大批量培养细胞爬片染色的简易装置

细胞培养技术越来越被当今许多学科所重视与应用[1].显示培养细胞形态结构的染色方法因此也受到人们的关注.长期以来研究者们使用的方法取得了较好的结果[2,3].但是应用到大批量的实验上时,就显得比较麻烦,且有染色结果有反应不一致的缺憾.我们经过多次摸索,利用普通染色架制作出一种简易装置,可一次染几十瓶培养细胞的爬片,取得良好效果,现介绍如下.

大鼠卵泡颗粒细胞透射电镜制样的简便取材方法

近年来，在很多妇科或更年期疾病的实验研究中，实验动物大鼠卵泡中颗粒细胞的超微结构观察是一个重要指标。由于大鼠卵巢卵泡都很小，而颗粒细胞又是半游离在卵泡液中，数量更少，因此，要得到足量的颗粒细胞进行电镜制样，并及时固定，显然取材比较困难。本实验中，我们在取材方面进行了一些技术上的处理，防止了目标细胞的流失与混淆，可以获得足量的颗粒细胞，方便制样，提高固定效果，方法简便易行，现介绍如下。

小鼠晶状体纤维的扫描电镜观察

用扫描电镜观察了小鼠平行于晶体前后轴不同断裂面的晶体纤维,发现纤维表面超微结构与其他一些动物基本一致,但在赤道部存在一种陡峭的,两侧凹凸不平的条形隆起,在晶体断裂面上象放射状条纹分布在赤道部纤维上,文内对该联系经晶体的生理功能进行了探讨;由于在平行于前后轴的不同断裂面上均可见到不同层次的板层样结构,因此提出晶体纤维板层的概念,并对其形成、连接、在晶体内的排列及意义进行了探讨.

动情期家兔输卵管上皮及其分泌活动的电镜观察

本实验用透射电镜和扫描电镜观察了动情期家兔输卵管上皮。证实分泌细胞和纤毛细胞都有分泌功能，共分泌三种分泌物质。本文对这些分泌物质的分泌方式、分泌活动进行了研究和探讨。另外，发现上皮基膜下方始终有一层成纤维细胞形成的胞质膜伴行，据此，对血一输卵管腔屏障的构成亦进行了讨论。

针刺对实验性肥胖大鼠下丘脑摄食中枢的影响

目的 :研究针刺对肥胖者下丘脑摄食中枢的影响。方法 :高脂致肥饲料喂养SD大鼠 ,制作实验性肥胖模型。应用神经细胞微电极记录和脑立体定位技术 ,通过对实验性肥胖大鼠针刺治疗 ,观察下丘脑外侧区 (LHA)饥饿中枢、腹内侧核 (VMH )饱食中枢神经细胞单位时间内电活动 (Hz)。结果 :针刺能够明显降低LHA的兴奋性 (P <0 0 1) ,提高VMH的电活动频率 (P <0 0 1) ,抑制肥胖鼠亢进的食欲 ,减少热卡的摄入 ,达到减肥目的。结论 :针刺对肥胖动物中枢神经核团的调整作用是针刺减肥的主要机制之一。

麦冬药物血清抗血管内皮细胞凋亡的分子机制

目的 探讨麦冬药物血清抗血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法 取人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,用内毒素造成凋亡细胞模型 ,通过荧光显微镜、流式细胞仪观察麦冬药物血清抗其凋亡的保护作用 ,并探讨麦冬药物血清对HUVEC中SOD、MDA的改变。结果 麦冬药物血清可明显保护HUVEC ,减少内毒素对其诱导的凋亡作用。其机理与减少自由基 ,增加超氧化物歧化酶有关。结论 麦冬能滋补阴液 ,抗HUVEC凋亡 ,可以有效防治血栓性疾病。

针刺对肥胖大鼠作用的形态学观察

本文采用高脂饲料喂养大鼠制造肥胖模型。应用光学和电子显微镜观察肥胖大鼠脂肪组织、小肠粘膜、肝组织形态，以及针刺后发生的形态学变化。结果显示，肥胖大鼠脂肪组织、小肠粘膜、肝组织均出现了形态学的异常。褐色脂肪细胞体积增大、充盈，脂滴增大，胞质内线粒体减少，细胞间隙变窄，毛细血管减少。针刺治疗后，上述形态学的异常均出现逆转，这种变化是针刺通过减少能量摄入，增加能量消耗达到减肥效应的形态学依据。

心俞募穴与心脏特异性联系通路的荧光双标法研究

目的 :探求心脏俞募穴与心脏的形态学联系通路 ,并揭示心脏俞募穴治疗心脏疾病的作用机理。方法 :将 3 0只大鼠随机分为三组 ,以荧光双标记法观察每组脊神经节标记细胞出现的数目。结果 :心脏俞募穴与心脏的共同传入神经元都主要分布在T2 ～T5,以T5 最集中。结论 :心脏俞募穴与心脏的联系通路可能是通过相同或相近的传入神经 ,并在脊神经节背角神经元进行整合后传入大脑中枢 ,故推断脊神经节是俞募穴刺激效应具有相对特异性的形态学基础之一。

针刺对肥胖大鼠下丘脑视上核的作用

目的 :探讨针刺减肥的作用机理。方法 :采用神经电生理和生化技术观察针刺治疗前后肥胖大鼠的变化。结果 :肥胖大鼠体重、Lee s指数、体脂、空腹血糖 (FBS)、空腹胰岛素 (FINS)和下丘脑视上核 (SON)神经细胞自发放电频率均明显高于正常大鼠 ,而胰岛素敏感性指数 (IAI)水平明显低于正常大鼠。相关分析显示 ,SON神经细胞自发放电频率与肥胖指标、FBS、FINS水平呈正相关 ,而与IAI水平呈负相关。针刺治疗后肥胖大鼠肥胖指标、FBS、FINS和SON神经细胞自发放电频率均明显回降 ,而IAI水平明显回升。结论 :生物机体SON神经功能亢奋可能是产生肥胖重要因素之一。针刺对肥胖机体下丘脑SON神经功能的良性调整作用可能是针刺减肥中枢作用机制之一。

石膏炮制前后的生肌药效比较研究

目的考察生、煅石膏的生肌作用。方法于大鼠背部两侧脱毛区用手术刀切割直径约为1.5cm圆形创口2个,间距约为2cm,深达肌层,肌层伤口厚度约为0.15cm,建立大鼠肌层创口模型。将40只形成创口的SD大鼠随机分为4组模型组、贝复济治疗组、生石膏治疗组、煅石膏治疗组。然后于创口处分别撒敷生、煅石膏细粉,喷洒药物贝复济,分别于第8和第14天观察创口肉芽组织的修复状态。结果煅石膏治疗组与模型组和生石膏治疗组比较,大鼠创口成纤维细胞数、肉芽组织中毛细血管数和肉芽组织中毛细血管面积均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);与贝复济治疗组比较,两者差异无统计学意义(P>0.05)。生石膏治疗组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论煅石膏能促进大鼠伤口成纤维细胞和毛细血管的形成,加快肉芽组织增生,从而促进皮肤创口的愈合。石膏煅制后药效发生改变,具有生肌作用。

肾俞募穴与肾特异性联系通路的荧光双标法研究

目的 :探求肾与其俞募穴之间的神经联系通路。方法 :应用荧光双标记法进行研究。结果 :“肾俞” 肾组、“京门” 肾组、“肾俞” “京门”组分别在T1 3～L3、T1 2 ～L2 、T1 3～L1 脊神经节内出现双标细胞。结论 :①脊神经节中存在可双重支配肾和体表的神经元 ,不仅使牵涉痛的机制得到进一步的解释 ,而且揭示了针刺穴位的感觉冲动是通过分支的传入轴突影响到内脏的功能和感觉或对某些脏器的活动产生影响。②为临床应用肾俞募穴治疗肾病提供了形态学理论根据。③进而揭示中医经络学中气街可能的现代生物学本质。

小肠俞募穴与小肠特异性联系通路的荧光双标法研究

目的 探求小肠俞募穴与小肠之间的神经联系通路。方法 应用荧光双标法进行研究。结果 小肠俞———小肠组、关元———小肠组分别在L1～L4 、T13～L3脊神经节内出现双标细胞。结论 ①脊神经节中存在可双重支配小肠和体表的神经元 ,不仅使牵涉痛的机制得到进一步的解释 ,而且揭示了针刺穴位的感觉冲动是通过分支的传入轴突影响到内脏的功能和感觉或对某些脏器的活动产生影响。②为临床应用小肠俞募穴治疗肠病提供了形态学理论根据。

针刺对肥胖大鼠下丘脑穹隆周核的作用

目的 :探讨针刺对肥胖机体下丘脑穹隆周核神经功能的作用机制。方法 :将实验大鼠随机分为正常组、对照组和针刺组 ,应用放免、神经细胞微电极和脑立体定位技术 ,观察针刺对肥胖大鼠体重、Lee’s指数、体脂、中枢和外周瘦素 (LP)和胰岛素 (INS)水平以及下丘脑穹隆周核 (PeF)神经细胞自发放电频率的影响。结果 :肥胖大鼠体重、Lee’s指数、体脂、血清中LP和INS水平以及PeF神经细胞自发放电频率均显著高于正常大鼠水平 ,而下丘脑LP和INS水平均显著低于正常大鼠水平 ;PeF神经细胞自发放电与肥胖指标、血清LP和INS水平均呈正相关 ,而与下丘脑LP和INS水平呈负相关。针刺治疗在取得良好减肥疗效的同时 ,肥胖大鼠血清LP和INS以及PeF神经细胞自发放电水平均显著回降 ,而下丘脑LP和INS水平却显著回升。结论 :肥胖机体LP和INS血脑转运异常以及PeF神经功能亢奋可能是产生肥胖的重要原因。针刺对肥胖机体中枢和外周LP和INS水平以及PeF神经功能的良性调整可能是针刺减肥的作用机制之一。

建立小鼠黄褐斑实验动物模型的初步研究

目的 :建立小鼠黄褐斑动物实验模型。方法 :用黄体酮注射液 (高、低两个剂量组 )攻击雌性小鼠 1个月 ,以皮肤、肝脏组织酪氨酸、MDA含量变化及皮肤黑色素细胞病理形态学指标作为考察模型是否成功的依据。结果 :酪氨酸、MDA明显升高 ,皮肤黑色素沉着增加。结论 :黄体酮攻击雌性小鼠所致的黄褐斑动物实验模型获得成功。

四君子汤对衰老小鼠肝和大脑皮质影响的透射电镜观察

应用透射电镜观察了四君子汤对衰老小鼠的肝和大脑皮质超微结构的影响，结果表明四君子汤能明显改善衰老小鼠的肝和大脑皮质的超微结构，提示四君子汤通过补脾益气，使脏器不断得到气血滋养，纠正脏腑虚衰，促使机体健康长寿。

山茱萸环烯醚萜苷对糖尿病大鼠胸主动脉血管内皮的保护作用

在发达国家，糖尿病大血管病变如糖尿病心脏病变导致50％的糖尿病人死亡，美国糖尿病心脏病居致死原因的第5位。糖尿病血管病变已严重地威胁着人类的健康,寻找能阻止或控制糖尿病血管病变发生、发展的有效药物已成为世界医药学研究的重点之一。现代研究认为，血管内皮损伤在糖尿病血管病变中是一早期的关键过程，故本文从形态学的角度观察其对糖尿病大鼠胸主动脉血管内皮的保护作用。

马钱子碱对人肝癌细胞HepG2细胞膜电位和通透性的影响

目的探讨马钱子碱诱导HepG2细胞凋亡效应是否涉及其细胞膜通透性和细胞膜电位(MP)的改变,研究其抗肿瘤的分子机制。方法以HepG2细胞为体外模型,采用吖啶橙/溴乙啶复合荧光染色通过荧光显微镜观察马钱子碱对HepG2细胞形态学和细胞膜通透性变化,采用膜敏感性荧光探针Di-4-ANEPPS标记细胞膜电位,利用激光共聚焦显微扫描技术研究马钱子碱对HepG2细胞膜电位在瞬间反应及不同时段的影响。结果在瞬时反应中马钱子碱(0.5mmol/L)对HepG2细胞的MP影响不明显,在4h和8h后,HepG2细胞的MP没有明显变化,此时细胞已开始出现早期的凋亡形态学变化,如核固缩、胞膜皱缩、核碎裂、胞浆空泡化、凋亡小体形成等,12h后MP负值有所下降,但同时细胞膜保持完整,细胞膜通透性和完整性均没有明显变化。结论马钱子碱在体外能通过诱导HepG2细胞凋亡来抑制其增殖,但这种早期诱导作用和细胞膜电位以及通透性没有明显相关性。

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠受损神经元细胞外信号调节蛋白激酶的影响

目的:探索电针对脑缺血再灌注大鼠大脑受损神经元的保护作用及其细胞外信号转导机制。方法:随机将24只SD大鼠均分为假手术组、模型组、电针组和电针+PD98059组,采用改良Longa线栓法复制局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型。电针组取"百会""大椎"穴,选用疏密波,频率80～100Hz,电流强度1～3mA,电压1～3V,持续电刺激60min。电针+PD98059组于腰椎间隙注入丝裂原活化蛋白激酶1的抑制剂PD980592.78mg/kg,并电针。依据Julio氏神经行为学评分法对各组大鼠进行评分,采用免疫组织化学染色法观察电针及PD98059阻滞状态下电针对模型大鼠右侧病灶处颞叶大脑皮层锥体细胞层细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达的影响。结果:电针能改善模型大鼠的神经行为学分值(P<0.01),上调脑缺血再灌注大鼠受损神经元ERK的蛋白表达(P<0.01),其作用可被PD98059阻断(P<0.01)。结论:电针可减轻脑缺血再灌注大鼠大脑神经元的损伤,促进损伤修复,这一作用可能与其影响缺血再灌注后ERK信号通路的变化有关。