六种市售河北道地中药饮片微生物污染情况调查与分析

目的:对六种石家庄市售河北道地中药饮片进行微生物检测,分析评估河北道地中药饮片整体污染情况。方法:参考《中华人民共和国药典》(2020年版,四部通则1108和1107)中药饮片微生物限度检测方法和微生物限度标准,对六种共计60批次中药饮片进行需氧菌总数(TAMC)、霉菌和酵母菌总数(TYMC)、耐热菌总数及三种控制菌进行检测分析,采用平板分离法分离出可疑杂菌,并通过全自动细菌分析仪进行鉴定。结果:检测的60批次药品中1 g TAMC为2.68~7.36,31.7%的饮片TAMC生物负载水平超标;1 g TYMC为0.5~5.2,25%的饮片TYMC负载水平超标;耐胆盐革兰阴性菌的检出率为11.7%;2批次样品检出大肠埃希菌;耐热菌和沙门菌未检出;分离出包括铜绿假单胞菌在内的17株条件性致病菌。结论:石家庄部分市售河北道地中药饮片存在微生物污染风险,建议相关部门加大监管力度,完善中药饮片微生物控制措施和质量评价体系,保障患者用药安全。

微生物检测技术在食品安全中的运用初探

近年来食品安全事故频发，造成了极其恶劣的社会影响，人们也因此越来越关注食品安全检验，尤其微生物检测技术，目前已被被广泛应用到食品安全检测中，起到良好的检测效果。本文对微生物检测技术进行介绍，探讨了微生物检测技术在食品安全中的具体应用，以期为微生物检测技术的发展和应用提供参考。

固相萃取-气相色谱-串联质谱法测定蔬菜中的16种多环芳烃

目的建立固相萃取-气相色谱-串联质谱法测定蔬菜中16种多环芳烃（polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs）的分析方法。方法样品经正己烷-二氯甲烷匀浆提取,经中性硅胶-中性氧化铝复合固相萃取柱净化后,用多反应监测（multiple-reaction monitoring,MRM）正离子扫描方式进行检测,气相色谱-串联质谱法测定,内标法定量。结果 16种目标物在2~250 ng/m L范围内呈线性关系良好,方法的检出限（S/N=3）为0.09~0.51μg/kg,定量限（S/N=10）为0.31~1.68μg/kg。在2、5、20μg/kg 3个加标水平下的平均回收率为添加平均回收率范围为70.6%~109.2%,相对标准偏差（RSD）为1.95%~10.4%。结论该方法选择性好、抗干扰能力强,能满足国内外法规的要求,可用于蔬菜中多环芳烃残留的日常检测。

TurboFlow在线净化-液相色谱-串联质谱法测定畜禽肉中20种(氟)喹诺酮类兽药残留量

建立TurboFlow在线净化-液相色谱-串联质谱测定畜禽肉中20种(氟)喹诺酮类药物((Fluoro)quinolones,(F)QNs)残留量的分析方法。样品用甲醇-乙腈(1∶1,V/V)进行均质提取,Cyclone-p在线净化柱净化富集提取液中的(F)QNs,然后将富集所得分析物洗脱,转至Hypersil Gold C_8分析柱,经色谱分离后,用串联质谱检测。结果表明:西诺沙星、伊诺沙星和丹诺沙星在0.2～20.0 ng/mL的线性范围内线性良好,其余17种(F)QNs在0.1～10.0 ng/mL的线性范围内线性良好,且R^2均大于0.99;西诺沙星、伊诺沙星和丹诺沙星的定量限为2μg/kg,其余17种(F)QNs为1μg/kg;20种(F)QNs在3个水平的添加回收率为85.4%～108.2%,相对标准偏差为4.04%～8.57%。方法简单、快速、回收率高、重复性好,适用于动物源食品中(F)QNs的定量及确证检测。

基于行业标准中马和驴成分检测方法用于骡肉检测的分析

应用基于线粒体基因的行业标准检测方法SN/T 3730.4—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法第4部分:驴成分检测实时荧光PCR法》和SN/T 3730.5—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第5部分:马成分检测实时荧光PCR法》检测骡肉时,存在马、驴成分均可检出的情况,与线粒体严格母系遗传的理论相左。因此,本研究通过测序法和行业标准中的马、驴成分检测方法对骡肉进行检测,对SN/T 3730.4—2013用于骡肉检测的结果进行分析和讨论。本研究基于线粒体基因和核基因聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)测序、SN/T 3730.4—2013、SN/T 3730.5—2013方法对9份单一肉块样品进行了检测。结合线粒体基因和核基因的检测结果,确定3份骡肉均为马骡肉;采用SN/T 3730.4—2013和SN/T 3730.5—2013方法对3份马骡肉均能检出驴成分和马成分,SN/T 3730.5—2013对马骡肉中马成分检测的循环阈值(cycle threshold,Ct)≤20.00;SN/T3730.4—2013对马骡肉中驴成分检测的Ct值在25.00~35.00范围内,且以SN/T 3730.4—2013中引物进行的普通PCR产物测序结果显示,3份骡肉与马、驴均不同源。分析认为,出现该现象的原因可能是SN/T 3730.4—2013靶序列以核内线粒体DNA片段形式和较低的重复数出现在马骡核基因组中,并且发生了部分碱基的插入、缺失。采用行业标准SN/T 3730.4—2013和SN/T 3730.5—2013对已知来源于单一动物源性成分的样品进行马、驴成分检测时,当马成分检测的Ct值≤20.00,同时驴成分检测的Ct值在25.00~35.00范围内时,应考虑马骡成分存在的可能性。

应用微滴式数字聚合酶链式反应定量检测牛肉制品中的猪源性成分

参照GB/T 25165—2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光聚合酶链式反应法》,以牛的生长激素(growth hormone,GH)基因和猪的朊蛋白(prion protein,PRNP)基因2种核基因为靶基因合成特异性引物和探针。理论推导单位质量牛肉的GH基因与猪肉PRNP基因拷贝数之比为一固定值,通过微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)方法对该固定值进行检测和验证,并以该固定值对牛肉/猪肉人工混合样本和市售牛肉制品中的猪肉成分进行定量检测。结果表明:该方法具有良好的准确性及可重复性;牛肉中掺杂猪肉质量分数在5%～99%范围内时,检测结果绝对误差小于1.28%,变异系数小于6.5%,猪肉成分的回收率为99.09%～102.80%;20份牛肉制品中,4份检出猪肉成分,其中3份的相对含量为29.19%～98.15%,1份为0.12%(低于本方法检出限5%)。因此,dd PCR方法可以较好地应用于牛肉制品中掺杂猪肉成分的定量检测。

肉制品中鸭源性成分TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立与应用

目的建立TaqMan探针实时荧光PCR法快速检测肉制品中鸭源性成分的分析方法。方法以鸭生长激素(growthhormone,GH)基因为靶基因,基于特异性保守序列设计引物和TaqMan探针,优化反应体系和反应条件,建立了鸭源性成分实时荧光PCR(real-timePCR)检测方法。结果所建立的real-timePCR方法特异性强,仅对鸭基因组DNA出现特异性扩增曲线,对牛、羊、猪等其他异源性动物基因组DNA均无扩增曲线;灵敏性高,以鸭基因组DNA为模板,检出限为1.0 pg;重复性好,不同浓度基因组DNA测定的Ct值变异系数小于4%。使用建立的real-time PCR方法对200份市售肉制品进行检测,在11份肉制品中检出鸭源性成分,同现行行业标准SN/T3731.5—2013检测结果一致。结论本研究所建立的real-timePCR方法检测具有特异性强、敏感性高、快速高效等特点,适用于肉制品中鸭源性成分快速检测。

GNM C7-8实时荧光PCR同时快速检测8种动物源性成分

目的基于八模块设计的GNM C7-8实时荧光PCR系统实现对8种动物源性成分同时快速检测.方法基于猪朊蛋白基因、牛生长激素基因、羊生长激素基因、驴线粒体ATPase 6基因、马线粒体ATPase 6基因、鸭生长激素基因、水貂线粒体细胞色素b基因、狐狸线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基基因引物设计了8种动物源性成分实时荧光PCR检测方法.应用GNM C7-8实时荧光PCR系统,对8种动物源性成分启动同时检测和每隔5 min顺序启动不同时检测,并将检测结果和ABI 7500荧光PCR分别检测结果进行比较.结果GNM C7-8实时荧光PCR系统同时检测猪、牛、羊、驴、马、鸭、水貂、狐狸8种动物源性成分,起峰周期数分别为30、27、21、21、24、17、15、17,与其不同时检测结果一样,与ABI 7500荧光PCR系统检测结果相比,猪、羊、马、鸭、水貂5种成分的起峰快1~2个周期数,其余3种成分检测结果一致,检测完成时间少16~20 min.结论GNM C7-8实时荧光PCR系统8个模块独立运行,互不干扰,无交叉污染,能够同时快速检测8种动物源性成分,为快速筛查动物源性成分提供强有力的设备技术支持.

基于HVI测试的标准化操作规范

为了规范大容量棉花测试仪的使用、校准及维护,提高检测结果准确性。作者根据HVI应用手册和实际操作经验,总结了大容量棉花测试仪的标准化工作各项要求。主要包括样品管理、气电及空间要求、恒温室、标准化仪器、校准与核查、比对试验、测试人员、健康安全、消防安全等。供业内同仁参考。

陶瓷产品浸泡废酸液处理系统原理与应用

陶瓷产品浸泡废酸液处理系统应用于陶瓷产品元素溶出实验后浸泡废酸液的无害化处理技术领域。现有陶瓷产品元素溶出实验完成后,浸泡废酸液或是通过实验室下水管路直接排入下水,或是经实验人员手动进行无害化处理,由于废液酸性较强,会对实验人员健康不利,同时对环境造成一定程度损害。本系统通过特定管路链接,自动收集试验完成后的浸泡废液后,添加一定比例中和试剂后,经循环自动中和处理使实验室排放废水达到符合排放指标。

固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定兽用中药制剂中泰妙菌素和沃尼妙林

本研究建立了固相萃取-液相色谱-串联质谱检测兽用中药制剂中的泰妙菌素和沃尼妙林的方法。样品采用乙腈提取,MCX固相萃取柱净化,在C18色谱柱上以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,液相色谱-串联质谱MRM方式进行定量分析。结果表明,2种化合物在1.0~100 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(R^(2))大于0.999,方法的检出限(LOD)为0.05 mg/kg,定量限(LOQ)为0.1 mg/kg。所有化合物在3个添加水平(0.1 mg/kg、0.2 mg/kg和1.0 mg/kg)下,方法回收率在82.0%~106.5%之间,精密度范围为2.89%~8.95%。该方法简单、准确,可实现兽用中药制剂中两种目标化合物的测定。

铜绿假单胞菌实时荧光重组酶介导链替换核酸扩增方法建立及应用

目的建立一种快速检测铜绿假单胞菌的实时荧光重组酶介导链替换核酸扩增(real-time RAA)方法。方法基于铜绿假单胞菌ecfX基因设计特异性引物和exo探针,通过灵敏性、特异性和疑似菌株检测评估所建立方法的有效性。结果Real-time RAA方法在39℃等温条件下反应20 min即可实现对铜绿假单胞菌的有效检测;特异性强,仅对铜绿假单胞菌出现特异性扩增;灵敏性高,对铜绿假单胞菌基因组DNA的检出限为3.0×10^3 fg/反应,对纯培养铜绿假单胞菌的检出限为1.0×10^3 CFU/反应。应用所建立的real-time RAA方法对分离的36株疑似铜绿假单胞菌进行检测,结果均为铜绿假单胞菌,同VITEK 2 Compact生化鉴定方法和real-time PCR方法结果一致。结论本试验所建立的real-time RAA方法反应快速、操作简单、可靠性高,可用于不同来源的铜绿假单胞菌的快速检测和鉴定。

牛副结核分枝杆菌可视化RPA-LFS快速检测方法的建立及应用

本研究针对副结核分支杆菌(MAP)F57基因特异性保守序列,设计RPA引物和nfo探针,建立了快速检测MAP的结合侧流层析试纸条的肉眼可视化RPA检测方法(RPA-LFS)。结果显示,所建立的RPA-LFS方法在金属浴中39℃恒温振荡反应20 min后,将产物加至侧流层析试纸条中,可在5 min内实现对检测结果的肉眼可视化判定;所建立的RPA-LFS方法特异性强,仅对MAP产生扩增,与其他常见可引起牛腹泻的病原均无交叉反应;以含有F57基因全长的重组质粒pTOPO-T-F57作为模板,RPA-LFS的检出限为12 copies。进一步应用RPA-LFS方法对57份牛腹泻临床样本进行MAP检测,检出9份阳性结果,与实时荧光PCR方法检测结果一致。本研究建立的副结核分支杆菌可视化RPA-LFS方法操作简单,反应快速,不依赖于复杂精准的仪器设备、专业技术人员和严格的实验室环境条件,为养殖场一线的MAP现场检测提供了一种新的解决方案。

警惕赤背寡妇蛛随货物及集装箱传入我国

赤背寡妇蛛是全世界毒性最强的蜘蛛之一,也是一种入侵种。我国口岸在进境澳大利亚货物及集装箱中多次截获该种蜘蛛。本文详细介绍了赤背寡妇蛛的入侵史和潜在适生区、扩散方式和口岸截获情况、对人体健康及环境的危害以及生物学和生态学特性,并给出了形态鉴定特征和DNA条形码鉴定方法,建议口岸应加强对该种的检疫、鉴定及监测,防止该种入侵我国。

2003—2019年进境棉花截获有害生物分析

本文对2003—2019年全国进境棉花的疫情截获数据进行统计,重点分析了检疫性或中国境内无分布的有害生物的种类组成及截获信息。结果表明,2003—2019年,全国口岸截获各类有害生物1252种18710种次。其中检疫性有害生物50种(属)383种次,以杂草类和昆虫类为主;非检疫性但确定境内无分布的有害生物23种(属);这些有害生物主要截获自运载集装箱、棉花夹带的混杂和棉花外包装。因非检疫性而未鉴定到种从而无法确定中国境内是否有分布的分类单元占总截获种类数的51.0%。印度和美国是最主要的疫情来源国,其次为澳大利亚和巴西。