疗近30年。本文综述了国内以海洋多糖为原料开发出的3种已上市药物(PSS、PGMS、FPS)和5种临床研究中的药物(HS971、911、PGS、PS916、HS203)的结构特征、药理活性、临床应用等,并探讨了海洋糖类药物的优缺点,从而为未来海洋多糖类药物的研究与开发提供参考。

海茸多糖的分离纯化与结构表征

目的从海茸(Durvillaea antarctica)中提取分离多糖并对其结构进行表征。方法采用冷水提取,然后用离子交换色谱柱分离纯化得到多糖HRC0和HRC1,用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定相对分子质量,用高效液相色谱法(HPLC)测定单糖组成,红外光谱(IR)和核磁共振波谱法(~1H-NMR,^(13)C-NMR)对其化学结构进行表征。结果 HRC0是一种相对分子质量为127.9 kD的线型β-1,3-葡聚糖;HRC1是一种相对分子质量为208.1 kD,且甘露糖醛酸含量高达83%的褐藻胶。结论海茸冷水提取物中主要是β-1,3-葡聚糖和高甘露糖醛酸含量的褐藻胶。

运用酶解及氘代PMP衍生方法对鲨鱼硫酸软骨素结构的液质联用分析

目的对鲨鱼来源的硫酸软骨素结构的鉴定方法进行研究。方法合成了3种氘代3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮(PMP),运用4种不同分子量的PMPs(d0-,d3-,d5-及d8-PMP)对酶解后的鲨鱼硫酸软骨素进行了衍生,运用液质联用分析法鉴定了7种二糖及4种含2、3、4个硫酸根的四糖结构。结果质谱结果表明4种PMPs对降解的各种二糖与四糖的衍生效率相当。结论本实验为同时分析比较不同批次及不同来源的鲨鱼硫酸软骨素的结构提供了1种新型、快速、准确的定量定性方法。

糖芯片技术研究琼胶寡糖与凝集素RCA_(120)相互作用

以琼胶糖为原料,通过酸法与酶法降解以及凝胶过滤色谱分离,获得了9种寡糖.采用还原胺化法将其与1,2-二-十六烷基-3-磷脂酰乙醇胺甘油(DHPE)偶联,获得了相应拟糖脂.采用糖芯片技术,通过与标准寡糖(LNnT与LNT)比较,评价了其与凝集素RCA120的相互作用.首次发现,酸法水解得到的琼胶寡糖与RCA120作用力明显高于LNnT,表明具有Galβ1,4AnG-R结构类型的寡糖与RCA120亲和力强于Galβ1,4GlcNAc-R,且亲和力的大小与聚合度无关.