骨髓细胞-80℃保存及其程序移植的实验研究

目的：提供简便有效的骨髓细胞（ＢＭＣ）保存方法，以便进一步提高骨髓移植效果。方法：以昆明种小鼠急性放射病为模型，进行了－８０℃冷冻保存ＢＭＣ及其程序移植的研究。结果：－８０℃保存的ＢＭＣ其有核细胞回收率为（８９．０±３．５）％，锥虫蓝拒染率为（８５．０±３．６）％；产率（每１０５个ＢＭＣ）：单核巨噬细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）为１０８±１０，脾细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－Ｓ）为１２±３。昆明种小鼠程序移植－８０℃保存的同种异基因ＢＭＣ４×１０５，其活存率与一次移植同条件冻存的ＢＭＣ１×１０７相同（３０％）；程序移植４×１０６时，活存率显著提高（６０％）。经性染色体检查各组均有植入证据。结论：－８０℃保存ＢＭＣ是一种行之有效的方法；骨髓程序移植可能充分利用了每次腾出的“龛位”，减少了移植细胞数，却增加了干细胞植入，提高了移植效果，是一种“种子与土壤”

巨噬细胞炎症蛋白-2与造血

巨噬细胞炎症蛋白－２（ＭＩＰ－２）目前主要包括ＭＩＰ－２α和ＭＩＰ－２β，即生长相关癌基因Ｇｒｏ（Ｇｒｏβ和Ｇｒｏγ），其受体为ＣＸＣＲ２／ＩＬ－８ＲＢ，除广泛参与免疫调节、血管形成外，还是一种具有正负双向调控造血功能的ＣＸＣ类趋化因子。

胎肝-骨髓程序移植提高移植效果

为进一步提高骨髓移植效果。以昆明种小鼠急性放射病为模型，进行了胎肝－骨髓程序移植（ＦＬ－ＢＭＳＴ）后小鼠活存及造血重建、急性移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）的研究。胎肝－骨髓程序移植 １ｘ １０６个骨髓细胞时，于照射后第 １７ｄ外周血白细胞、骨髓有核细胞计数接近正常，ＣＦＵ－Ｅ、 ＣＦＵ－ＧＭ、 ＣＦＵ－Ｆ、 ＣＦＵ－Ｓ已达正常； ＧＶＨＤ较一次骨髓移植组轻；活存率达６０％，显著高于一次骨髓移植组。胎肝-骨髓程序移植既充分利用了每次腾出的“龛位”（Ｎｉｃｈｅ），又通过移植胎肝基质细胞改善了“龛位”，增加了“龛位”，从而增加了干、祖细胞的植入并加快增殖分化，减少了移植细胞数，提高了移植效果；是一种较好的移植新方法。

铜紫红素18对小鼠红系造血作用的研究

为了寻找再生障碍性贫血治疗药物，从四毗咯化合物中设计合成了铜紫红素18，观察铜紫红素18对受照射昆明种小鼠红系造血的作用。结果表明：铜紫红素18能明显促进造血干细胞（CFU-S）优先向红系祖细胞（CFU－E）转化；在恢复期也有提升WBC和骨髓有核细胞计数的作用。本结果提示，铜紫红素18作为再生障碍性贫血防治药物具有良好的发展前景，值得进一步研究。

造血干细胞移植研究中的美学观

从本世纪３０年代起人们对造血干细胞移植进行了深入的研究，经过半个世纪的发展已取得了卓越的成绩，并放射出绚丽多彩的科学美感。如果造血干细胞被比拟为“种子”，则可以把调控造血的造血微环境比拟为“土壤”，把微环境中供干细胞增殖分化的场所比拟为“龛位”。“种...

造血干细胞移植研究中的美学观

科学研究与美的发掘,本质上都是创造、生产,都源于劳动实践。前苏联学者古雪加(А.В.Гуицкя)说:'任何创造活动都深深地带有美学的性质,而创造(包括科学创造)才能的培养乃属于艺术的范围,尤其是艺术的有些门类似乎是专门为此而设立的。'科学研究与美有着深刻的联系。造血干细胞移植是当前医学研究中的热门课题。在造血干细胞移植的研究中,我们既可以感受到科学美的享受和愉悦,更能领悟出美的科学内涵。

反义STAT3对肿瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用

背景与目的:研究表明STAT3蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达,STAT3蛋白可能参与了肿瘤的形成和发生。本文拟研究STAT3蛋白在鼠黑色素瘤细胞B16、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HepG-2、人肺癌细胞A549、人宫颈癌HeLa细胞株中表达和活化情况,研究反义STAT3寡核苷酸对B16细胞的增殖抑制和促凋亡作用,为进一步反义药物设计及应用于辐射领域作前期研究。方法:利用Westernblot检测所选几种肿瘤细胞的STAT3蛋白表达和磷酸化情况、反义干涉前后B16细胞中STAT3蛋白表达和磷酸化活化的变化情况,MTT法检测细胞增殖变化,利用Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察,用AnnexinⅤ/PI复染结合流式细胞仪检测细胞早期凋亡。结果:所研究的几种肿瘤细胞中均可检测到STAT3蛋白的高表达和磷酸化;反义STAT3转染后,B16细胞中STAT3蛋白的表达量及磷酸化水平均有下降;转染后48h,在0到200nmol/L范围内,反义核酸浓度越高,对B16细胞的增殖抑制效应越强,但是并不能够完全抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.01)。寡核苷酸浓度超过250nmol/L时,正义对照也表现出一定的增殖抑制作用(P<0.05);转染后不同时间内检测,结果表明转染后24h反义核酸即开始表现出一定的增殖抑制效应,48h起表现出明显的抑制效应;反义转染后,检测各组细胞早期凋亡率:对照组早期凋亡率为5.52%,反义400、800、2000nmol/L组早期凋亡率分别为8.22%、9.99%,16.97%,正义对照400、800、2000nmol/L组早期凋亡率分别为5.87%、5.36%、13.31%。统计分析表明反义寡核苷酸与B16细胞作用后能够促进细胞的早期凋亡(P<0.01),正义低浓度转染组(400、800nmol/L组)与对照组无明显差别(P>0.05),而对照组与正义2000nmol/L组相比,细胞的早期凋亡率也有统计学差异(P<0.01)。结论:B16、SMMC-7721、HepG-2、A549、HeLa等恶性肿瘤细胞株中STAT3蛋白高表达并且可检测到磷酸化水平的增高;反义转染后B16细胞中STAT3蛋白的表达和磷酸化水平降低,细胞增殖受到明显抑制,细胞的凋亡增加,表明STAT3可能成为肿瘤治疗新的分子靶位。

γ射线照射后小鼠骨髓造血细胞凋亡及Fas表达的研究

目的：研究γ射线照射后小鼠骨髓造血细胞凋亡及其与 Ｆａｓ 表达的关系。方法：采用电镜、 Ｄ Ｎ Ａ 琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术观察小鼠经６０ Ｃｏ γ射线照射后不同时间的骨髓造血细胞凋亡及 Ｆａｓ 的表达情况。结果：在照射后４ ｈ 细胞即出现核固缩、染色质凝集； Ｄ Ｎ Ａ 琼脂糖凝胶电泳有大量的小分子片段，呈典型“梯状”图谱；流式细胞术分析表明，凋亡细胞百分率在照射后４ ｈ 明显增加，８ ｈ 达到高峰；照后４ ｈ， Ｆａｓ 表达显著增强。结论：γ射线照射后可引起骨髓造血细胞凋亡， Ｆａｓ 可能参与了辐射诱导的造血细胞凋亡过程。

苯甲酸雌二醇对辐射诱导小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响

目的:观察苯甲酸雌二醇对γ射线诱导小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响,以探讨其抗放射作用机制。方法:昆明种小鼠,随机分为正常组、单纯照射组和用药照射组3组,每组各15只。单纯照射组小鼠用7射线照射4.0Gy;用药照射组于照射前10d每只小鼠肌内注射0.1mg苯甲酸雌二醇,同时用γ射线照射4.0Gy;正常对照组不作任何处理。采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测骨髓造血细胞DNA裂解片段,采用流式细胞术观察各组小鼠照射后4h、8h、12h骨髓造血细胞凋亡、Fas和Bcl-2表达的变化情况。结果:γ射线照后8h,骨髓造血细胞DNA裂解片段增加,出现了典型DNA"梯状"条带,而用药照射组和正常对照组均未见明显"梯状"条带。照射后4h、8h、12h,用药照射组骨髓造血细胞凋亡率均明显低于单纯照射组(P<0.01);Fas表达较正常对照组略有增加,并未出现单纯照射组所呈现典型的高峰期,与单纯照射组比较显著降低(P<0.01);Bcl-2表达不降反而升高,与单纯照射组相比差异显著(P<0.01)。结论:苯甲酸雌二醇可能是通过下调Fas和上调Bcl-2的表达抑制了γ射线诱导的小鼠骨髓造血细胞凋亡。

小鼠不同细胞数骨髓移植后回巢与生存率观察

目的:探讨移植细胞数对小鼠骨髓移植回巢及生存率的影响。方法:采用不同细胞数移植、不同细胞数加不同时问间隔程序移植及流式细胞仪检测等方法,观察不同细胞数骨髓移植后小鼠骨髓内回巢效果和生存情况。结果:不同细胞数骨髓移植中5×105组的回巢细胞数与高细胞数组无差异,回巢率远远高于后者(P<0.01);生存率1×105组为95％,与高细胞数组无差异。不同细胞数加不同时间间隔程序移植以细胞总数在1×105、间隔24 h移植组存活率高,组间差异非常显著(P<0.01)。结论:在一定细胞数量范围内,分次移植可能提高移植干细胞的回巢效率。

大鼠浆细胞株来源的GM-CSF对受照射小鼠的疗效观察

目的 :观察造血生长因子对受照射小鼠辐射损伤的防治作用。方法 :用大鼠浆细胞株培养上清 (RSP- CM)和小鼠成纤维细胞株培养上清 (L P3- CM)来源的集落刺激因子 ,治疗受不同剂量 6 0 Coγ射线照射的 ICR小鼠。观察小鼠 30 d存活率、死亡动物平均存活日、保护系数及部分动物外周血白细胞计数。研究 GM- CSF对受照射小鼠重建造血功能的疗效及量效、时效关系。结果 :RSP- CM能显著提高受 7.5 Gy照射小鼠的存活率 ,而 L P3- CM则无效。照射剂量为 8.0 Gy时 ,只有 RSP- CM治疗组有效 ,预防组和防治组无效。照射剂量为 8.5 Gy时 ,小鼠 30 d内全部死亡 ,表明 GM- CSF对大剂量照射小鼠疗效差 ,但从保护系数看 ,各实验组均有效 ,且存在量效、时效关系。结论 :RSP- CM源性 GM- CSF对受照小鼠的骨髓损伤有促进造血恢复的作用 ,且在一定程度上存在量效、时效关系 ,而 L P3- CM源性 M- CSF则无效。

人脐血程序移植重症联合免疫缺陷小鼠的实验研究

目的：探讨提高脐血移植的新方法。方法：以经亚致死剂量γ线照射后的重症联合免疫缺陷小鼠为动物模型，进行人冻存脐血的程序移植，利用人粒－单系祖细胞培养及流式细胞仪检测植入小鼠骨髓等组织中的人源性细胞。结果：与一次移植相比，程序移植相同细胞数时，植入率显著提高：程序移植干细胞数量降低至２０％ ，其造血及免疫功能恢复到相近水平。结论：脐血程序移植提高了干细胞的植入率，为临床成人脐血移植提供了一条新思路。

脐血干细胞体外程序扩增的实验研究

目的 利用一种新的体外扩增脐带血原始细胞的方法 ,使得干细胞在数量增加的同时 ,又能尽量保持原始性。方法 在相同细胞因子组合下 ,用体外液体培养比较脐血有核细胞程序扩增组与一次扩增组及有无基质层条件下的优劣。结果 培养 2 8d后 ,虽然程序扩增组MNC细胞绝对数低于一次扩增组 ,但其CD34 +细胞数明显高于一次扩增组 ,且有基质层组细胞总数 ,原始细胞数均高于无基质层组。结论 体外程序扩增脐血干细胞是一种有效的扩增干细胞的方法 ,从而使得脐血的应用更为广泛。

硫酸葡聚糖预处理方案在脐血移植中应用的初步研究

目的 :进一步了解脐血造血细胞回巢潜能及硫酸葡聚糖 (DS)的动员作用机制。 方法 :重症联合免疫缺陷小鼠经亚致死剂量γ射线照射或 DS预处理后 ,进行经冻存后的人脐血移植 ,利用人粒 -单系祖细胞培养及流式细胞术 ,检测植入小鼠骨髓、脾脏等器官中的人源性细胞。 结果 :与未预处理组相比 ,DS或照射预处理组移植受体鼠内人源 CD45 + ,CD34+ 及CD19+细胞植入水平明显提高 ;DS预处理组植入水平虽较照射预处理组差 ,但毒性较低 ,小鼠存活率高达 10 0 %。 结论 :DS是一种安全、有效的预处理方案 ;DS对造血干细胞既有动员作用又有促进龛位腾出以供移植干细胞回巢的作用。

造血干细胞移植

造血干细胞移植,是将具有造血潜能的健康造血干细胞,通过静脉输入受者体内并植入骨髓,帮助患者重建造血功能,达到治疗或辅助治疗相关疾病的目的.

造血干细胞“归巢”机制的探讨

近年来 ,诸如骨髓、外周血、脐血等多种来源的造血干细胞 (HSC)移植在临床上日益广泛地开展起来 ,同时关于干细胞归巢机制的研究也有所进展。造血干细胞的归巢是一个多步骤过程。经研究发现 ,在归巢中涉及了干细胞表面和造血微环境中的一系列的分子与细胞因子。本文综述了其中一些研究较多的分子与因子 ,并对今后的研究提出了自己的看法。

Experimental study on human umbilical cord blood scheduled transplanta-tion in severe combined immunodeficient mice

Objective: To explore a new way for developing the human umbilical cord blood (CB) engraftment with high efficiency and in further understand the homing potentiality of hematopoietic stein/progenitor cells (HSC/HPC). Method: Sub-lethally irradiated severe combined immunodeficient (SCID) mice were transplanted i. v. with CB which was cryopre- served at - 80℃. Human cells in recipient mice were detected by flow cytometry and CFU-GM assay for each host organ. Results: In contrast with the single transplantation, scheduled engraftment of the identical numbers of CB cells resulted in an obvious increase of CD45+ and CD34+ cells produced in SCID mouse bone marrow (BM). While the donor cells were reduced by 5 times, the similar reconstitution of both hematopoietic fumctions and part of immunologic fumctions was ob- tained.Conclusion:Scheduled engraftment can improve repopulating of the HSC, which provides a novel way for clinical cord blood engraftment into adults.

小鼠骨髓程序移植的实验研究

目的：探讨进一步提高骨髓移植效果的新方法。方法：以昆明种小鼠急性放射病为模型，进行了骨髓程序移植后小鼠活存率及造血重建、急性移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）的观察。结果：骨髓程序移植可使小鼠移植细胞数降至１０５数量级，活存率达３０％；骨髓程序移植４×１０６个细胞时，于照射后１７天小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞计数显著回升，ＣＦＵＥ、ＣＦＵＧＭ、ＣＦＵＳ、ＣＦＵＦ已达正常，ＧＶＨＤ较一次移植１×１０７骨髓细胞组轻，活存率达６０％，显著高于一次骨髓移植组（３０％）。结论：骨髓程序移植可能充分利用了每次腾出的“龛位”，增加干细胞植入，却减少了移植细胞数，减轻了ＧＶＨＤ，提高了移植效果。