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γ-谷氨酰转肽酶在大肠杆菌周质空间的双融合表达
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作者 项灵娇 蔡礼年 +2 位作者 王艳莉 严雪妮 林陈水 《氨基酸和生物资源》 CAS 2016年第3期63-67,共5页
设计引物PCR扩增大肠杆菌Escherichia coli DH5α的γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)成熟肽的编码基因,利用基因拼接(gene splicing by overlap extension,SOE)技术将其拼接至小分子泛素相关修饰物(the small ubiquitin-... 设计引物PCR扩增大肠杆菌Escherichia coli DH5α的γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)成熟肽的编码基因,利用基因拼接(gene splicing by overlap extension,SOE)技术将其拼接至小分子泛素相关修饰物(the small ubiquitin-related modifier,SUMO)基因的下游,并重组至pET-39b质粒中,重组质粒转化表达宿主E.coli BL21(DE3)。得到的工程菌经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,全菌SDS-PAGE分析,得到表观分子量约为97×103的双融合蛋白,DNA测序进一步证实工程菌构建成功。以菌体直接催化L-谷氨酰胺和乙胺合成L-茶氨酸,纸层析法证实该重组酶具有较好的活性,为酶法生产L-茶氨酸奠定基础。 展开更多
关键词 Γ-谷氨酰转肽酶 双融合表达 L-茶氨酸 酶促反应
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小分子泛素相关修饰物SUMO及其融合表达 被引量:3
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作者 陈相剑 项灵娇 +1 位作者 严雪妮 林陈水 《氨基酸和生物资源》 CAS 2015年第3期21-24,共4页
小分子泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)是一类具有高度保守序列的低分子量蛋白。在蛋白质的融合表达中,SUMO作为融合标签得到了广泛应用。与其他传统融合标签如谷胱甘肽-S-转移酶、二硫键形成蛋白A、硫氧还蛋白... 小分子泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)是一类具有高度保守序列的低分子量蛋白。在蛋白质的融合表达中,SUMO作为融合标签得到了广泛应用。与其他传统融合标签如谷胱甘肽-S-转移酶、二硫键形成蛋白A、硫氧还蛋白等相比,SUMO具有防止蛋白降解、促进蛋白折叠、能被SUMO蛋白酶专一性识别切割并在目的蛋白上不会留下氨基酸残基等优点。本文综述SUMO融合蛋白及其配套的SUMO蛋白酶在融合表达中的优势和应用。 展开更多
关键词 SUMO SUMO蛋白酶1 融合标签 融合表达
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