人参皂苷Rg1抗同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及相关机制研究

目的探讨人参皂苷Rg1抗同型半胱氨酸(Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的作用及相关机制。方法体外培养HUVECs细胞,采用琼脂糖凝胶电泳和末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting分析各组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和蛋白质的表达。结果琼脂糖凝胶电泳显示:与对照组和Rg1组比较,Hcy组可见特征性DNA的"梯状"条带。TUNEL染色显示:与对照组和Rg1组比较Hcy组细胞凋亡率增加差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR显示:与对照组和Rg1组相比,Hcy组eNOS mRNA水平表达降低差异有统计学意义(P<0.01);与Hcy组相比,Hcy+Rg1组eNOS mRNA水平表达增加差异有统计学意义(P<0.01),但仍低于对照组和Rg1组,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blotting显示:与对照组和Rg1组相比,Hcy组eNOS蛋白水平表达降低差异有统计学意义(P<0.01);与Hcy组相比,Hcy+Rg1组eNOS蛋白水平表达增加差异有统计学意义(P<0.01),但仍低于对照组和Rg1组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1能够抑制Hcy诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,此作用可能与上调血管内皮细胞eNOS水平有关。

HPV16 DNA阳性乳腺良、恶性病变组织中E6和E7蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)DNA阳性乳腺良、恶性病变组织中E6和E7蛋白的表达情况。方法:以经PCR筛选证实的HPV16DNA阳性的56例乳癌和41例乳腺良性病变组织为研究对象,采用Westernblotting方法检测HPV16E6和E7蛋白。结果:56例HPV16DNA阳性乳癌组织中,HPV16E6、E7和E6/E7共表达阳性率分别为67.9%(38/56)、75.0%(42/56)和57.1%(32/56);41例HPV16DNA阳性乳腺良性病变组织中,HPV16E6、E7和E6/E7共表达阳性率分别为36.6%(15/41)、43.9%(18/41)和24.4%(10/41)。HPV16DNA阳性乳癌组织中E6、E7和E6/E7共表达阳性率均高于乳腺良性病变组织(χ2分别为9.34,9.70,10.34,P均<0.01)。HPV16DNA阳性乳癌组织中E6、E7和E6/E7共表达阳性率与患者年龄和肿瘤组织学类型无关(P均>0.05),但与淋巴结转移有关(χ2分别为3.88,15.86,9.34,P均<0.05)。结论:HPV16E6和E7蛋白在乳癌发生发展中具有重要作用,并与乳癌淋巴结转移有关。

Calphostin C对乳腺癌细胞增殖的抑制作用及相关机制

目的研究Calphostin C对乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖的影响及初步机制。方法通过观察Calphostin C处理MDA-MB-435S细胞前后细胞的生长速度、倍增时间、克隆形成率和细胞周期分布等变化,探讨Calphostin C对MDA-MB-435S细胞增殖的影响;通过Western blotting、免疫细胞化学染色和RT-PCR等方法探讨Calphostin C影响MDA-MB-435S细胞增殖的初步机制。结果与MDA-MB-435S亲本细胞(对照组)相比,Calphostin C处理的MDA-MB-435S细胞(实验组)生长速度明显减慢,倍增时间明显延长(P<0.01),并且呈现浓度和时间依赖性;对照组和实验组细胞克隆形成率分别为(82.33±6.81)%和(22.00±1.73)%,差异有统计学意义(P<0.01);实验组细胞周期出现明显的G1期阻滞(P<0.01)。Western blotting和免疫细胞化学染色结果显示,与对照组细胞相比,实验组细胞中蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)表达没有明显变化,但活性状态(胞质转位至胞膜)的PKCα显著减少。West-ern blotting和RT-PCR结果显示,与对照组细胞相比,实验组细胞中p53、Cyclin A和Cyclin B表达没有明显变化,但p21表达上调,Cyclin E表达下调。结论Calphostin C可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-435S的增殖,该作用可能与其抑制PKCα活性、上调p21表达和下调Cyclin E表达有关。

HPV16 E7蛋白阳性和阴性乳癌组织中P16蛋白与p16基因启动子区甲基化检测

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7蛋白阳性(E7+)和阴性(E7-)乳癌组织中P16蛋白表达与p16基因启动子区甲基化状态的关系,以揭示HPV16E7+乳癌组织中P16蛋白高表达的可能机制。方法:以经PCR筛选证实的HPV16DNA阳性的56例乳癌组织(经Westernblotting证实其中42例HPV16E7+,14例E7-)为研究对象。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测癌组织中p16基因启动子区甲基化状态;采用Westernblotting方法测定P16蛋白。结果:42例HPV16E7+乳癌组织中,p16基因启动子区甲基化率为11.9%(5/42),P16蛋白阳性率85.7%(36/42),2者表达密切相关(rp=0.912,P<0.001)。14例HPV16E7-乳癌组织中,p16基因启动子区甲基化率为78.0%(11/14),P16蛋白阳性率21.4%(3/14),2者表达有较密切的关系(rp=0.779,P=0.043)。HPV16E7+乳癌组织中p16基因启动子区甲基化率低于HPV16E7-乳癌组织(χ2=17.405,P<0.01),P16蛋白阳性率高于HPV16E7-乳癌组织(χ2=20.525,P<0.01)。结论:HPV16E7蛋白可能通过降低p16基因的甲基化使P16蛋白表达水平升高,从而在乳癌的发生、发展过程中发挥重要作用。

L型氨基酸转运体1和血管内皮生长因子在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨L型氨基酸转运体1(LAT1)和血管内皮生长因子(VEGF)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测68例PTC和相应癌旁组织中LAT1蛋白及VEGF蛋白的表达,并分析LAT1与PTC临床病理参数的关系及LAT1和VEGF的相关性。结果 LAT1蛋白在PTC组织和相应癌旁组织中的阳性表达率分别为83.8%和8.8%,VEGF蛋白在PTC组织和相应癌旁组织中的阳性表达率分别为88.2%和7.4%,LAT1蛋白和VEGF蛋白在PTC组织中的阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05);LAT1蛋白在PTC组织中的阳性表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、性别和肿瘤大小无关(P>0.05);PTC组织中LAT1蛋白和VEGF蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论 LAT1可能通过调控VEGF表达而促进PTC的发生与演进,并可能成为PTC治疗的一个新的分子靶点。

乳腺良、恶性病变组织中人乳头瘤病毒检测和分型

目的:研究乳腺良、恶性病变组织中人乳头瘤病毒(HPVs)感染情况。方法:收集新鲜乳癌组织标本73例和乳腺良性病变组织标本84例,采用PCR方法对乳腺良、恶性病变组织中HPVs进行检测和分型。结果:73例乳癌组织中,HPV16阳性率为76.7%(56/73),高危型HPVs(HPV16和59)总阳性率76.7%(56/73);其中HPV16单独感染20例,HPV16、59混合感染6例,HPV16、6/11混和感染28例,3者混和感染2例。84例乳腺良性病变组织中,HPV16阳性率为48.8%(41/84),高危型HPVs总阳性率为51.2%(43/84);其中HPV16单独感染15例,HPV59单独感染2例,HPV6/11单独感染2例,HPV16、6/11混和感染24例,3者混和感染2例。乳腺良、恶性病变组织中均未检测到HPV18、31、33、52和58。乳癌组织中HPV16阳性率和高危型HPVs总阳性率高于乳腺良性病变(χ2分别为12.879,10.921,P<0.01)。浸润性导管癌组织中HPV16阳性率为86.0%(43/50),高于浸润性小叶癌组织中的56.6%(13/23)(χ2=7.663,P<0.01)。结论:HPV16在乳癌发生发展中可能具有重要作用,与乳癌组织学类型有关;其与其他HPVs亚型的混合感染值得重视。

HPV16 E7蛋白阳性和阴性乳癌组织中细胞周期调控相关基因蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7蛋白阳性(E7+)和阴性(E7-)乳癌组织中细胞周期调控相关基因蛋白表达的变化。方法:56例乳癌组织经PCR筛选证实HPV16 DNA阳性,其中42例HPV16 E7+,14例E7-。采用Western blotting方法检测癌组织中细胞周期调控相关基因蛋白CyclinA、CyclinD、CyclinE、P21和P27的表达。结果:42例HPV16E7+乳癌组织中,CyclinA、CyclinD、CyclinE、P21和P27蛋白阳性率分别为97.6%(41/42)、76.2%(32/42)、92.9%(39/42)、9.5%(4/42)和40.5%(17/42);14例HPV16E7-乳癌组织中,CyclinA、CyclinD、CyclinE、P21和P27蛋白阳性率分别为64.3%(9/14)、78.6%(11/14)、57.1%(8/14)、50.0%(7/14)和42.9%(6/14)。与HPV16E7-乳癌组织相比,HPV16E7+乳癌组织中CyclinA和CyclinE蛋白表达均上调(χ2分别为12.196,9.929,P均<0.01),P21表达下调(χ2=10.898,P<0.01),而CyclinD和P27的表达均无明显变化(χ2分别为0.033,0.025,P均>0.05)。结论:HPV16E7可通过统计量上调CyclinA和CyclinE表达以及下调P21表达而在乳癌发生发展中发挥重要作用。

p53与DNA拓扑异构酶Ⅱα在胆囊腺癌中的表达及临床意义

目的探讨突变型p53与DNA拓扑异构酶Ⅱα(TopoisomeraseⅡα,TOPOⅡα)在胆囊癌前病变及腺癌中的表达特点及临床意义。方法通过免疫组织化学方法检测胆囊腺肌瘤样增生(腺肌瘤/病,n=29)、慢性胆囊炎(n=52,对照组)、胆囊低级别上皮内瘤变(n=21)、胆囊高级别上皮内瘤变(n=19)、胆囊浸润性腺癌(n=64)中p53和TOPOⅡα的表达;分析p53和TOPOⅡα与胆囊腺癌临床病理参数的关系以及二者表达的相关性。结果 p53和TOPOⅡα在胆囊腺肌瘤样增生(腺肌瘤/病)中表达极低,而在胆囊腺癌中呈高表达(P<0.05)。胆囊腺癌中p53的表达(78.12%,50/64)明显高于慢性胆囊炎(1.92%,1/52)、低级别上皮内瘤变(23.81%,5/21)和高级别上皮内瘤变(47.37%,9/19)(χ~2=85.395,P<0.05);胆囊腺癌中TOPOⅡα的表达(76.56%,49/64)明显高于慢性胆囊炎(3.85%,2/52)、低级别上皮内瘤变(28.5%,6/21)和高级别上皮内瘤变(52.63%,11/19)(χ~2=81.127,P<0.05)。腺癌中p53、TOPOⅡα的表达:临床分期Ⅲ—Ⅳ明显高于Ⅰ—Ⅱ者(χ~2=13.042,P=0.000;χ~2=16.663,P<0.000),术后5年死亡明显高于生存者(χ~2=8.591,P=0.003;χ~2=16.154,P<0.000),低分化腺癌明显高于高、中分化腺癌(χ~2=4.790,P=0.029;χ~2=5.182,P=0.023);p53和TOPOⅡα在胆囊腺癌的表达呈正相关(r=0.421,P=0.001)。结论联合检测突变型p53与TOPOⅡα在胆囊良、恶性病变中有很好的鉴别诊断价值。突变型p53与TOPOⅡα可作为评估胆囊癌发展及预后的参考指标,且TOPOⅡα可作为增殖指数反映肿瘤细胞的增殖状态。

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法体外培养HUVECs,取对数生长期HUVECs细胞接种96孔培养板中,常规培养细胞24 h后,弃掉旧培养基,加入新Ham′s F12k培养基,并分别加入AngⅡ,使其终浓度分别为0μmol.L-1、0.01μmol.L-1、0.1μmol.L-1、1μmol.L-1和10μmol.L-1,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测不同浓度AngⅡ在不同时间点的细胞活性,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果MTT结果:与对照组相比,1μmol.L-1AngⅡ组作用24 h和10μmol.L-1AngⅡ组作用12 h、18 h和24 h的HUVECs的细胞活性均显著下降(P<0.05或P<0.01),并呈现时间依赖性;其余各组差异均无统计学意义(P>0.05)。琼脂糖凝胶电泳结果:10μmol.L-1AngⅡ组作用18 h的HUVECs呈现明显的"梯状"DNA断裂条带。流式细胞术结果:对照组和10μmol.L-1AngⅡ组作用18 h的HUVECs细胞凋亡率分别为(1.11±0.54)%和(19.87±3.18)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论10μmol.L-1AngⅡ可通过诱导细胞凋亡引起HUVECs损伤,从而可能在动脉粥样硬化发生发展中发挥作用。

钙磷酸蛋白C对乳癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响

目的:研究钙磷酸蛋白C对乳癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响及相关机制。方法:采用倒置显微镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术等方法观察钙磷酸蛋白C处理前后MDA-MB-435S细胞形态、基因组DNA断裂和凋亡细胞数的变化;采用RT-PCR检测钙磷酸蛋白C处理前后MDA-MB-435S细胞凋亡相关基因bcl-XL、bcl-2、IAP-1、bax及Smac mRNA表达的变化;采用Western blotting法测定Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:与MDA-MB-435S亲本细胞(对照组)相比,钙磷酸蛋白C处理后的MDA-MB-435S细胞(实验组)出现凋亡形态学特征(如胞膜发泡、染色质凝集、凋亡小体形成等)改变,显示特征性的DNA"梯状"断裂变化,凋亡细胞数明显增多。RT-PCR和Western blotting结果显示:与对照组相比,实验组细胞中促凋亡基因bax和Smac mRNA表达上调,抗凋亡基因bcl-2mRNA表达下调,但抗凋亡基因bcl-XL和IAP-1mRNA表达没有明显变化;实验组Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。结论:钙磷酸蛋白C可诱导MDA-MB-435S凋亡,该作用可能与上调bax和Smac基因表达及下调bcl-2基因表达有关。

HPV16 E7蛋白阳性和阴性乳癌组织中Rb和P16蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7蛋白阳性(E7+)和阴性(E7-)乳癌组织中Rb和P16蛋白的表达及意义。方法:以经PCR筛选证实的HPV16 DNA阳性的56例乳癌组织(经Western blotting证实42例HPV16E7+,14例E7-)为研究对象,采用Western blotting方法检测癌组织中Rb和P16蛋白的表达。结果:HPV16E7+、HPV16E7-乳癌组织中,Rb蛋白阳性率分别为9.5%(4/42)、50.0%(7/14),P16蛋白阳性率分别为85.7%(36/42)、21.4%(3/14),HPV16E+和E7-乳癌组织中P16和Rb蛋白阳性率差异均有统计学意义(χ2=20.525,10.898,P均<0.001)。HPV16E7+乳癌组织中,Rb和P16蛋白表达有关(rp=0.792,P=0.003);HPV16E7-乳癌组织中,Rb和P16蛋白表达无关(P=0.182)。结论:HPV16E7可通过降解Rb,促进P16蛋白表达,从而在乳癌发生发展中发挥作用。

人参皂甙Rg1对同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的逆转作用

目的人参皂甙Rg1对同型半胱氨酸(homocy steine,Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的逆转作用。方法体外培养HUVECs,采用台盼蓝染色方法筛选人参皂甙Rg1最适浓度。将细胞分为对照组(无任何诱导物)、Hcy组(10μmol·L-1Hcy)、Hcy+Rg1组(10μmol·L-1Hcy和40mg·L-1Rg1)和Rg1组(单独用40mg·L-1Rg1处理的细胞),作用时间为24h。琼脂糖凝胶电泳和末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况。结果台盼蓝染色结果显示:人参皂甙Rg1的最适浓度40mg·L-1。琼脂糖凝胶电泳结果显示:对照组和Rg1组未见凋亡条带,Hcy组可见清楚的细胞凋亡特征性的"梯状"条带,而Hcy+Rg1组可见不明显的细胞凋亡特征性的"梯状"DNA断裂条带。TUNEL染色结果显示:与对照组和Rg1组相比,Hcy组细胞凋亡数量显著增加(P<0.01);与Hcy组相比,Hcy+Rg1组细胞凋亡数量显著减少(P<0.01),凋亡百分比由33.733%下降至9.200%,但仍高于对照组和Rg1组(P<0.01)。结论 40mg·L-1人参皂甙Rg1可一定程度逆转Hcy诱导的HUVECs凋亡。

HPV16 E6蛋白阳性和阴性乳癌组织中p53基因检测

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6蛋白阳性(E6+)和阴性(E6-)乳癌组织中p53基因的状态和表达。方法:以经PCR筛选证实HPV16 DNA阳性的56例乳癌组织(Western blotting证实38例HPV16 E6+,18例E6-)为研究对象,PCR法扩增p53基因保守核心区DNA序列,测序后与Genbank公布的野生型p53(wtp53)基因序列比对;采用RT-PCR和Western blotting方法分别检测p53 mRNA和P53蛋白。结果:HPV16 E6+和HPV16 E6-乳癌组织中,p53基因突变率分别为15.8%(6/38)和72.2%(13/18),2者比较差异有统计学意义(χ2=17.352,P<0.001);p53基因突变主要发生在第5、6、7和8外显子;第248和273位密码子突变频率较高;除1例无义突变和1例同义突变外,其余均为错义突变。98.2%(55/56)可检测出p53 mRNA。HPV16E6+/wtp53乳癌组织中P53蛋白阳性率9.4%(3/32),低于HPV16 E6+/mtp53和E6-/wtp53乳癌组织中的5/6和4/5(P<0.01)。结论:HPV16 E6+乳癌组织中基因突变不是p53灭活的主要机制,而E6-乳癌组织中p53灭活的主要方式是基因突变;HPV16 E6可通过降解wtP53蛋白而在乳癌发生发展中发挥作用。

乳腺癌的分子生物学指标与临床病理特征分析

目的探讨分析乳腺癌分子生物学指标的表达及临床病理特征之间的相关性。方法回顾性分析180例乳腺癌患者分子生物学指标PR、ER、HER-2、Ki-67等的测定结果和临床病理特征,探讨二者之间的相关性。结果和淋巴结未转移组相比,淋巴结转移组PR、ER阳性表达率明显较低(P<0.05),HER-2、Ki-67阳性表达率明显较高(P<0.05);和肿瘤大小的关系:和肿瘤<20 mm的患者相比,肿瘤>20 mm的患者PR、ER阳性表达率明显较低(P<0.05),HER-2、Ki-67阳性表达率明显较高(P<0.05);PR、ER和HER-2、Ki-67的表达呈现负相关关系(P<0.05)。结论乳腺癌分子生物学指标PR、ER、HER-2、Ki-67等的表达变化在乳腺癌患者预后评估及个体化治疗的提供等方面具有重要意义。

1986年—2017年针灸治疗头痛研究的文献计量学分析

目的利用可视化软件,以图形方式显示1986年-2017年针灸治疗头痛的研究趋势、研究热点和研究前沿。方法用预定义关键词搜索Web of Science数据库,检索时间范围设置为1986年1月-2017年12月,检索所有关于针灸治疗头痛的文献。以可视化软件CiteSpace为基础,通过频数、中心性、突发、聚类分析,可以直观地分析地区、研究机构、作者、关键词、引用参考文献、引用作者、引用期刊的基本规律,探索科研成果、研究合作网络、研究热点、科研趋势与研究前沿。结果获得文献487篇,经过CiteSpace软件去除重复后,共纳入475篇。出版物总数与引用的参考文献数的总体趋势随时间推移而逐渐增加,该领域科研产出最多的3个地区依次为是美国、德国和中国,最多产的研究机构是慕尼黑科技大学、哈佛大学、纪念斯隆凯特琳癌症中心。最多产和引用最多的期刊是Cephalalgia,共被引最高的期刊是Acupuncture Electro。最具代表性的参考文献是Linde K′s(2005),最重要的参考文献是Melchart D′s(1999)。本领域重要的作者是Linde K。本领域的研究前沿是针对慢性疼痛的治疗,针灸治疗头痛的热门话题包括研究方法、头痛的分类与综合治疗。结论通过对针灸治疗头痛研究的文献计量分析,发现国家、研究机构等之间的潜在规律,以可视化的形式快速准确地定位本领域内的研究趋势与研究热点,以便准确及时地把握研究方向。

HPV16E6和E7对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及其机制

目的探讨HPV16E6、E7和E6/E7同时稳定高表达对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响及其机制。方法利用脂质体介导将HPV16E6、E7和全长E6/E7转染MCF-7细胞,利用Western blot检测转染后E6和E7的表达。采用Transwell实验检测MCF-7细胞侵袭能力的变化,RT-PCR法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA的表达情况。结果在MCF-7-E6细胞克隆中,克隆1表达水平最高;MCF-7-E7细胞克隆中,克隆4表达水平最高;MCF-7-E6/E7细胞克隆中,克隆4表达水平最高。与MCF-7亲本和MCF-7-vect细胞比较,MCF-7-E6和MCF-7-E6/E7细胞穿过小室底膜的细胞数均显著增加(P<0.01)。在MCF-7-E6、MCF-7-E7和MCF-7-E6/E7细胞中MMP-2mRNA表达均显著增加。结论 HPV16E6和E7促进MCF-7细胞体外侵袭能力的机制之一可能是通过诱导MMP-2的表达。

骨唾液酸蛋白对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响

目的研究骨唾液酸蛋白（BSP）对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响及机制。方法通过划痕试验、Transwell侵袭实验、细胞黏附实验和反转录-聚合酶链反应等观察BSP对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响。结果BSP稳定高表达可使MCF-7细胞的侵袭能力明显增加。稳定高表达BSP的MCF-7-BSP细胞与胶原和纤维连接蛋白的黏附性增加,其基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9表达也增强。结论BSP可以促进MCF-7细胞侵袭转移能力,其可能的机制是通过增加细胞的黏附性、促进MMP-2和uPA表达等。