7对猪源性成分检测相关引物的特异性评测

为了评测物种鉴定PCR体系的特异性及其影响因素,实验对猪源性成分鉴定相关的7对引物就退火温度、镁离子浓度和不同Taq酶的影响进行了研究。结果表明,退火温度和镁离子浓度对PCR特异性有着重要影响,而其中2对引物优化后仍与鼠、兔、牛、羊、鸡和鸭有非特异性扩增。不同的Taq酶对引物特异性也有重要影响,本实验中r Taq酶在7对引物PCR体系中特异性最佳。通过对引物体系的优化和选择不同的Taq酶,可以有效提高特异性,减少非特异性扩增,为建立物种鉴定的PCR体系及多重PCR提供了基础。

三引物PCR检测牛羊猪源性成分的方法

建立了三引物PCR鉴定牛羊猪源性成分的方法,为肉类及产制品掺假鉴定或肉品溯源提供了简单易行的方法。通过对比牛羊猪的线粒体DNA(mt DNA)全序列,在保守区设计通用引物,在特异性区域设计特异引物并结合三引物PCR技术,扩增3个物种的特异性片段,羊、牛和猪产生片段大小分别为570、549、420 bp,依据片段大小可以在一次PCR中鉴定3个物种。建立的方法简单易行,特异性和灵敏度好,可以在肉类及产制品鉴定和溯源中应用,提高了检测效率。