MiR-140-3p调节PI3K/Akt通路减轻缺氧复氧心肌细胞损伤的实验研究

目的:探讨miR-140-3p靶向调节PI3K/Akt通路对缺氧复氧心肌细胞再灌注损伤的影响。方法:对大鼠来源的H9C2心肌细胞进行缺氧/复氧以诱导细胞损伤,使用miR-140-3p mimics及其对照(NC)转染H9C2心肌细胞,再使用10μmol/L LY294002处理过表达miR-140-3p的H9C2细胞。将心肌细胞分为6组,分别为对照组(CON组)、H/R组(Model组)、Model+NC组、Model+miR-140-3p mimics组、Model+miR-140-3p mimics+LY294002组、Model+LY294002组。采用荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组miR-140-3p相对表达量,CCK-8法检测各组心肌细胞活力,流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡率,Western blot检测各组磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspases-3表达量。结果:与CON组比较,Model组miR-140-3p表达量、细胞活力以及Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05),Bax、Cleaved-caspases-3蛋白表达和凋亡率明显提高(P<0.05),与Model组比较,miR-140-3p过表达可上调miR-140-3p表达量、细胞活力以及Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白,下调Bax、Cleaved-caspases-3蛋白表达和凋亡率,LY294002可抑制miR-140-3p表达,下调细胞活力以及Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白,上调Bax、Cleaved-caspases-3蛋白表达和凋亡率。结论:MiR-140-3p可通过调节PI3K/Akt通路减轻缺氧复氧心肌细胞自噬和凋亡,进而减轻心肌损伤。

纳米氧化铈在阿霉素诱导心脏毒性中的作用及其对P53基因表达的影响

目的研究纳米氧化铈在阿霉素心脏毒性损伤中的作用及其对P53基因表达的影响,探讨纳米氧化铈对阿霉素心脏毒性损伤的作用机制。方法培养H9C2心肌细胞,随机分为5组:对照组、模型组(1μmol/L阿霉素)、纳米氧化铈组(10μg/ml纳米氧化铈)、实验组(1μmol/L阿霉素+10μg/ml纳米氧化铈)、阳性对照组(1μmol/L阿霉素+10μmol/L右丙亚胺)。建立阿霉素心脏毒性损伤模型,CCK-8法检测心肌细胞的存活率;生化法检测心肌细胞内乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量;流式细胞仪检测心肌细胞内活性氧(reactive oxygen,ROS)水平及细胞凋亡率;Western blot检测心肌细胞中Bax、Bcl-2及P53蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组的细胞存活率下降,细胞LDH、MDA含量上升,细胞内ROS水平和凋亡率增加,Bax和P53蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量下降,且Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.001);与模型组相比,实验组细胞存活率上升,细胞LDH、MDA含量下降,细胞ROS含量和凋亡率下降,Bax和P53蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高,且Bcl-2/Bax比值升高(均P<0.001)。结论纳米氧化铈能有效预防阿霉素诱导的心脏毒性损伤,其作用可能与下调P53基因的表达,抑制细胞凋亡相关。

纳米氧化铈在阿霉素心肌细胞损伤中的作用研究

目的:在体外细胞水平研究纳米氧化铈(cerium oxide nanoparticles,CeNPs)对阿霉素(doxorubicin,DOX)心肌细胞损伤的影响及可能的作用机制。方法:利用不同浓度DOX培养大鼠心肌细胞(H9C2)24 h,确定体外模拟DOX心肌损伤的最佳浓度。以此为基础,加入粒径为20 nm的不同浓度的CeNPs与DOX共处理24 h,同时设立正常对照组。采用细胞计数盒(CCK8)法测定心肌细胞活力,用流式细胞仪测定不同组活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达量,同时用蛋白免疫印迹法(Western-blot)测定不同组凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达量。结果:选择1μM DOX处理24 h作为造模浓度;与正常对照组相比,模型组心肌细胞存活率下降、ROS表达量增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达量下降、而促凋亡蛋白Bax的表达量升高(P<0.05)。与1μM DOX单独处理组相比,低浓度CeNPs(10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL)与1μM DOX共处理后心肌细胞存活率上升、ROS表达减少、抗凋亡蛋白Bcl-2表达量上调并且促凋亡蛋白Bax的表达量下调(P<0.05);而高浓度CeNPs(100μg/mL)与1μM DOX共处理后,相较于1μM DOX单独处理组,细胞存活率下降更明显(P<0.05)、ROS表达量增加(P<0.05),而凋亡相关蛋白的表达量没有明显变化(P>0.05)。结论:粒径为20 nm的低浓度CeNPs(10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL)可以通过缓解氧化应激水平,减少细胞凋亡保护DOX诱导的心肌细胞损伤;而高浓度CeNPs(100μg/mL)对DOX心肌损伤没有保护作用。

CeNPs在DOX诱导的心脏毒性中的作用及对SOD的影响

目的 探究CeNPs(纳米氧化铈)在DOX(阿霉素)诱导的心肌细胞损伤中的作用,以及CeNPs对DOX心肌细胞损伤中SOD活性的影响。方法 实验使用H9C2大鼠心肌细胞,DOX处理建立损伤模型,并将细胞随机分为5组:空白对照组、DOX损伤组、CeNPs组、DOX+CeNPs组、DOX+DEX(右丙亚胺,阳性保护药)组进行实验。通过CCK-8法测定存活率、Western Blot法测定蛋白表达量、生化法检测氧化应激指标SOD活性。结果 CCK-8法:DOX+CeNPs组相对于DOX组,细胞存活率显著增高(P<0.0001)。Western Blot法:DOX+CeNPs组与DOX组对比,Bax蛋白表达水平下降(P<0.0001),Bcl-2蛋白表达水平增高(P<0.05)。生化法检测:DOX+CeNPs组与DOX组对比,SOD活力升高(P<0.05)。结论 CeNPs能够提高DOX处理后的细胞存活率;CeNPs调控相关凋亡蛋白的表达减轻DOX处理后的细胞凋亡;CeNPs通过提高SOD活性改善DOX处理后的细胞氧化应激失平衡。

静脉血栓栓塞症患者活化蛋白C抗性及凝血因子Ⅴ活性和基因多态性研究

本研究旨在观察静脉血栓栓塞患者凝血因子Ⅴ(FactorⅤ,FⅤ)活性改变,检测活化蛋白C抗性(activatedprotein C resistance,APCR)和凝血因子Ⅴ基因FⅤLeiden、FⅤCambridge、FⅤHong Kong、FⅤAsp79His和FⅤI359T多态性。对95例静脉血栓栓塞患者(其中下肢深静脉血栓79例,肺栓塞4例,下肢深静脉血栓合并肺栓塞12例)和95例正常对照者。应用限制性内切酶片段长度多态性测定FV Leiden、FⅤCambridge和FⅤHong Kong多态性,用MassARRAYTM技术检测FⅤAsp79His、FⅤI359T多态性。以一期法和校正的APTT试验分别对其中的65例静脉血栓栓塞患者和60例正常对照者行凝血因子Ⅴ活性水平和活化蛋白C抵抗检测。结果表明:静脉血栓栓塞患者血浆凝血因子Ⅴ活性水平(108.03%±28.29%)高于对照组(95.17%±29.75%),差异有显著性统计学意义(P=0.008);静脉血栓栓塞组活化蛋白C抵抗阳性13例(20.0%),对照组3例(5.0%),二组比较,有统计学意义(P=0.012)。二组均未发现FV Leiden、FⅤCambridge、FⅤHong Kong、FVAsp79His和FV I359T多态性。结论:凝血因子Ⅴ活性升高和活化蛋白C抵抗是静脉血栓栓塞的危险因素,但APCR与FⅤLeiden、FⅤCambridge、FⅤHongKong、FⅤAsp79His和FⅤI359T多态性无关。

静脉血栓栓塞症亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的检测

目的本研究旨在检测MTHFR基因1298A/C、1793G/A和1317T/C多态性在静脉血栓栓塞患者的分布,研究这些多态性与静脉血栓栓塞症的相关性。方法95例静脉血栓栓塞患者(其中下肢深静脉血栓79例,肺栓塞4例,下肢深静脉血栓合并肺栓塞12例)和正常对照95名。应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱检测技术检测1298A/C、1793G/A和1317T/C多态性。结果1298A/C在正常人群中的分布AA、AC和CC分别为75.0%、23.9%和1.1%,A、C等位基因频率为87.0%和13.0%;1793G/A多态性在对照组的分布GG、GA和AA分别为85.0%、8.0%和1.0%,G、A等位基因频率为95.7%和4.3%。上述两基因多态性在对照组及静脉血栓栓塞症患者间频率的分布差异无统计学意义,且存在很强的连锁不平衡;所有研究对象未发现1317T/C突变。结论1298A/C、1793G/A和1317T/C多态性与静脉血栓栓塞症无相关性。

vWF研究进展

血管性血友病因子(von Willebrangfactor vWF),在正常止血过程中起重要作用.对其结构和功能的深入了解,将有助于人们更深刻地认识与之相关疾病的病理生理,进一步提高临床诊断和治疗水平.

静脉血栓栓塞患者凝血与抗凝血因子活性或含量的测定

目的观察静脉血栓栓塞患者血浆凝血因子和抗凝血因子活性或含量变化。方法95例静脉血栓栓塞患者和95名正常对照,用定量乳胶凝集试验行D-二聚体含量检测;一期法检测血浆凝血因子Ⅱ活性(FⅡ∶C)、凝血因子Ⅴ活性(FⅤ∶C)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ∶C)和凝血因子Ⅸ活性(FⅨ∶C);发色法底物检测蛋白C活性(PC∶A)和抗凝血酶活性(AT∶A)。结果与对照组相比,静脉血栓栓塞组血浆纤维蛋白原(Fg)含量、D-二聚体含量、FⅡ∶C、FⅤ∶C和FⅧ∶C水平均明显增高,FⅨ∶C与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);而PC∶A和AT∶A水平在静脉血栓栓塞组虽有降低,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论凝血因子联合作用在静脉血栓栓塞发病中起主要作用。

病毒性脑炎合并下肢深静脉血栓1例报道及文献复习

病毒性感染合并血栓者临床并不多见,而病毒性脑炎合并深静脉血栓(DVT)者更少见.就目前文献报道,主要与免疫功能、血栓倾向以及内皮细胞损伤等因素有关.其临床表现从轻微到严重昏迷不等.有的病例可以出现发热、头痛和(或)呕吐、抽搐、肌无力、脑膜刺激征;有些病人仅有轻微的症状或一过性的运动失调.本文报道1例病毒性脑炎合并左下肢深静血栓形成者,并作文献复习.

C反应蛋白及其多态性与冠心病

冠心病（coronary heart disease，CHD）是人类发病率和死亡率最高的疾病之一。研究显示，炎症反应与CHD的发生、发展密切相关，而C反应蛋白（Creactive protein，CRP）是系统性炎症的一个标志物，现仅就其多态性与冠心病的相关性予以综述。

血管紧张素Ⅱ诱导肿瘤细胞基质金属蛋白酶表达的研究进展

血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,ANG Ⅱ）是肾素-血管紧张素系统（renin angiotensin system,RAS）的一个主要生物活性激素,在调控血管内环境稳定中起重要作用.1996年Haznedaroglu等提出局部RAS的表达可影响生理和病理性血细胞产生的假设,经长时间研究[1],证实ANG Ⅱ受体1型（ANG Ⅱ type-1 receptor,AT1 R）在大鼠的造血系统和骨髓基质的CD34^＋ （hematopoieticstem cell,HSC）中表达.ANG Ⅱ可以通过激活CD34^＋细胞上的AT1 R来调节造血干细胞至红系和髓系祖细胞的增殖和分化过程.RAS参与了骨髓生理病理造血.

索他洛尔对心率变异性的影响

目的 :观察索他洛尔对心率变异性的影响 ;方法 :2 1例频发室早患者 ,服用索他洛尔 ,服药前及服药 2周行 2 4hHolter检查 ,比较频域和时域指标的变化 ;结果 :服药后RMSSD、Pnn5 0、SDNNindex均增加 ,SDANN、SDNN降低 ,HF增加 ;结论 :索他洛尔对时域指标的影响较敏感 ,该药可能对交感和副交感活性均有影响 ,但以β阻滞作用为主。

急性白血病治疗前后骨髓中VEGF、CTGF mRNA水平的研究

目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、结缔组织生长因子(CTGF)m RNA在急性白血病患者骨髓表达及治疗前后变化情况,研究其在白血病发生发展、浸润转移中的相互作用和临床意义。方法 71例初发急性白血病患者,对照组30例缺铁性贫血患者。收集研究对象骨髓液单个核细胞,应用Real-time PCR方法对VEGF-C及CTGF m RNA表达水平进行检测。结果初发急性白血病患者骨髓中VEGF-C、CTGF m RNA表达明显高于对照组,两者呈正相关(r=0.709,P<0.05)。经1周期化疗后,达完全缓解患者及部分缓解患者与未治疗时比较,VEGF-C、CTGF m RNA表达水平明显降低(P<0.05),未缓解患者与初发时比较,差异无统计学意义(P>0.05)。VEGF-C、CTGF m RNA的表达在急性白血病骨髓增生不同程度各组及是否伴髓外浸润各组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VEGF-C、CTGF在急性白血病发生发展中具有协同作用,共同参与了白血病的发生、浸润及转移,并且与白血病预后相关。

白血病患者骨髓中CTGF、CYR61、VEGF-C、VEGFR-2mRNA、蛋白的表达及其临床相关性研究

本研究旨在探讨白血病患者骨髓单个核细胞中结缔组织生长因子(CTGF)、富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)mRNA及蛋白的表达水平以及它们在白血病发生、发展、浸润转移中的作用和临床意义。初发白血病100例患者,26例完全缓解后急性白血病患者,30例对照者纳入本研究。收集骨髓单个核细胞,应用real time PCR和Western blot分别检测白血病患者及对照者CTGF、CYR61、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA及蛋白的表达水平。结果表明,急性白血病患者骨髓中上述4种因子mRNA、蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。急性白血病缓解后只有CTGF mRNA表达与对照组比较有差异(P<0.05),且CTGF mRNA表达在急性白血病不同骨髓增生中有统计学意义(P<0.05)。CTGF蛋白表达在白血病不同染色体核型组有差异(P<0.05),CYR61和VEGF-C蛋白表达在急性白血病不同程度骨髓增生组中比较差异有统计学意义(P<0.05)。CML组CTGF、CYR61、VEGF-C mRNA和蛋白表达高于对照组(P<0.05),CLL组CTGF和CYR61蛋白表达水平高于对照组。在性别、髓外浸润等因素分组比较中,上述4种因子mRNA和蛋白表达水平比较均无差异有统计学意义(P>0.05)。在相关性分析中,白血病患者上述4种因子mRNA表达水平与骨髓原始细胞计数呈正相关(P<0.05),CTGF、CYR61、VEGF-C蛋白表达水平与其呈正相关(P<0.05)。除了VEGFR-2与骨髓原始细胞计数无相关性外,这些因子的mRNA及蛋白表达水平与骨髓原始细胞计数呈正相关。结论:CYR61、CTGF、VEGF-C和VEGFR-2 mRNA和蛋白表达在急慢性白血病中都有作用。在急性白血病(AML/ALL)中上述4种因子高表达,在CML中除了VEGFR-2外其他因子也高表达,多数因子的表达与骨髓原始细胞计数呈正相关。联合阻断这些相关的血管性因子可能对白血病靶向治疗有重要作用。

白血病患者骨髓CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的表达及其临床意义

本研究检测白血病患者骨髓中CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的表达水平,探讨白血病发生、发展、浸润、转移中CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2蛋白的相互作用及其临床意义,寻找新的肿瘤标记物,为白血病的诊治提供新的思路。白血病74例,男38例,女36例,年龄6-77岁,中位年龄45岁。对照组12例,男7例,女5例。年龄16-78岁,中位年龄46岁。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的水平。结果表明,各组初发急性和慢性白血病患者骨髓中CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的表达与对照组相比均显著升高(p<0.05)。急性白血病缓解后CYR61和CTGF mRNA的表达高于对照组(p=0.039,0.025)。CTGF mRNA的表达在B-ALL组表达最高,高于AML、CML、CLL、T-ALL组(p=0.002,0.034,0.002,0.010)。AML组CYR61与CTGF、CYR61与VEGF-C、CTGF与VEGFR-2 mRNA的表达均呈正相关(r=0.452,0.466,0.464;p=0.045,0.038,0.039),CML组CYR61与VEGF-C mRNA的表达呈正相关(r=0.882,p=0.000)。急性白血病伴有髓外浸润者VEGF-C和VEGFR-2 mRNA的表达高于不伴有髓外浸润者(p=0.028,0.047)。AML组VEGF-C mRNA的表达与原始细胞数呈正相关(r=0.418,p=0.034)。结论:CYR61、CTGF及VEGF-C、VEGFR-2在白血病发病中相互作用,促进白血病发展、转移及浸润;且这些因子在不同类型白血病及髓外浸润中的作用存在差异。它们可能成为检测白血病的肿瘤标记物;阻断上述因子有可能阻断肿瘤的生长和转移。

SDF-1/CXCR4轴在白血病患者骨髓中的表达及与血管新生的关系

目的探讨SDF-1/CXCR4轴在白血病患者骨髓中的表达及与血管新生的关系。方法采用CD45/SSC设门四色流式细胞仪检测55例白血病患者骨髓的CXCR4表达。采用ELISA法检测SDF-1/VEGF;采用Envinson二步法检测骨髓组织MVD;多重PCR法检测白血病患者IgH、TCRγ链V区和J区,采用G-显带技术进行细胞遗传学核型分析。结果 AML组SDF-1(2145.21±329.45)pg/ml、CXCR4阳性表达率(60.01±18.5)%;ALL组SDF-1(2549.02±303.4)pg/ml、CXCR4阳性表达率(70.22±12.73)%;CML组SDF-1(1929.72±253.81)pg/ml、CXCR4阳性表达率(40.05±16.69)%;CRAL组SDF-1(2070.98±159.98)pg/mL、CXCR4阳性表达率(58.4±11.8)%;与对照组相比均明显增高,P<0.05。急淋SDF-1/CXCR4表达率高于其他白血病组;白血病SDF-1/CXCR4表达与相关因素的分析中发现,ALL与外周血WBC数量有相关性(r=0.534、0.567,P<0.01),与急性白血病伴髓外浸润者有意义(P<0.05);SDF-1/CXCR4表达与白血病患者血小板计数、年龄、性别差异、骨髓增生程度、染色体改变、急性白血病骨髓细胞CD34+表达、ALL的IgH和TCRγ链V区和J区基因重排等因素无明显关系。白血病患者骨髓SDF-1、CXCR4、VEGF的相关系数为0.552,0.553,0.531,P<0.05。三者具有显著相关性。结论白血病骨髓液中SDF-1含量及各群细胞CXCR4高表达,其中ALL表达最高;急性白血病缓解后依然高表达;SDF-1/CXCR4表达与ALL的外周血白细胞数量、有髓外浸润者有关,白血病中SDF-1/CXCR4、VEGF高表达并且相互之间存在有相关性,与白血病血管新生有关联。

以出血为首发症状的原发性血小板增多症10例临床诊治体会

目的探讨在临床工作中以出血为首发症状的原发性血小板增多症(ET)的临床表现及诊治体会。方法对我院2014年6月~2016年6月收治的10例主要以出血为首发症状的原发性血小板增多症患者的临床资料进行分析、总结,针对不同表现给予的不同治疗。结果 10例ET患者治疗后血小板均较入院时明显下降,波动范围(290~899)×10~9/L,2例消化道出血患者血红蛋白恢复正常,急性出血症状均得到控制。随访6个月时10例患者血小板先后恢复正常。结论原发性血小板增多症容易合并血栓已被人们普遍认识且发病率较高,而出血虽也是此病的临床表现之一,但发病率低且报道较少,尤其对于短期急性出血所致失血性休克的报道更为罕见,所以快速明确病因积极的救治对疾病的预后尤为重要。

亚甲基四氢叶酸还原酶G1793A多态性与反复妊娠丢失相关性研究

目的检测反复妊娠丢失妇女中血浆同型半胱氨酸水平(homocyste ine,Hcy)及亚甲基四氢叶酸还原酶(m ethylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)G1793A的多态性.方法选择不明原因的反复妊娠丢失达2次或3次以上妇女71例,有正常分娩史妇女93例作为对照组。用全自动荧光免疫分析仪测定同型半胱氨酸水平。MALD I-TOF质谱检测技术检测MTHFR G1793A的多态性。结果妊娠丢失妇女同型半胱氨酸水平明显高于正常对照组,分别为(14.58±8.45)μmol/L和(7.48±2.95)μmol/L,P<0.05。G1793A等位基因突变在患者组和对照组分别为22%,3.8%,差异有显著性(P<0.05,RR 3.48)MTHFR G1793A多态性的同型半胱氨酸水平无显著差异。结论反复妊娠丢失与高半胱氨酸血症密切相关,在中国MTHFR G1793A突变可能是反复妊娠丢失独立的危险因素。但MTHFR G1793A突变与高半胱氨酸血症未证实有相关性。