禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc基因表达及凋亡的影响

【目的】探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染禽类后导致免疫器官发生细胞凋亡的机理。【方法】以1日龄SPF雏鸡为试验对象,将100只SPF雏鸡随机均分为REV感染组和未感染病毒的对照组,REV感染组雏鸡经腹腔感染500μL REV稀释液,对照组雏鸡经相同途径注射等量灭菌生理盐水,于病毒感染后第1、7、14、21、28和42天,2组雏鸡随机各抽取5只,心脏采血处死雏鸡后快速摘取法氏囊。分别应用HE染色和病理切片成像系统测定分析法氏囊细胞核浆比,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒测定凋亡细胞数,免疫组化法测定Bcl-2和C-myc阳性细胞数量,实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测法氏囊Bcl-2和C-myc基因mRNA表达和蛋白含量。【结果】①REV感染1日龄SPF雏鸡后21~42 d,其法氏囊淋巴细胞凋亡百分比显著或极显著高于对照组雏鸡(P<0.05;P<0.01);②SPF雏鸡感染REV后21和28 d,其法氏囊细胞核浆比显著低于对照组雏鸡(P<0.05);③REV感染SPF雏鸡法氏囊中Bcl-2和C-myc阳性细胞数在病毒感染后21和28 d显著高于对照组雏鸡(P<0.05);④REV感染SPF雏鸡后21 d,其法氏囊Bcl-2和C-myc基因mRNA表达极显著高于对照组雏鸡(P<0.01)。⑤SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊中Bcl-2蛋白含量较对照组雏鸡有不同程度的增加,其中21和28 d分别差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05),病毒感染组雏鸡的C-myc蛋白含量也始终高于对照组雏鸡,且21和28 d极显著增高(P<0.01)。【结论】REV感染所致SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc的mRNA表达以及蛋白含量异常均与病毒感染导致的法氏囊细胞凋亡密切相关,而法氏囊细胞凋亡数量增加与REV感染引发的机体免疫机能抑制密切相关。

REV感染对SPF雏鸡胸腺细胞凋亡及BCL-2的影响

为了探究禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)感染无特殊病原体(specific pathogen free,SPF)雏鸡后,SPF雏鸡胸腺细胞凋亡的动态变化及细胞凋亡与B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B cell lymphoma/lewkmia-2,BCL-2)mRNA和蛋白表达的相互关系,将60只1日龄SPF雏鸡随机分为对照组和REV感染组,在病毒感染后1,7,14,21,28,42 d分别采集上述2组雏鸡的胸腺,应用TUNEL法测定胸腺细胞的原位凋亡变化,用间接ELISA法和免疫组织化学法分别测定BCL-2蛋白含量及阳性细胞数量,用qRT-PCR检测BCL-2的mRNA表达。结果发现,与对照组雏鸡比较,REV感染雏鸡的胸腺细胞凋亡数量在整个试验期间均出现增多,且在病毒感染后21,28 d明显增多(P<0.05或P<0.01)。与此同时,BCL-2的mRNA表达、蛋白含量以及BCL-2阳性细胞数量均增多,并在病毒感染后21,28 d显著增多(P<0.05或P<0.01)。上述结果表明,REV感染的SPF雏鸡胸腺细胞BCL-2 mRNA表达和蛋白含量的增加与病毒感染导致的胸腺细胞凋亡密切相关,胸腺细胞凋亡的增加是REV感染所致雏鸡细胞免疫功能低下的直接因素。