3,4-苯并芘肺内注射构建大鼠肺肿瘤模型的实验研究

背景与目的目前常用的肺癌移植瘤模型和致癌剂诱发的大、小鼠肺肿瘤等动物模型均存在不同程度的缺陷,构建方法有待进一步完善。本研究拟建立一种简便可行的肺肿瘤动物模型构建方法,为肺肿瘤的发病机理研究以及筛选、评估肺肿瘤的防治方法提供一种有效的模型工具。方法购置36只体重180～220g雌性Sprague Dawley(SD)大鼠,适应性喂养1周,随机分为两组,每组18只。模型组给予0.2mL(只/次)3,4-苯并芘-玉米油(含3,4-苯并芘2mg)溶液,对照组给予0.2mL(只/次)玉米油,经右胸壁中部注射至右肺,每两周处理1次,共4次。处理后观察1年,期间出现呼吸困难时处死大鼠,首次处理后1年处死全部仍存活大鼠,解剖大鼠肺、食管、胃肠道、肝及脑等脏器,观察有无肿瘤形成,并对肿块及全部大鼠的肺组织切片进行苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色分析。结果两组均无大鼠因穿刺注射而死亡。对照组大鼠注射玉米油观察1年仍生存状况良好,处死后均未发现肺及其他脏器肿瘤,1年存活率为100%;模型组大鼠注射3,4-苯并芘-玉米油混合溶液处理后第1只出现呼吸困难者发生于16周,并经组织病理学证实为肺部未分化细胞癌,10只大鼠于处理16周以后至1年之间相继出现呼吸困难,处死后均发现右肺肿块,组织病理学均证实为恶性肿瘤,1只大鼠于处理后26周出现右下肢大腿恶性肿瘤。其余6只大鼠经观察1年仍存活且未出现呼吸困难,其中1只发现肺恶性肿瘤,5只正常。18只接受3,4-苯并芘-玉米油处理中的13只大鼠1年内成功诱发恶性肿瘤,总成瘤率72.22%。其中肺部恶性肿瘤12只(肺部成瘤率为66.67%),组织病理学分类为:2只低分化鳞癌,3只肺腺癌,未分化细胞癌7只,未分化细胞癌占58.33%。结论3,4-苯并芘经胸壁穿刺肺内注射是一种简便可靠的肺肿瘤动物模型的构建方法。

绿茶对苯并芘诱发大鼠肺癌的预防及其机制初探

背景和目的中国绿茶为人们喜爱的饮料,含有多种抑制肿瘤细胞生长的茶多酚,有可能成为有效的防癌饮料。本实验探讨绿茶对苯并芘诱发大鼠肺癌的预防作用并初步探讨其机制。方法对3组雌性SD大鼠采用相同的饲料及不同的饮料饲养,A组仅饮绿茶,B、C组仅饮水。3组大鼠均接受4次肺内注射处理:A、B组均注射苯并芘-玉米油混合物,C组注射玉米油。1年后处死全部仍存活大鼠。取肿块及全部大鼠的肺组织进行HE染色病检。并比较各组大鼠肺癌p53、Bcl-2表达。结果观察1年C组无肺癌发生,B组大鼠发生肺癌15例,成瘤率达75%(15/20),A组大鼠发生肺癌6例,成瘤率为30%(6/20),A、B两组之间成瘤率差异有统计学意义(P<0.01)。绿茶干预组肺癌组织p53基因mRNA及蛋白水平表达均有上调趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),Bcl-2基因mRNA及蛋白水平表达则均明显下调(P<0.05)。结论绿茶对肺癌具有明显的预防作用;绿茶对p53表达具有一定的上调作用,但下调Bcl-2表达的作用更明显,这可能与其防癌机制有关。

用普通琼脂糖代替低熔点胶回收DNA片段

为了建立一种直接从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简便实用的方法 ,采用聚合酶链式反应扩增人P53基因外显子7、8和其间的内含子7序列 ,用普通琼脂糖凝胶电泳,直接从凝胶中切下产物带 ,用加热熔化法回收DNA ;紫外比色法测定回收率 ;用测序法鉴定回收产物质量。并用QIAquickSpin纯化柱对照。结果表明 ,本法回收的产物质量明显优于用QIAquickSpin柱回收 ,本法回收的产物用于测序效果极佳 ,回收率达80% ,用QIAquickSpin柱回收率不到20% ,差异非常显著(P<0 01)。证明这种方法回收PCR产物质量可靠 ,能代替低熔点胶回收DNA 。

肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析

目的 :研究肺鳞癌、腺癌与Ki-ras基因外显子 1,2及p5 3基因外显子 7,8突变谱并观察肺鳞癌、腺癌预后同Ki-ras和 p5 3基因突变的关系。方法 :用PCR和测序方法分析 33例肺鳞癌和 2 7例肺腺癌Ki-ras基因外显子 1,2和 p5 3基因外显子 7,8错义突变。并追踪观察突变者和非突变者的二年存活率。结果 :肺鳞癌中发现 5例 (15 .16 % )Ki-ras基因突变和 12例 (36 .37% )p5 3基因突变 ;肺腺癌中发现 2例 (7.4 1% )Ki-ras基因突变和 7例 (2 5 .93% ) p5 3基因突变 ,两型肺癌间Ki-ras和p5 3基因突变阳性率差异均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;肺鳞癌、腺癌中 p5 3基因突变总阳性率为 31.6 7% ,Ki-ras基因突变总阳性率仅 11.6 7% ,p5 3基因突变率高于Ki-ras基因突变率 (P <0 .0 5 )。p5 3基因突变谱与一般报道相似。Ki-ras基因突变情况与一般报道有所不同 ,未发现一般文献报道较多的第 12位等密码子突变 ,发现有第 6位密码子纯合性突变和第 31位和第 79位密码子杂合性突变。预后追踪显示 :无突变的病例 2年生存率为 4 0 % ,存在突变的病例 2年生存率仅 12 %。结论 :肺鳞癌、腺癌的Ki-ras和 p5 3基因突变谱较广 ,肺鳞癌和腺癌的预后均与这两个基因突变有关。

中央型肺癌病理类型构成比变迁分析

目的调查经支气管镜活检诊断的中央型肺癌组织病理学类型构成比的动态变化。方法通过支气管镜直视下钳夹取病变组织,切片、苏木精-伊红染色行组织病理学诊断,调查1987—2009年的23年间不同病理类型中央型肺癌所占比例的变化。结果自1987年1月-2009年12月,经支气管镜活检确诊中央型肺癌6 916例,其中1987-1991、1992-1996、1997-2001、2002-2006、2007-2009年5个时期分别诊断中央型肺癌320、773、668、2 546、2 609例。5个时期肺鳞癌占全部肺癌的比例分别为61.88%、64.17%、64.82%、57.58%、51.78%。肺腺癌的比例为23.33%、18.50%、16.02%、18.03%、25.41%。小细胞肺癌比例为16.67%、16.69%、17.81%、21.41%、19.97%,其中小细胞肺癌所占比例呈上升趋势(P<0.01)。女性肺癌占同期全部肺癌的比例分别为:在肺鳞癌中为7.07%、8.06%、11.32%、5.39%、7.40%;在肺腺癌中为23.33%、27.27%、31.78%、37.04%、37.71%;在小细胞肺癌中为16.67%、19.38%、13.45%、18.53%、17.66%。女性肺腺癌的比例呈上升趋势(P<0.05)。但23年间肺鳞癌平均诊断年龄为56.07、57.50、56.15、57.70、58.66岁,肺腺癌的平均诊断年龄为53.97、55.97、53.51、55.18、55.72岁,小细胞肺癌的平均诊断年龄为51.42、53.74、53.89、55.00、55.47岁,三大病理类型的肺癌发病并无年轻化趋势。结论小细胞肺癌占全部中央型肺癌的比率呈上升趋势,女性肺癌占全部中央型肺癌的比率特别是女性肺腺癌的发病呈上升趋势。

基因DNA双链四色荧光单道测序的实验研究

作者采用四色荧光单道法对ＰＣＲ产物双链直接测序,通过改进操作方法,获得成功。1 材料与方法1.1 材料手术留标本或纤维支气管镜钳取病变或可疑病变组织,用生理盐水于4℃保存,同时送病检对照。310型ＤＮＡ测序仪,2400型ＰＣＲ仪为美国ＰＥ公司产,微量高速离心机为北京六...

吸烟与肺癌p53基因突变的关系

肺癌p53基因突变与吸烟密切相关 ,烟草中含有苯并芘等上百种化学物质 ,随吸烟进入气道和肺部 ,被支气管粘膜上皮吸收入细胞内连接到DNA上引起p53基因突变。烟草中的主要致癌物质苯并芘引起p53基因 5 CpG(5 胞嘧啶磷酸鸟苷 )

慢阻肺家庭护理6要点

慢性阻塞性肺疾病（COPD）与过去所说的肺气肿很相近.COPD临床表现为慢性进展的呼吸困难,多数是慢性支气管炎的结果,又是肺心病、呼吸衰竭的病因.

38例肺肉瘤样癌临床特点及预后的回溯性分析

背景与目的肺肉瘤样癌(pulmonary sarcomatoid carcinoma,PSC)是一种罕见的肺部恶性肿瘤,属于非小细胞癌。但因其发病率低,目前治疗方法尚无定论。本研究旨在探讨PSC的临床特点、诊断标准、治疗方法及预后,为临床诊治提供一定依据。方法回顾性分析2000年1月-2013年12月在我院治疗的38例肺肉瘤样癌患者的一般临床资料、吸烟史、临床表现、肿瘤大小、TNM分期、病理与免疫组化结果、诊断方法、治疗方法及预后。使用SPSS 19.0统计软件对结果进行分析,生存期使用Kaplan-Meier法进行分析。结果本组患者年龄26岁-76岁(中位年龄57.5岁),男女比例约为4:1,81.6%的患者有长期大量吸烟史。咳嗽和咯血是最常见的首发症状。全部患者的中位生存期为21个月。1年、3年、5年累计生存率分别为68.4%、31.6%和18.4%。肿瘤大小、TNM分期、肿瘤是否发生远处转移及是否进行手术与患者的预后相关。结论肺肉瘤样癌临床表现无特殊,影响肺肉瘤样癌预后的主要因素有:肿瘤大小、TNM分期、肿瘤是否发生远处转移及是否进行手术。目前,手术根治切除是治疗PSC的关键,其放化疗的综合治疗方式与配伍还需开展更多循证医学的探索。生物靶向药物可为PSC患者的治疗提供新的方向。

侵袭性肺真菌感染的临床与病原学分析

目的探讨侵袭性肺真菌感染的流行病学特点、易患因素、影像学特征、诊断、治疗和预后。方法应用回顾性调查的方法对2005年1月至2012年2月非重症监护室经病理诊断为肺真菌病患者90例进行分析。结果 90例患者中,病原体分布占前4位的为曲霉、隐球菌、毛霉菌、组织胞浆菌,所占比例分别为62.2%、20.0%、6.7%及6.7%。其中96.7%(87/90)的病例患有基础疾病,以慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肺结核、糖尿病多见。肺部真菌感染的临床症状以咳嗽(74.4%)、咳痰(41.1%)多见,但不具有特异性。最常见的危险因素为长期使用广谱抗生素(54.4%)。胸部影像学表现有肿块型25例(27.8%)、结节型15例(16.7%)、肺炎型22例(24.4%)、空洞型22例(24.4%)、曲霉球型6例(6.7%)。病理检查前临床诊断为侵袭性肺真菌感染的47例,其余43例活检前均初诊为其他疾病,初诊符合率为52.2%。31例(34.4%)经外科手术切除,随访2年均无复发;56例(62.2%)经抗真菌治疗,出院时43例(76.8%)痊愈或好转,3例(5.4%)无变化,10例(17.8%)死亡,3例(3.3%)拒绝任何治疗。结论侵袭性肺真菌感染以肺曲霉病多见,最常见的基础疾病为COPD、肺结核、糖尿病。长期使用广谱抗生素可能是常见诱因。确诊有赖于病理学依据,采用外科手术治疗的患者预后最佳。

EGCG和金克槐耳对非小细胞肺癌患者Th1/Th2细胞的免疫调节作用

背景与目的探讨金克槐耳多糖蛋白(PS-T)和绿茶中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对非小细胞肺癌患者Th1/Th2细胞的免疫反应状态的调节作用。方法本研究采用ELISA法检测槐耳多糖蛋白和EGCG干预淋巴细胞培养后上清液中的Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4的表达水平的改变,并采用免疫细胞化学法检测槐耳多糖蛋白和EGCG干预淋巴细胞培养后Thl型细胞和Th2型细胞的比例的改变。结果肺癌患者的Thl/Th2细胞免疫平衡偏向以Th2细胞免疫占优势的免疫应答(P<0.01),金克槐耳多糖蛋白和EGCG均能逆转Th1/Th2的异常漂移(P<0.01),且呈剂量依赖关系,金克槐耳多糖蛋白和EGCG两药联合对纠正非小细胞肺癌患者Th1/Th2的异常漂移有相加作用(P<0.05)。结论金克槐耳多糖蛋白和EGCG辅助治疗可改善Ⅲ-Ⅳ期非小细胞肺癌病人T细胞的免疫功能,作为非小细胞肺癌综合治疗措施之一。

1997年和2007年湖南地区908例原发性肺癌临床流行病学及病理特征的比较分析

背景与目的肺癌的流行病学特征通常随时间和地区的变化而变化,此研究拟通过比较分析1997年和2007年湖南地区908例肺癌新发病例性别、年龄、城乡来源、吸烟史以及病理类型的差异,以初步了解近年来湖南地区肺癌的流行趋势。方法收集湘雅医院1997年和2007年收住的、祖居或长期居住湖南地区的908例初诊肺癌患者的临床资料并进行统计学分析。结果与1997年相比,2007年肺癌患者的男女比例由3.8:1降至2.98:1,青年肺癌患者由4.4%升至8.6%(χ2=4.465,P=0.035),农村肺癌患者由19.9%升至40.1%(χ2=30.670,P<0.001),农村肺癌患者中的吸烟者由16.9%升至39.9%(χ2=24.939,P<0.01),少见病理类型肺癌由1.3%升至4.5%(χ2=5.142,P=0.023)。结论近年来湖南地区女性、青年、农村肺癌患者以及少见病理类型肺癌比例可能有增加趋势,戒烟教育亟待加强。

ERCC1、RRM1表达对肺癌患者术后吉西他滨联合顺铂化疗生存趋势的影响

背景与目的肺癌化疗疗效与肿瘤的基因表达有关,本研究拟探讨ERCC1、RRM1表达与非小细胞肺癌术后吉西他滨联合顺铂(GP)辅助化疗预后的关系。方法随访57例临床Ⅱ-Ⅳ期接受手术治疗的非小细胞肺癌患者,其中术后接受2周期以上化疗者39例(化疗组),未化疗者18例(未化疗组)。采用免疫组化法检测ERCC1、RRM1表达,Cox回归分析筛选影响预后的独立危险因子,Kaplan-Meier生存曲线分析比较各组患者的中位生存时间。结果Cox回归分析显示手术彻底程度、术后辅助化疗与否、ERCC1表达水平为影响术后生存时间的独立危险因子。ERCC1低表达组中化疗组和未化疗组中位生存期分别为23个月和21个月(P=0.088),ERCC1高表达组中化疗组和未化疗组中位生存期分别为42个月和12个月(P=0.018)。RRM1低表达组中化疗组和未化疗组中位生存期分别为42个月和22个月(P=0.010),RRM1高表达组中化疗组和未化疗组中位生存期分别为28个月和21个月(P=0.092)。结论ERCC1高表达、RRM1低表达的非小细胞肺癌患者更能从术后吉西他滨联合顺铂的化疗中受益。

硝酸甘油扩张浅静脉的临床应用研究

为解决临床上因病人血管状态不佳导致的静脉穿刺困难，采用００１％的硝酸甘油扩张手背浅静脉。结果示：外涂药物２ｍｉｎ以内，受试者血管直径明显增宽（Ｐ＜００１），且效果较６５４２更佳，显效率达９３８％。对临床上４０例因血管条件不佳常规穿刺失败者，实施该方法后再行穿刺，一次成功的３５例，重复给药后成功的４例，总有效率达９７５％，应用中未发现不良反应。表明硝酸甘油外涂在解决临床静脉穿刺困难方面有较好的应用价值。

微波辐射ELISA法快速检测乙肝五项指标

为提高检测速度，缩短酶联免疫反应时间，并能有效地避免ＥＬＩＳＡ一步法检测乙肝五项指标时高浓度的ＨＢｓＡｇ和抗一ＨＢＣ出现的假阴性。利用微波能加速分子间运动的原理，将酶联免疫反应过程用微波辐射２５－３０ｓ，其余操作与ＥＬＩＳＡ一步法同。对ＩＳｇ／ｍｌ和２ｎｇ／ｍｌ的ＨＢＳＡｇ定值质控品分别用微波ＥＬＩＳＡ法和ＥＬＩＳＡ一步法重复２０次测定，其结果ＯＤ值经重检验无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；对ＥＮＳＡ一步法检测为假阴性的高浓度的ＨＢｓＡｇ和抗一ＨＢｃ血清标本各２０份，用微波法检测均为阳性；１０４９份临床标本两法检测结果符合率为９７．７％。微波ＥＬＩＳＡ法检测乙肝五项指标快速、方便，且能有效地避免高浓度的ＨＢＳＡｇ和抗一ＨＢｃ出现的假阴性，具有实用价值。

关于物理演示走廊的一些思考和实践

对物理走廊演示区的提出和存在问题进行了探讨 ,并介绍了北京航空航天大学物理走廊演示区的特点、效果和前景 。

支气管镜在青少年肺癌诊断中的应用

目的:探讨青少年肺癌患者的支气管镜下改变与其临床表现、病理分型等的关系。方法:回顾性分析32例经支气管镜检查取材确诊的<25岁肺癌患者的临床资料。结果:镜下以新生物及黏膜浸润改变等直接征象为主;病理分型以鳞状细胞癌最多,其次为小细胞癌,腺癌;病变部位以右中叶居多,其次为左主、左下支气管。结论:青少年肺癌临床上容易漏诊和误诊,支气管镜是其重要诊断手段。

甲状腺癌p53基因外显子5～8序列分析

目的 :了解甲状腺癌与 p5 3基因突变的关系。方法 :用聚合酶链式反应 -双链DNA直接测序方法对甲状腺癌标本进行 p5 3基因外显子 5 ,6 ,7,8序列分析 ,共检测甲状腺癌活检组织标本 2 5例 ,石蜡包埋组织标本 16例 ,正常人外周血标本 31例。结果 :正常人外周血标本未发现 p5 3基因突变 ,43例甲状腺癌标本发现p5 3基因外显子 8点突变 11例 ,外显子 7点突变 2例 ,缺失 3个bp1例。总阳性率达 34 15 %。其中位于外显子 8上的第 2 73位密码子突变 7例 ,占突变的 5 0 % ,最多见。结论 :p5 3基因外显子 7和 8突变在甲状腺癌组织细胞中较常见 ,特异性好 ,提示p5 3基因外显子 7。

非小细胞肺癌与p53基因序列分析

目的：研究非小细胞肺癌与ｐ５３基因突变的关系。方法：采用聚合酶链式反应和ＤＮＡ双链直接测序方法对３７例非小细胞肺癌组织标本进行Ｐ５３基因外显子５，６，７，８序列分析。结果：１５例突变，总突变率为４０．５４％。分别为２３７，２４３位密码子突变各１例，２８５位密码子突变２例，２７３位密码子突变的７例，另有４例标本同时存在第２５２和２５４位两个密码子突变为ＴＴＣ，这种突变方式尚未见报道。存在突变的１５例患者中１３例在一年内死亡，无突变２２例中只有１０例患者在一年内死亡，存在ｐ５３突变的肺癌近期死亡率明显升高（Ｐ＜０．０１）。结论：非小细胞肺癌与ｐ５３基因突变密切相关，突变的方式在不同人群中有所不同，ｐ５３基因测序在肺癌诊断和判断预后等方面有一定的参考价值。

口腔鳞癌K-ras基因测序分析及p21^(ras)蛋白的表达

目的:探讨K-ras基因在口腔鳞癌中的序列改变和p21ras蛋白的表达。方法:采用聚合酶链反应直接测序检测口腔鳞癌K-ras基因外显子1、2突变,免疫组织化学法检测口腔鳞癌组织、癌旁正常组织p21蛋白的表达。结果:30例口腔鳞癌中4例(13.3%)存在K-ras基因突变,突变方式为C→T转换,突变位点在第6位和第79位密码子,口腔鳞癌组织p21ras蛋白阳性率为73.3%(22/30),高于癌旁正常组织20%(6/30)。结论:口腔鳞癌中K-ras基因的突变谱较广,K-ras基因突变和p21蛋白表达与口腔鳞癌发生发展有关。