青海产暗紫贝母化学成分的气相色谱-质谱联用分析

目的分析暗紫贝母鳞茎乙醚提取物中的化学成分。方法采用索式提取法以乙醚为提取剂提取暗紫贝母鳞茎中的化学成分,运用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对化学成分进行研究,并应用色谱峰面积归一化法测定各组分的相对百分含量。结果从暗紫贝母鳞茎乙醚提取物中鉴定出17种成分。结论 GC/MS方法简便、快速、灵敏度高,用此方法对暗紫贝母化学成分进行分析,可进一步提高对暗紫贝母药效物质基础的认识。

青海土族人群HLA-A、B、DRB1基因多态性分析

目的:分析青海土族人群人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)A、B、DRB1的基因多态性特点。方法:应用聚合酶链反应-直接测序分型(Polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT)法对土族人群中47名健康无血缘关系的个体进行HLA-A、B、DRB1基因座高分辨分型。并将青海土族人群的HLA-DRB1基因与国内其它少数民族人群进行比较。结果:检出HLA-A、B、DRB1的基因型数和等位基因数分别为34、41、42和17、28、30。这3个基因座分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。且HLA-DRB1基因座等位基因频率分布与蒙古族有相似之处,表现在基因频率较高的DRB1*04,DRB1*07,DRB1*09,DRB1*12等位基因。结论:青海土族人群具有独特的HLA-A、B、DRB1基因频率分布特征,且青海土族HLA-DRB1等位基因频率分布与蒙古族有相似之处。

三味檀香水提液对大鼠离体主动脉环的作用

目的探讨三味檀香水提液(ESWTX)对离体大鼠主动脉环的舒张作用。方法采用离体大鼠主动脉环张力记录法,观察ESWTX对去甲肾上腺素(NE)、KCl引起的血管平滑肌收缩的影响。结果ESWTX能使NE、KCl收缩血管平滑肌的最大反应下降,作用机制与维拉帕米相似;对NE、KCl收缩达峰值的离体大鼠主动脉环有舒张作用;对NE引起的依赖于细胞内钙收缩有明显的抑制作用,而对外钙收缩的抑制作用比较弱。结论ESWTX的作用类似于维拉帕米,具有舒张血管平滑肌的作用,其机制可能与拮抗钙离子有关。

暗紫贝母的研究概况

近年来对贝母属植物的研究取得了进展,本文就川贝母属植物的基源植物暗紫贝母的植被分布、化学成分、人工组织培养、药理作用等方面的研究作一综述。

八味沉香散对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨八味沉香散对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后心肌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法采用左冠状动脉穿线结扎法制备心肌缺血/再灌注模型。SD大鼠40只随机分成4组:假手术组(A组,n=10),缺血/再灌注损伤模型组(B组,n=10),缺血/再灌注损伤模型+生理盐水对照组(C组,n=10),八味沉香散组(D组,n=10)。心电图记录肢体Ⅱ导联ST段的变化。利用RT-qPCR检测心肌Bcl-2、Bax基因的mRNA表达情况。结果缺血/再灌注损伤模型组与假手术组比较,Bcl-2下降,Bax增高,Bcl-2/Bax下降(P<0.05);缺血/再灌注损伤模型+生理盐水对照组各项指标与缺血/再灌注损伤模型组比较均无显著性差异;八味沉香散组的各项指标较缺血/再灌注损伤模型组明显改善,Bcl-2升高,Bax下降,Bcl-2/Bax升高。结论八味沉香散可能通过上调Bcl-2、下调Bax来抑制缺血/再灌注后心肌细胞凋亡,从而对缺血/再灌注心肌损伤发挥保护作用。

帕珠丸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝组织SOD、CAT活性及MDA含量的影响

目的观察帕珠丸对酒精性肝损伤大鼠肝组织SOD、CAT活性及MDA含量的影响。方法将42只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、联苯双酯组、帕珠丸组。慢性酒精性肝损伤模型,采用56%白酒连续灌胃12周(10mL/kg·d-1)。造模成功后,分别给予联苯双酯滴丸混悬液、帕珠丸混悬液灌胃;正常对照组、模型对照组分别给予同体积生理盐水灌胃,连续灌胃3周。剖杀取样,测定大鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)的含量。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肝组织中SOD、CAT活性均明显降低(P<0.05),MDA含量明显升高(P<0.05)。帕珠丸组肝组织SOD活性、CAT活性高于模型组,MDA含量低于模型组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论帕珠丸可显著提高大鼠肝组织SOD、CAT活性,降低MDA含量,提示该药物能够有效地清除自由基,提高肝组织抗氧化能力。

暗紫贝母乙醚萃取物的GC-MS分析

目的采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分析暗紫贝母鳞茎75%乙醇提取物用乙醚萃取后得到化合物的化学成分。方法采用乙醇回流提取制得浸膏,再将浸膏加水混悬后用乙醚萃取,制得乙醚萃取物,运用GC-MS技术对乙醚层化学成分进行研究,并应用色谱峰面积归一化法测定各组分的相对百分含量。结果从暗紫贝母鳞茎乙醚萃取物中鉴定出13种成分。结论GC/MS方法简便、快速、灵敏度高,用此方法对暗紫贝母化学成分进行分析,可进一步提高对暗紫贝母药效物质基础的认识。

藏药帕珠丸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝组织IL-1、IL-6、TNF-α、TGF-β_1含量及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的观察藏药帕珠丸对酒精性肝损伤大鼠肝组织IL-1、IL-6、TNF-α、TGF-β1含量及TGF-β1mRNA表达的影响。方法分别给予慢性酒精性肝损伤模型大鼠50、100、200 mg·kg-1帕珠丸混悬液,观察其对肝组织IL-1、IL-6、TNF-α、TGF-β1含量及TGF-β1mRNA表达的影响。结果藏药帕珠丸低、中、高剂量组肝组织IL-1、IL-6、TNF-α、TGF-β1含量均显著降低(P<0.05),TGF-β1mRNA表达下降(P<0.05)。结论藏药帕珠丸可能是通过降低肝组织中IL-1、IL-6、TNF-α、TGF-β1含量及TGF-β1mRNA表达,对大鼠慢性酒精性肝损伤发挥保肝作用。

中药材秦艽的研究概况

近年来对中药材秦艽的研究取得了一定进展,本文就龙胆科植物秦艽的分布、化学成分、提取工艺、药理作用、组织培养等方面的研究作一综述。

高原红细胞增多症动物模型的建立及其生理功能反应

背景:国内外关于高原红细胞增多症的动物研究主要以模拟海拔进行,少数情况下进行现场研究,但在现场究竟多长时间可以使平原大鼠发生高原红细胞增多症还需要进一步研究。目的:建立高原红细胞增多症动物模型并对相关生理功能反应进行初步观察。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-08/09在青海大学医学院高原医学研究中心教育部和青海省重点实验室完成。材料:SPF级Wistar大鼠50只,体质量160～200g,雌雄各半。10只高原鼠兔(Pika)于青海玛多县4300m现场捕获,体质量100～180g。促红细胞生成素试剂盒由美国R&DSystems公司提供。方法:将30只Wistar大鼠随机分成高原15和30d两组(雌雄分开),每组各15只,运至海拔4300m青海省果洛州玛多县饲养。余20只大鼠为对照组在西宁海拔2260m饲养。另10只高原鼠兔作为高海拔对照组。分别在第15天和第30天进行血红蛋白、红细胞压积、促红细胞生成素测定。主要观察指标:①高原15d组和高原30d组中出现高原红细胞增多症阳性数。②高原红细胞增多症组与各正常对照组血红蛋白等指标的比较。③高原红细胞增多症组与各正常组促红细胞生成素水平的变化。④高原红细胞增多症组血红蛋白水平与血氧饱和度和促红细胞生成素相关性分析。结果:高原15,30d组大鼠血红蛋白,红细胞压积水平明显升高,与高海拔和低海拔对照组相比差异有显著性意义(P<0.01);高原15d对照组中血红蛋白>207g/L,红细胞压积>65%的高原红细胞增多症大鼠模型占75%,高原30d组中占93%。高原组促红细胞生成素值显著高于高海拔和低海拔对照组(P<0.01)。结论:通过对Wistar大鼠各项生理指标的测定认为在海拔4300m地区饲养30d才可完全建立高原红细胞增多症的动物模型,并进一步说明低海拔动物在不同海拔具有不同的生理反应机制。

三味檀香散对异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠血流动力学的影响

目的研究三味檀香散对异丙肾上腺素(Iso)致心肌缺血大鼠心电图和血流动力学的影响。方法采用ip Iso诱导大鼠致急性心肌缺血的动物模型。实验大鼠随机分为Iso模型组、阳性对照组和三味檀香散大、小剂量组,测定各组大鼠心电图ST段变化、血流动力学指标平均动脉压(MBP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室等容期压力最大变化速率(±dp/dtmax)和心率(HR)。结果大、小剂量的三味檀香散组大鼠心电图ST段移位和HR明显低于模型组(P<0.01),血流动力学指标±dp/dtmax、LVSP-、LVEDP明显高于模型组(P<0.05或P<0.01),但对大鼠MBP无影响。结论藏药三味檀香散对Iso致心肌缺血大鼠的心脏舒缩功能有一定的保护作用。

藏羚羊肌红蛋白(MGB)基因编码区的克隆与分析

为了探讨藏羚羊低氧适应的分子生物学机制,从藏羚羊(Pantholops hodgsonii)骨骼肌组织中提取总RNA,通过逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)技术扩增出MGB基因编码区cDNA片段,并与pGEM-T Easy载体连接构建重组质粒,转化DH5α菌。扩增培养后鉴定阳性质粒并进行序列测定,结果与NCBI数据库进行比较。结果显示,MGB基因编码区由465bp组成,编码154个氨基酸。其序列与绵羊、牛、猪、人、小鼠、大鼠的同源性分别是98%、97%、90%、86%、82%、81%。推测出的氨基酸序列与绵羊、牛有98%同源性,而与猪、人、小鼠及大鼠分别有89%、85%、80%、79%的同源性。与NCBI数据库登录的绵羊的MGB cDNA序列比较发现,藏羚羊MGB基因的21位和78位密码子分别发生了突变(GGT→GAT和GAA→AAG),其对应的氨基酸分别由甘氨酸变为天冬氨酸及谷氨酸变为赖氨酸。至此,成功克隆出藏羚羊MGB基因编码区,为进一步揭示藏羚羊低氧适应的分子机制打下基础。

藏药三味檀香散对麻醉大鼠心肌缺血/复灌损伤血流动力学的影响

目的研究藏药三味檀香散对大鼠心肌缺血/复灌后心电图和血流动力学的影响。方法采用手术诱导大鼠造成心肌缺血/复灌的动物模型,大鼠随机均分为伪手术组、缺血复灌模型组、阳性对照组、三味檀香散高、低剂量组,测定各组大鼠心电图ST段的变化和平均动脉压(MBP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室等容期压力最大变化速率(±DP/DTm ax)和心率(HR)。结果高、低剂量组大鼠心电图ST段移位明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),血流动力学指标(HR、MBP、±DP/DTm ax、LVSP、LVEDP)明显高于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论藏药三味檀香散对缺血/复灌损伤大鼠的心脏舒缩功能有一定的保护作用。

常氧和急性低氧下大鼠传导性肺动脉平滑肌细胞的电生理特性

本文旨在研究大鼠传导性肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells，PASMCs）的电生理特征及对急性低氧的反应。用酶解法急性分离出1-2级分支的PASMCs，通过全细胞膜片钳方法研究常氧及急性低氧状况下细胞钾电流的差异，并在常氧下先后使用iBTX和4-AP阻断大电导钙激活钾离子（large conductance Ca-activated K^＋，BKCa）通道及延迟整流性钾离子（delayed rectifier K^＋，KDR）通道后，观察细胞钾电流特征。根据细胞的大小、形态及电生理特征可将PASMCs分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类。iBTX对Ⅰ类细胞几乎无作用，而4-AP几乎完全阻断它的钾电流；Ⅱ类细胞的钾电流在加入iBTX后大部分被抑制，其余的对4．AP敏感；Ⅲ类细胞的钾电流对iBTX及4-AP均敏感。急性低氧对三类细胞的钾电流均有不同程度的抑制，并使Ⅰ类细胞的膜电位显著升高，而Ⅱ、Ⅲ类细胞膜电位升高的程度不如Ⅰ类显著。结果表明，传导性肺动脉有3种形态及电生理特性不同的PASMCs，在急性低氧时其钾电流不同程度地受到抑制，同时静息膜电位也有不同程度去极化，这些可能参与急性低氧时传导性肺动脉舒缩反应的调节。KDR及BKCa通道在3种细胞中的比例不同可能是急性低氧对3种PASMCs影响不同的离子基础。

藏药七十味珍珠丸对老年痴呆模型大鼠学习记忆和超氧化物歧化酶、丙二醛的影响

目的观察藏药七十味珍珠丸对老年痴呆模型大鼠学习记忆的影响并讨论作用机制。方法将40只SD大鼠随机分为对照组、AD模型组、尼莫地平阳性对照组、七十味珍珠丸组。颈背部皮下注射D-半乳糖及侧脑室注射Aβ25-35制作老年痴呆大鼠模型,用七十味珍珠丸灌胃(1.65g/kg)治疗,通过Morris水迷宫测试各组大鼠的学习记忆能力,采用比色法测定大鼠血清中SOD活力、MDA含量。结果七十味珍珠丸能够显著增强AD模型大鼠的学习记忆能力,并能显著提高大鼠血清中SOD活力(P<0.01)。结论藏药七十味珍珠丸通过降低自由基水平发挥抗老年痴呆模型大鼠的新的药效学作用。

藏羚羊α-珠蛋白基因编码区的克隆及同源性分析

目的:克隆藏羚羊α-珠蛋白基因编码区,并进行同源性分析。方法:从藏羚羊肝组织中提取总RNA,通过RT-PCR获得藏羚羊α-珠蛋白cDNA,将其与pGEM(-T Easy载体连接,构成重组质粒,并转化大肠杆菌TOP10扩增培养后,鉴定阳性质粒并进行测序。将测序的结果与NCBI数据库进行同源性比较。结果:获得α-珠蛋白编码区cDNA序列,提交GenBank数据库并取得注册号为DQ650713。与绵羊α-珠蛋白基因相比较,其在16、53、132、134处出现核苷酸密码子突变(GAC→GGC)、(TCG→TCC)、(AGC→GGC)、(AAC→AGC)。推导的氨基酸序列比较发现,132位的天冬酰胺酸(Asn)突变为丝氨酸(Ser),134位的丝氨酸(Ser)突变为甘氨酸(Gly);与人类的α-珠蛋白相比较,有19处的氨基酸发生改变。结论:成功地克隆出藏羚羊α-珠蛋白基因编码区,为高原低氧适应相关基因的研究提供了实验依据。

高速逆流色谱法分离制备抱茎獐牙菜中龙胆苦苷和獐牙菜苦苷

[目的]建立抱茎獐牙菜(Swertia franchetiana H.Smith)中分离制备龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的高速逆流色谱法。[方法]采用溶剂系统为氯仿∶甲醇∶水=4∶4∶2(V/V/V);上相为固定相,下相为流动相;上下相超声波脱气20min;转速850r/min;流动相流速2ml/min;检测波长254nm。所得产物用旋光仪测定其旋光度,计算其比旋光度,进行纯度鉴定。[结果]从100mg抱茎獐牙菜粗提物中得到龙胆苦苷14mg,獐牙菜苦苷27mg。测得龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的比旋光度[a]Dt分别为-196.3°和-126.6°,纯度较高。[结论]该研究可为用高速逆流色谱法大量制备龙胆苦苷和獐牙菜苦苷提供可行的方法。

高原肺动脉高压症动物模型的建立及生理机能反应的初步研究

目的建立高原病动物模型并对相关生理机能反应进行初步研究。方法将30只Wistar大鼠随机分成15天和30天2个组后运至海拔4300m处饲养。分别在第15天和第30天进行Pap、RV/(LV+S)比值等测定。另外,随机选取12只大鼠作为较低海拔(2260m)对照组,10只高原鼠兔作为高海拔(4300m)对照组。结果30只Wistar大鼠经15天和30天饲养后,两个实验组Pap、RV/(LV+S)比值分别为42.80±6.09、0.50±0.06(15天);50.0±10.20、0.50±0.08(30天),显著高于高原对照组(21.88±6.09,0.32±0.03)和较低海拔组(24.50±8.06,0.30±0.01),P值均小于0.01。15天和30天组HAPH患病率分别为87%和100%,但体循环压没有显著差别。结论通过对Wistar大鼠各项生理指标的测定,认为在海拔4300m地区饲养15天就可完全建立高原肺动脉高压症的动物模型,并进一步说明低海拔动物与高原特有动物具有对低氧环境的不同生理反应机制。

藏药十味乳香散镇痛抗炎及抗痛风性关节炎作用

目的观察藏药十味乳香散镇痛、抗炎、抗痛风性关节炎的作用。方法本实验采用经典疼痛动物模型小鼠热板法及小鼠醋酸扭体法评价藏药十味乳香散的镇痛作用;采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、醋酸致毛细血管通透法及尿酸钠晶体致大鼠急性痛风性关节炎法观察十味乳香散的抗炎及抗痛风作用。结果藏药十味乳香散明显减少醋酸致小鼠扭体反应次数(P<0.05或P<0.01),并且十味乳香散高剂量组抑制率达到57%,但十味乳香散各剂量组并不能显著延长小鼠热痛阈值(P>0.05)。低、中、高剂量的十味乳香散对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀,对尿酸钠晶体诱导的大鼠关节炎的肿胀均有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01),但对醋酸引起的毛细血管通透增加抑制并不显著(P>0.05)。结论藏药十味乳香散具有抗炎和抗痛风性关节炎作用,其镇痛作用还有待证实。