黄芪建中汤干预胃溃疡的药理实验及分子生物学作用机制

目的:基于生物信息学分析黄芪建中汤治疗胃溃疡(GU)的作用机制,并结合动物实验进一步验证。方法:在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、成分靶点预测数据库(Swiss Target Prediction)中收集黄芪建中汤的活性成分和作用靶点;利用基因数据库(GeneCards)、药物数据库(Drug Bank)等提取GU疾病靶点;在Cytoscape 3.7.2软件中获取黄芪建中汤防治GU的“活性成分-潜在治疗靶点”图,借助STRING和DAVID数据库依次获取蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络、基因本体(GO)和基因组百科全书(KEGG)富集分析;并通过分子对接和动物实验验证黄芪建中汤防治GU的可能机制。结果:黄芪建中汤治疗GU有131个潜在靶点,其中核心靶点为磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、蛋白激酶B1(AKT1)等,KEGG分析提示磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)等信号通路发挥着重要作用。分子对接提示核心靶点与核心成分对接良好。动物实验显示,与正常组比较,模型组溃疡指数增高、胃组织出现炎性浸润,白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达显著升高(P<0.01),胃组织PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,给药组大鼠胃损伤明显减轻,IL-6、IL-β、TNF-α表达显著下调(P<0.01),PI3K、p-AKT蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:黄芪建中汤对GU的干预作用具有多途径、多靶点的特性,可能是通过激活PI3K/AKT信号通路来加速胃黏膜修复,并降低炎症而减轻胃损伤。

黄芪建中汤对脾胃虚寒证胃溃疡大鼠炎症因子及HGF/c-Met信号通路的影响

目的观察黄芪建中汤对脾胃虚寒证胃溃疡大鼠炎症因子及HGF/c-Met信号通路的影响。方法将60只大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、黄芪建中汤组[黄芪建中汤6.8 g/(kg·d)]、奥美拉唑组[奥美拉唑肠溶胶囊4.2 mg/(kg·d)],每组15只大鼠。正常组除外,其他组采用耗气破气法结合饥饱失常法进行大鼠脾胃虚寒证模型造模,再采用冰醋酸法建立大鼠胃溃疡模型。比较各组大鼠体质量、溃疡指数;HE染色观察大鼠胃组织病理学变化;采用酶联免疫吸附法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;免疫组化法检测胃组织中肝细胞生长因子(HGF)、肝细胞生长因子受体(c-Met)表达;荧光定量PCR检测胃组织HGF、c-Met m RNA水平。结果与正常组相比,模型组大鼠体质量降低,溃疡指数升高,IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高,HGF升高,HGF、c-Met m RNA升高(P<0.05);与模型组相比,黄芪建中汤组和奥美拉唑组大鼠体质量升高,溃疡指数降低,IL-6、IL-1β、TNF-α降低,HGF升高,HGF、c-Met mRNA升高(P<0.05)。结论黄芪建中汤可以通过抑制炎症因子、调节HGF/c-Met通路的表达促进胃黏膜修复。

四磨汤对功能性消化不良大鼠CNP/NPR-B/cGMP信号通路的影响

目的 通过研究四磨汤对功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)模型大鼠CNP/NPR-B/cGMP信号通路的影响,进一步探讨其作用机制。方法 将Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、低浓度四磨汤组、中浓度四磨汤组、高浓度四磨汤组以及莫沙必利组。参考文献中的方法使用夹尾刺激联合不规则饮食14 d制备FD大鼠模型。造模结束后,四磨汤低、中、高浓度组大鼠分别灌胃1.8、2.4、3.6 g/(kg·d)剂量的四磨汤药液,莫沙必利组灌胃0.305 mg/(kg·d)剂量的莫沙必利药液,对照组和模型组给予等体积蒸馏水,给药14 d。观测大鼠体质量变化;酚红法检测大鼠胃排空率;碳粉法检测大鼠小肠推进率;ELISA法检测血清中胃动素(motilin, MTL)、胃泌素(gastrin, GAS)、胃窦平滑肌C型利钠肽(C-type natriuretic peptide, CNP)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate, cGMP)的含量;RT-qPCR和Western blot分别检测胃窦平滑肌CNP、B型尿钠肽受体(type B urinary natriuretic peptide receptor, NPR-B)的基因和蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.05),胃排空率与小肠推进率明显减弱(P<0.05),血清MTL、GAS含量降低(P<0.05),胃窦平滑肌CNP、cGMP含量升高(P<0.05),CNP、NPR-B的m RNA和蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组相比,四磨汤各剂量组大鼠体质量显著增加(P<0.05),胃排空率和小肠推进率显著提高(P<0.05),血清MTL和GAS含量显著增加(P<0.05),胃窦平滑肌CNP、cGMP含量降低(P<0.05),CNP、NPR-B的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。结论 四磨汤通过抑制CNP/NPR-B/c GMP信号通路以促进胃肠动力可能是其治疗FD的作用机制之一。

黄芪建中汤对脾胃虚寒证胃溃疡大鼠胃黏膜保护作用的机制研究

目的基于动物实验研究黄芪建中汤对脾胃虚寒证胃溃疡的治疗作用及抗黏膜损伤机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、西药组及中药组,每组15只。除正常组外,另3组均应用耗气破气法+饥饱失常法+冰醋酸法复制脾胃虚寒证胃溃疡模型。中药组、西药组各予黄芪建中汤(6.8 g/kg)、奥美拉唑(4.2 mg/kg)灌胃,另两组则灌以等体积蒸馏水。给药20 d后计算胃溃疡指数;HE染色观察胃组织形态;ELISA法检测血清白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;RT-PCR检测胃组织肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、细胞间质上皮转换因子(cellular-mesenchymal epithelial transition factor,c-Met)、磷脂酰肌醇3-激酶(hosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA表达水平;Western blot法检测PI3K、磷酸化AKT(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)、EGFR蛋白表达;免疫组织化学检测胃组织HGF、c-Met的表达水平。结果与正常组比较,模型组胃溃疡指数增高(P<0.05),胃组织溃疡损伤明显,血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平增高(均P<0.05),胃p-AKT、AKT、EGFR蛋白及mRNA表达下降(均P<0.05);与模型组比较,中药组胃溃疡指数、炎症因子水平(均P<0.05)显著降低,胃黏膜受损程度改善(P<0.05),胃HGF、c-Met、PI3K、p-AKT、EGFR蛋白及mRNA表达水平上调(均P<0.05)。结论黄芪建中汤对胃溃疡有良好的治疗作用,其机制可能与激活HGF/c-Met、PI3K/AKT通路以增强胃黏膜的防御机制和减轻炎症反应有关。

黄芪建中汤对胃溃疡大鼠血清炎症因子、胃黏膜表皮生长因子受体表达的影响

目的:观察黄芪建中汤对脾胃虚寒型胃溃疡大鼠血清炎症因子、胃黏膜表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,探究黄芪建中汤改善脾胃虚寒型胃溃疡的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为正常组、模型组、奥美拉唑组和黄芪建中汤组。除正常组外,其余组大鼠用耗气破气法结合饥饱失常法以及冰醋酸法建立脾胃虚寒证胃溃疡大鼠模型。模型组继续隔日上午给予致虚药并当日禁食,共持续20 d;奥美拉唑组、黄芪建中汤组大鼠在模型组的基础上每日下午使用相应药物治疗;正常组隔日上午及每日下午蒸馏水灌胃。观察各组大鼠形态改变,HE染色观察大鼠胃黏膜病理学改变,评估胃黏膜损伤指数(UI),ELISA法检测大鼠血清炎症因子水平,分别采用PCR、Western blot检测大鼠胃黏膜EGFR mRNA、蛋白表达。结果:黄芪建中汤组与奥美拉唑组大鼠胃黏膜损伤较模型组明显减轻,均可见轻度水肿,有少量炎性细胞浸润,腺体排布大致规整,未见明显溃疡。与正常组比较,模型组UI评分显著增加(P<0.01);与模型组比较,黄芪建中汤组和奥美拉唑组大鼠UI评分明显降低(均P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织EGFR mRNA及蛋白表达显著降低(均P<0.05);与模型组比较,奥美拉唑组、黄芪建中汤组大鼠胃黏膜组织EGFR mRNA及蛋白表达明显升高(均P<0.05);与正常组比较,模型组大鼠血清白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)水平显著升高(均P<0.01);与模型组比较,奥美拉唑组、黄芪建中汤组大鼠血清IL-1β、TNF-α及IL-6表达显著降低(均P<0.01)。结论:黄芪建中治疗脾胃虚寒型胃溃疡可显著改善胃黏膜损伤,其作用机制可能与黄芪建中汤上调EGFR mRNA及蛋白表达、降低炎症因子水平有关。

四磨汤对肝脾气滞证功能性消化不良大鼠十二指肠低度炎症及肥大细胞脱颗粒的影响

目的:观察四磨汤对肝脾气滞证功能性消化不良(FD)大鼠十二指肠低度炎症及肥大细胞脱颗粒的影响,探究四磨汤改善肝脾气滞证FD的作用及可能机制。方法:用随机数字表法将60只大鼠分为六组,分别为空白组、模型组、西药组、四磨汤高剂量组、四磨汤中剂量组、四磨汤低剂量组,除空白组外的组别选取不可预知的慢性应激法复制肝脾气滞证FD大鼠模型,造模成功后治疗组大鼠每天同一时间予以相应治疗药物灌胃,模型组大鼠则予以蒸馏水灌胃,每日不限饮食饮水。连续灌胃14 d。期间观察大鼠状态,记录各组大鼠体重及饮食饮水状态,最后检测各组大鼠十二指肠Tryptase基因表达、血清白介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:与空白组相比,模型组大鼠皮毛枯黄,性情暴躁而喜聚集于笼边,饮食饮水量减少且大便稀溏,体重降低(P<0.01),胃排空率和小肠推进率明显下降(P<0.01),十二指肠Tryptase、血清IL-1β及TNF-α的表达均显著增加(P<0.01);与模型组相比,治疗组大鼠温顺,皮毛顺泽,饮食饮水量增加且大便成形,体重增加(P<0.01),胃排空率和小肠推进率明显上升(P<0.01),十二指肠Tryptase基因表达、血清IL-1β及TNF-α含量均显著降低(P<0.01)。结论:四磨汤对肝脾气滞证FD有效且能显著缓解肝脾气滞证FD的十二指肠低度炎症,其机制可能与抑制肥大细胞脱颗粒、减少相关活性物质的释放有关。

从脑肠轴探讨黄芪建中汤对胃溃疡大鼠肝细胞生长因子及ERK1/2和TFF3蛋白表达的影响

目的观察黄芪建中汤对脾胃虚寒型胃溃疡大鼠胃组织中肝细胞生长因子(HGF)及下丘脑和海马区中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)及肠三叶因子3(TFF3)蛋白表达的影响,探究黄芪建中汤治疗脾胃虚寒型胃溃疡的作用及可能机制。方法用随机数字表法将60只大鼠分为正常组、模型组、奥美拉唑组和黄芪建中汤组,每组15只。正常组隔日蒸馏水灌胃,每日不限饮食;其余组大鼠先以小承气汤结合饥饱失常法复制脾胃虚寒证模型,实验第11天采用冰醋酸法建立胃溃疡模型。之后模型组继续隔日上午给予小承气汤并当日禁食,次日恢复饮食,共持续20 d;奥美拉唑组和黄芪建中汤组大鼠除同模型组的每日处理外,每日下午分别给予4.2 mg/(kg·d)奥美拉唑和6.8 g/(kg·d)黄芪建中汤灌胃;正常组隔日上午及每日下午给予蒸馏水灌胃。实验结束后摘取各组大鼠胃,记录溃疡大小并计算胃溃疡指数,HE染色观察胃组织病理形态,免疫组化染色检测胃组织中HGF及下丘脑和海马区中p-ERK1/2、TFF3蛋白阳性表达情况。结果正常组大鼠胃黏膜正常,未见溃疡点及糜烂斑等;模型组大鼠胃黏膜皱襞存在中断,有点状溃疡、糜烂及大量炎性细胞浸润;黄芪建中汤组与奥美拉唑组胃黏膜损伤较模型组轻,有少量炎性细胞浸润,未见明显溃疡。奥美拉唑组和黄芪建中汤组大鼠的胃溃疡指数均明显低于模型组(P均<0.05),胃组织中HGF及下丘脑和海马区中p-ERK1/2、TFF3蛋白表达平均光密度均明显高于模型组(P均<0.05)。结论黄芪建中汤能促进脾胃虚寒型胃溃疡大鼠溃疡愈合,上调HGF、ERK1/2及TFF3的表达可能是其基于脑肠轴治疗脾胃虚寒型胃溃疡的作用机制之一。

四磨汤对肝脾气滞证功能性消化不良大鼠胃肠运动及血清GAS、MTL的影响

目的探讨四磨汤治疗肝脾气滞证功能性消化不良的作用及可能机制。方法将36只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组和四磨汤低、中、高剂量组,每组6只。除空白组外,其余组大鼠采用夹尾刺激法和不规则喂养法制备肝脾气滞证功能性消化不良模型。造模成功后,四磨汤低、中、高剂量组分别给予1.8 g/(kg·d)、2.4 g/(kg·d)、3.2 g/(kg·d)四磨汤灌胃,莫沙必利组给予莫沙必利0.305 mg/(kg·d)灌胃,空白组、模型组给等量生理盐水灌胃,均每日1次,连续灌胃14 d。灌胃结束后称量各组大鼠体重,采用酚红法测定胃排空率,采用碳粉法测定小肠推进速率,ELISA法检测血清胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)水平。结果灌胃结束后,模型组大鼠体重、胃排空率、小肠推进率及血清中MTL、GAS水平均明显低于空白组(P均<0.05),四磨汤中、高剂量组和莫沙必利组大鼠体重、胃排空率、小肠推进率及血清中MTL、GAS水平均明显高于模型组(P均<0.05);四磨汤高剂量组大鼠体重与莫沙必利组比较差异无统计学意义(P>0.05),胃排空率及血清中MTL、GAS水平均明显高于四磨汤低、中剂量组和莫沙必利组(P均<0.05);四磨汤高剂量组及莫沙必利组大鼠小肠推进率明显高于四磨汤低剂量组(P均<0.05),四磨汤高剂量组与莫沙必利组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论四磨汤可增强肝脾气滞证功能性消化不良大鼠胃肠蠕动功能,机制可能与提高血清MTL、GAS水平有关。

浅析“脾主卫”

根据《黄帝内经》所载,“脾主卫”是脾的重要功能。土包容万物,而人体脾土运化所入之物,故脾脏乃气血生化之源。“脾主卫”是脾整体综合性功能的主要体现之一。本文就“脾主卫”之起源与内涵展开论述,为其理论进一步指导临床治疗提供思路。

四磨汤调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路对功能性消化不良大鼠十二指肠微炎症的影响

目的探讨四磨汤对功能性消化不良(FD)大鼠十二指肠微炎症及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路的影响。方法用多因素方法建立FD模型。将SD大鼠随机分成正常组、模型组(FD模型)、阳性对照组(灌胃给药0.305 mg·kg^(-1)莫沙必利)和高、中、低剂量实验组(分别灌胃给药5.62、2.81、1.40 g·kg^(-1)四磨汤)。测定小肠推进率、胃排空率;用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定血清中白细胞介素(IL)-1β、IL^(-1)8水平;用蛋白质印迹法检测十二指肠组织NLRP3、GSDMD的蛋白表达情况。结果正常组、模型组、阳性对照组和高、中、低剂量实验组胃排空率分别为(58.34±5.72)%、(29.16±8.37)%、(48.77±6.10)%、(48.35±6.04)%、(48.20±3.49)%和(39.24±4.20)%;小肠推进率分别为(82.01±7.55)%、(41.95±9.53)%、(64.61±10.18)%、(75.04±9.76)%、(60.58±7.13)%和(45.89±7.40)%;血清IL^(-1)β水平分别为(12.86±0.88)、(43.73±4.60)、(18.84±0.86)、(24.61±1.57)、(19.14±0.77)和(29.04±0.72)pg·mL^(-1);IL^(-1)8水平分别为(95.00±3.74)、(170.60±8.78)、(108.50±3.05)、(118.90±3.45)、(99.90±8.70)和(141.00±3.71)pg·mL^(-1);NLRP3蛋白表达水平分别为0.32±0.02、0.84±0.05、0.42±0.03、0.48±0.02、0.61±0.04和0.62±0.05;GSDMD蛋白表达水平分别为0.34±0.05、0.93±0.06、0.35±0.03、0.52±0.02、0.53±0.06和0.55±0.05。模型组上述指标与正常组比较,高剂量实验组、阳性对照组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论四磨汤能够有效改善FD大鼠一般状况及十二指肠微炎症,其机制可能与抑制十二指肠NLRP3/Caspase-l/GSDMD信号通路有关。