肺表面活性蛋白B的构效关系研究进展

肺表面活性物质是分布于肺泡内衬的一类磷脂蛋白复合物。而由于磷脂具有两亲性,能与肺表面活性物质中的特异性蛋白相互作用而在肺泡中排列形成磷脂单分子层,从而发挥其降低气液界面表面张力的作用。肺表面活性蛋白B(surfactant protein B,SP-B)是肺表面活性蛋白最为重要的特异性蛋白,它的异常常常引起肺部各种疾病,因此SP-B在肺功能维持和修复中起着不可替代的作用。SP-B具有类似于阿米巴穿孔肽超蛋白家族成员的结构,属于鞘脂激活蛋白样蛋白超家族蛋白(SAPLIPs)。通过分析脂质-蛋白相互作用和SP-B的构效关系特点,为基于类似物的药物开发提供理论依据。

大鼠成熟的肺表面活性蛋白B的原核表达及纯化

为表达和纯化SP-B蛋白,先对SP-B基因进行稀有密码子优化,PCR反应获得SP-B片段,构建重组质粒pGEX4T-1/SP-B,转化到E.coli BL21(DE3)中诱导表达;用SDS-PAGE与Western blot进行检测;用GSTPrep FF 16/10对融合蛋白进行纯化。经双酶切鉴定证实质粒中插入基因长250bp,测序结果与大鼠SP-B cDNA序列相符;质粒转化后用IPTG进行诱导,在分子质量约34ku处出现1个新条带,与pGEX4T-1/SP-B蛋白预期大小一致,且该融合蛋白能可溶性表达并被纯化。结果表明成功构建了pGEX4T-1/SP-B重组质粒,表达、纯化得到GST/SP-B蛋白,为研究肺表面活性物质替代药物奠定了基础。

CBS对红色毛癣菌的抗菌及协同增效作用研究

目的:研究荧光增白剂CBS(flourescent brightener CBS,CBS)对红色毛癣菌的抗菌作用,以及联合使用酮康唑和特比萘芬的增效作用。方法:采用滤纸片扩散法,探究CBS对红色毛癣菌的单一抗菌作用;采用MTT法探究CBS联合酮康唑、特比萘芬对红色毛癣菌的协同抗菌作用;然后采用均匀设计方法结合SPSS软件建立模拟方程,并通过验证试验确定最优配方;用豚鼠构建红色毛癣菌感染的动物模型,评价最优配方的实际药用效果。结果:酮康唑、特比萘芬联合CBS均对其存在协同作用。均匀设计得到最优配方是CBS浓度为1.861 mg·mL^(-1),酮康唑浓度为1.5μg·mL^(-1),特比萘芬浓度为0.175μg·mL^(-1),SDS浓度为0.077 4 mg·mL^(-1),氮酮浓度为6 mg·mL^(-1)时,理论最大抑制率为75.34%。进行动物试验表明联合药物比单一药物平均缩短了6 d的治疗时间。结论:CBS对红色毛癣菌有抗菌作用,联合酮康唑和特比萘芬对红色毛癣菌具有协同增效作用。