肺泡灌洗液中多聚免疫球蛋白受体分泌片段测定的临床意义

背景与目的:检测肺癌患者支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中多聚免疫球蛋白受体分泌片段(polymeric immunoglobulin receptor/secretory component,pIgR/SC)的蛋白水平,并探讨其临床意义。材料与方法:采用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定52例肺癌患者患侧肺及其中18例患者配对健侧肺BALF中pIgR/SC的蛋白水平。结果:肺癌患者患侧BALF中pIgR/SC蛋白水平显著高于健侧对照组(P=0.009);肺腺癌患者BALF中pIgR/SC蛋白水平显著高于肺鳞癌患者(P=0.014);而在肺鳞癌患者组,手术时发现淋巴结转移的患者BALF中pIgR/SC蛋白水平显著高于手术时未发现淋巴结转移患者(P=0.012)。结论:BALF中pIgR/SC蛋白水平在肺癌患者患侧较健侧显著升高,肺腺癌患者BALF中pIgR/SC蛋白水平显著高于肺鳞癌患者,BALF中pIgR/SC蛋白水平与肺鳞癌淋巴结转移密切相关。

Clusterin在卵巢上皮性癌患者外周血中的蛋白水平及其临床意义

目的:检测卵巢癌患者外周血中clusterin蛋白水平,并探讨其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附分析法分别测定137例卵巢癌患者、12例卵巢交界性肿瘤患者、10例卵巢良性肿瘤患者、41例盆腔良性疾患病人和58例健康人外周血血浆中clusterin蛋白水平。结果:卵巢癌患者血浆中的clusterin蛋白水平[(109.37±52.37)ng/ml]显著高于健康人对照组[(102.61±18.48)ng/ml,P=0.021]。在卵巢癌患者组,发生远处转移的患者外周血的clusterin蛋白水平显著高于未发生远处转移者(P<0.01);血浆中的clusterin蛋白水平在卵巢癌不同分期、分化和有无淋巴转移等临床病理指标间的差异无统计学意义。结论:卵巢癌患者外周血中clusterin蛋白水平显著高于健康人群,并且可能与卵巢癌远处转移有关。

肺上皮样血管内皮瘤遗传学分析

背景与目的:初步探讨肺上皮样血管内皮瘤细胞遗传学改变的特点。材料与方法:提取2例肺上皮样血管内皮瘤石蜡包埋的肿瘤组织DNA,利用微阵列比较基因组杂交(array-CGH)技术检测瘤组织DNA拷贝数缺失和扩增片段。结果:2例肺上皮样血管内皮瘤DNA拷贝数改变有诸多类似之处,且均以多条染色体DNA小片段(小于10 Mb)扩增为主,很少有缺失区域;具体涉及的基因分别为150个和556个,共同改变的基因为77个。结论:肺上皮样血管内皮瘤细胞遗传学改变可能主要以小片段DNA扩增为特点,该特点可以诠释此肿瘤的交界性或低度恶性临床病理特征。

阿糖胞苷及云南霉素的细胞周期阻滞作用研究

目的:阿糖胞苷(cytosinearabi-noside)及其核苷类似物是治疗血液肿瘤的重要药物。研究阿糖胞苷诱导肿瘤细胞的周期阻滞和凋亡,并探讨其相关的机制。方法:本研究使用流式细胞仪检测细胞周期改变及凋亡的诱导;用Westernblot分析肿瘤细胞凋亡和增殖相关蛋白的表达改变。结果:阿糖胞苷诱导KB细胞和HL-60细胞阻滞在G1期,而其胞嘧啶类似物云南霉素将细胞阻滞在G2/M期,但两者最终都诱导细胞凋亡。阿糖胞苷和云南霉素诱导细胞凋亡都伴有c-myc蛋白表达水平下降,阿糖胞苷作用KB细胞后,可观察到p53蛋白和Fas蛋白水平逐渐增高。结论:阿糖胞苷及其胞嘧啶类似物云南霉素诱导不同的细胞周期阻滞。阿糖胞苷诱导细胞凋亡可以通过p53/Fas蛋白依赖和非依赖两条途径来实现。

非小细胞肺癌患者肿瘤组织和外周血血浆中ENO1蛋白水平分析

背景与目的肺癌严重威胁人类生存健康,有效的肿瘤标志物可以辅助诊断、判断预后和指导治疗。本研究旨在检测非小细胞肺癌患者肿瘤组织和血浆中烯醇化酶1(alpha-enolase,ENO1)蛋白水平,初步探讨ENO1作为肺癌相关蛋白标志物的可能性。方法采用Western blot方法检测16例肺鳞癌患者的肿瘤组织及其配对正常肺组织中ENO1蛋白水平。采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定42例健康体检者、34例肺部良性疾病患者和84例非小细胞肺癌患者三组人群血浆中ENO1蛋白水平。结果在87.5%(14/16)的肺鳞癌患者肿瘤组织中ENO1蛋白表达量高于其配对正常肺组织;非小细胞肺癌患者血浆中ENO1蛋白水平高于健康体检者(P=0.031)和肺部良性疾病者(P=0.019),且ENO1蛋白在肺腺癌患者血浆中的水平高于肺鳞癌患者(P=0.023)。结论非小细胞肺癌肿瘤组织和血浆中ENO1蛋白水平升高,提示ENO1可作为潜在的非小细胞肺癌相关血浆蛋白标志物。

dlk1促进肺鳞癌细胞增殖的相关分子机理研究

背景与目的印记基因dlk1因在多种肿瘤组织中出现异常表达而受到研究者越来越多的关注,但dlk1基因与肺癌的关系尚无报道。本研究首先在肺癌组织中检测了dlk1基因的表达,并进一步利用肺癌细胞系H520对dlk1基因促进细胞增殖的分子机制进行了初步研究。方法首先,采用RT-PCR在30对非小细胞肺癌肿瘤及其配对癌旁组织中检测dlk1基因的表达。然后,克隆人源dlk1基因,转染并筛选出稳定表达dlk1基因的肺癌细胞。最后,利用CCK8法研究dlk1基因对细胞增殖能力的影响,并用Western blot技术分析细胞周期蛋白Cyclin B1的表达。结果 RT-PCR结果显示,dlk1基因在36.7%的非小细胞肺癌肿瘤组织中表达水平高于癌旁肺组织。在成功获得了稳定表达外源性dlk1基因的肺癌细胞H520-dlk1的基础上,CCK8实验及平板集落实验显示,稳定转染dlk1可以明显促进肺鳞癌细胞H520的增殖能力(P<0.05)。同时,稳定表达DLK1蛋白可以上调细胞周期蛋白Cyclin B1的表达水平(P<0.05)。结论 dlk1在非小细胞肺癌中存在异常高表达,它可以通过上调细胞周期蛋白Cyclin B1的表达,促进肺鳞癌细胞H520的增殖。提示dlk1基因的异常表达可能在肺癌的发生演进中发挥作用。

TPX2在肺鳞状细胞癌及其癌前病变中的表达和意义

目的探讨 Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xklp2,TPX2)在肺鳞癌及其癌前病变中的表达和意义。方法 Western blot 分析 TPX2蛋白在2株肺鳞癌细胞系和4株永生化支气管上皮细胞系中的表达。逆转录聚合酶链反应分析21对新鲜肺鳞癌组织及其远端正常肺组织 TPX2的 mRNA表达水平。构建肺癌组织微阵列,针对其中的319例肺鳞癌患者的组织样品及其相应的114例癌前病变组织的常规石蜡切片进行 TPX2免疫组织化学(SP 法)染色,结果与临床病理参数比较分析。结果 TPX2蛋白在被测肺鳞癌和永生化支气管上皮细胞系中均有水平不一的表达。在新鲜组织标本中76.2%的肿瘤组织较正常组织 TPX2 mRNA 明显高表达。免疫组织化学分析结果显示,TPX2蛋白的表达在肿瘤组织(64.2%)中明显高于正常组织,且与肿瘤组织病理学分级、临床分期及淋巴结转移相关。TPX2蛋白在肺鳞癌的癌前病变中的表达显著高于正常组织,且随支气管上皮病变程度加重(鳞状化生、不典型增生、原位癌)而增高。结论 TPX2蛋白的表达有可能促进支气管上皮癌变和肺鳞癌进展,而且是肺鳞癌淋巴转移的危险因素。TPX2有望成为监测肺鳞癌发生发展的候选标志物。

微卫星分析在膀胱癌诊断中应用的进一步研究

目的 研究微卫星分析在膀胱癌诊断中的应用价值 ,并比较该方法与尿细胞学的优缺点。方法 利用前续工作建立的 9位点的诊断组合和新筛选的 4个微卫星位点 ,对 1 43例膀胱病变和非膀胱病变个体的尿沉渣进行盲性分析 ,同时进行尿细胞学检查 ,比较二者的结果。结果 89%(97/1 0 9)的膀胱癌 ,86% (6/7)的膀胱内翻性乳头状瘤 ,3例膀胱炎 (共检测 7例 )和 1例不明原因血尿的病人的尿沉渣至少在 1 3个位点中的一个检测出异常 ,1 9例非膀胱病变病人的尿沉渣未检测到任何异常。检测到尿沉渣微卫星异常的 3例膀胱炎和 1例不明原因血尿的病人 ,其细胞学也提示核异型或可疑癌细胞。在同时进行了尿沉渣微卫星分析和细胞学检查的 81例膀胱癌中 ,细胞学检出率为51 % (4 1 /81 ) ,而且主要集中于中晚期病人 ,微卫星分析的检出率为 90 % (73 /81 ) ,与分期分级无关。 1 2例微卫星分析阴性的膀胱癌病人中 ,有 4例细胞学发现癌细胞。结论 尿沉渣微卫星分析对于膀胱癌的诊断有一定意义。尿沉渣微卫星分析与传统尿细胞学有一定互补作用。

应用基因芯片检测喉鳞状细胞癌甲醛固定石蜡包埋组织microRNA表达谱

目的 建立以甲醛固定石蜡包埋组织为材料、基于基因芯片技术的microRNA（miRNA）表达谱的分析方法 ;筛选与喉鳞状细胞癌（简称喉癌）生物学特征密切相关的差异表达miRNA.方法 从喉癌甲醛固定石蜡包埋组织中制备总RNA,经质量鉴定后进行荧光标记.采用Agilent公司的容纳723条人类miRNA探针的基因芯片完成杂交实验,以获得喉癌的miRNA表达谱.以GeneSpring GX和R-Project软件处理分析基因芯片实验数据,筛选与喉癌转移相关的差异表达miRNA.结果 从24例甲醛固定石蜡包埋组织标本中获得了符合基因芯片实验质量标准的RNA样品,并完成了基因芯片杂交及数据分析.从中共鉴定到319个miRNA,有96个miRNA在24例喉癌中均有表达,其中与淋巴结转移密切相关的（检错率〈0.05）差异表达miRNA有5个,分别为miR-23a＊ 、miR-28-5p、miR-15a、miR-16和miR-425.结论 甲醛固定石蜡包埋组织可以提供符合基因芯片分析质量要求的miRNA,是研究miRNA的重要样品资源.从喉癌的miRNA表达谱中筛选出的转移相关差异表达miRNA（miR-23a＊、miR-28-5p、miR-15a、miR-16和miR-425）有可能成为评估喉癌转移风险的新型分子标志.

相关蛋白标记物辅助液基薄层细胞检测纤维支气管镜刷片细胞学肺癌分型诊断的探讨

目的探讨相关蛋白标记物辅助液基薄层细胞检测（TCT）纤维支气管镜刷片细胞学肺癌分型诊断的价值。方法收集纤维支气管镜刷片细胞学临床诊断剩余标本206例，术后肺肿瘤穿刺标本45例，应用TCT制片技术和免疫细胞化学（ICC）法检测相关蛋白CK10／13、CK7、CK18、CD56和突触素（SYN）在各型肺癌中的表达。结果CK10／13诊断鳞癌的敏感性和特异性分别为94．7％和72．0％；CK7诊断腺癌的敏感性和特异性分别为98．6％和61．5％；CK18诊断腺癌的敏感性和特异性分别为98．6％和37．5％；CD56诊断小细胞肺癌的敏感性和特异性分别为86．3％和82．9％；SYN诊断小细胞肺癌的敏感性和特异性分别为81．6％和93．5％。CK10／13、CK7和CK18在不同分化鳞癌和腺癌中的表达差异均无统计学意义（均P〉0．05）。细胞形态学与ICC联合诊断细胞学未分类癌44例，其中鳞癌、腺癌和小细胞肺癌的分型诊断率分别为90．0％、96．3％和100．0％。结论相关蛋白ICC检测与细胞学相结合，可提高肺癌分型诊断的准确性，可能成为TCT纤维支气管镜刷片细胞学肺癌分型诊断的一种辅助手段。

应用分泌/释放蛋白质组学鉴定HBV相关的肝细胞癌血浆标志物

早期诊断对于肝细胞癌的成功治疗非常重要.为寻找血浆蛋白标志物,本研究利用蛋白质组学技术分析肝细胞癌组织的分泌/释放蛋白质组.收集癌和癌旁组织的无血清条件培养基,通过蛋白质组学方法分析条件培养基蛋白,共鉴定到1365个蛋白.Gene Ontology富集分析条件培养基蛋白的分子功能和生物学过程,发现大多具有水解酶活性,参与物质代谢过程,符合肝脏作为体内最重要代谢器官的特征.另外,鉴定到的条件培养基蛋白有19%定位于细胞外和细胞膜上.挑选出与TGF-β信号通路相关的7个条件培养基分泌蛋白(AFP,MMP1,MMP7,MMP9,OPN,PSG9,TIMP1),在血浆中进行验证.研究结果表明,与健康对照相比,AFP,MMP1,OPN,PSG9在肝细胞癌病人血浆中的含量显著升高,且MMP1和OPN对肝细胞癌的诊断效能高于血浆常规标志物AFP,可以作为诊断肝细胞癌的潜在标志物.综上所述,本研究提供了可以用于进一步寻找血浆标志物的分泌蛋白质资源库.发掘出分泌蛋白MMP1和OPN可能作为新型的标志物检测肝细胞癌,并有助于提高AFP的诊断灵敏度.

人膀胱移行细胞癌染色体17p13区域杂合性缺失精细作图

目的 明确染色体 17p13区域等位基因杂合性缺失 (LOH)在人膀胱移行细胞癌 (TCC)中的发生频率和最小缺失区域 ,为膀胱TCC相关抑癌基因的定位克隆提供线索。方法 应用位于17p13区域的 13个微卫星标记 ,对 4 4例膀胱TCC患者手术切除的癌组织进行LOH分析 ,并探讨各微卫星标记LOH与病理分级、分期的关系。结果 4 4例患者中 ,35例 (79 5 % )的膀胱TCC组织中存在至少 1个微卫星标记的LOH。缺失频率最高的微卫星标记是位于 17p13 2的D17S5 13,达 4 1 4 % (12 /2 9) ;其次为位于 17p13 3的D17S130 8,为 4 0 5 % (17/ 4 2 ) ;最低为位于 17p13 1的D17S2 6 1,为 14 3% (4/2 8)。LOH主要集中于三个区域 :位于 17p13 3的D17S6 95～D17S130 8,位于 17p13 2的D17S15 33～D17S831,以及位于 17p13 1区域的TP5 3。所检测微卫星标记中仅TP5 3的LOH与膀胱TCC病理分级(χ2 =5 10 4 ,P <0 0 5 )和分期 (χ2 =5 382 ,P <0 0 5 )呈正相关。结论 在 17p13区域除TP5 3基因以外 ,还可能存在两个与膀胱TCC相关的抑癌基因 ,分别位于 17p13 3的D17S6 95～D17S130 8和17p13 2的D17S15 33～D17S831。TP5 3的LOH是膀胱TCC发展的晚期事件 ,而 17p13 3和 17p13