293T细胞生产慢病毒工艺优化

随着细胞治疗的快速发展,大规模慢病毒的生产成为工艺环节中的瓶颈,因此,优化293T高滴度和高纯度的CAR慢病毒载体生产工艺显得至关重要。本研究旨在优化包装慢病毒的293T贴壁细胞,节省时间,节约成本,提高慢病毒包装的能力。同时对优化慢病毒载体中出现悬浮细胞结团生长的现象进行探索,检测其影响结团的因素。分别采用快速、慢速驯化方式将293T贴壁细胞驯化为悬浮培养,并比较其细胞形态、细胞密度、细胞活率、慢病毒包装能力和冻存复苏后稳定一致性,筛选出最优的悬浮驯化条件。通过调节Ca^(2+)浓度和EDTA添加量来研究比较细胞结团生长状况。结果证明,使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂(medium)可以将293T贴壁细胞快速驯化为293T悬浮细胞,并能制备出慢病毒滴度且优于贴壁细胞的包装滴度(^(*)P<0.05)。Ca^(2+)浓度会影响细胞结团大小,添加EDTA能有效分离分散非必要的细胞抱团生长。研究结果显示,传统293T贴壁细胞可以使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂快速驯化成悬浮细胞;在一定范围内,Ca^(2+)浓度越高细胞所结团块及粒径越大,EDTA添加量越高细胞所结团块及粒径变小。这为优化慢病毒载体包装工艺和悬浮培养条件,同时为体外规模化细胞培养放大和生产奠定了理论基础,具有一定的实用价值。

内外有别 顺其自然——外国专家看中国地方政府网站

对于中国各级政府来讲,如何有效地在互联网空间传播政府形象是一个新课题。以2011年的中国形象宣传片为例,根据相关调查,该宣传片基本达到了预期的目的,扩大了中国的影响力,也吸引了国际社会的关注,对改善和提高中国国际形象有很大的帮助。

溶菌酶LyAa在黑曲霉中的高效表达与酶学性质分析

该研究探讨了将嗜碱顶孢霉中的GH25溶菌酶基因进行密码子优化后,构建包含糖化酶信号肽的溶菌酶单拷贝和双拷贝表达载体并均由启动子PnaⅡ控制表达,利用双拷贝表达载体和CRISPR/Cas9基因编辑工具,使用PEG介导法转化无孢黑曲霉宿主HL-1,获得高酶活力的溶菌酶表达菌株。重组菌株LyAa-C的溶菌酶活力达到2291.37 U/mL,是仅使用双拷贝表达载体的LyAa-F菌株酶活力(869.74 U/mL)的2.63倍,是仅使用传统单拷贝表达载体的LyAa-T菌株酶活力(358.41 U/mL)的6.39倍。通过6×His标签使用镍柱亲和层析成功纯化了重组溶菌酶LyAa,并对其酶学性质进行了分析。溶菌酶LyAa蛋白大小约为25.0 ku,最适pH值为4.0,最适温度为30℃,并显示出良好的胃蛋白酶稳定性。综上,该研究基于双拷贝载体和CRISPR技术成功优化和提高了溶菌酶在黑曲霉中的表达。

激光衍射微小尺寸自相关测定技术

采用衍射图样—自相关测定技术测量缝宽尺寸是一个极为有效的测量方法,其测量范围为2～50μm。本文提出的新的图样处理方法,使自相关技术能应用于非接触,实时的在线微小尺寸的测量.

活体生物发光肺癌骨转移模型构建及其生物学特性

在全世界范围内,肺癌一直是恶性肿瘤死亡的主要原因之一.肺癌容易复发和转移,其中骨转移是其常见的转移方式.将稳转Luciferase和GFP编码基因的A549细胞接种入胫骨内,第7天生物发光成像检测到胫骨腔内明显肿瘤生长信号.随着时间延长小鼠呈现明显的类似晚期癌症患者的恶液质现象,并伴随持续性疼痛和触觉疼痛.HE染色显示骨髓腔及骨小梁间被大量肿瘤细胞填充,骨髓腔和骨质结构破坏严重.骨肿瘤组织中肿瘤转移相关基因Mta1、Mta3高表达.上述结果表明,构建的骨转移模型具有人体肺癌骨转移相似的生物学特性及病理学表现,可用于开展肺癌骨转移相关机制研究、筛选开发抗肿瘤药物.此肺癌骨转移模型可以多时间点、动态地观测活体肿瘤病灶的生长情况,具有极高的检测灵敏度和非常高的医学应用价值.

胫骨高位截骨术治疗膝骨关节炎合并半月板损伤

目的探讨胫骨高位截骨术(HTO)治疗膝骨关节炎合并半月板损伤的疗效。方法采用HTO治疗6例膝骨关节炎合并半月板损伤患者。记录手术时间、术中出血量、术后引流量、住院时间。采用疼痛VAS评分、Lysholm评分、HSS评分、Tegner评分及健康状况SF-36评分评价临床疗效。结果患者均获得随访,时间19~33(29.00±5.09)个月。手术时间150~230(181.17±35.01)min,术中出血量100~150(133.33±25.82)ml,术后引流量160~210(175.00±18.71)ml,住院时间9~14(12.17±1.83)d。术后12周胫骨截骨处均基本愈合。疼痛VAS评分、Lysholm评分、HSS评分、Tegner评分及健康状况SF-36评分中各维度评分:术后3、6、12个月均明显优于术前(P<0.01);术后各时间点比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论HTO治疗膝骨关节炎合并半月板损伤,能有效改善下肢力线,缓解膝关节疼痛,同时能获得较好的下肢力线矫正维持效果,截骨处愈合良好,患者可早期下床活动,短期疗效满意。

不同信号肽对嵌合抗原受体T细胞杀伤作用的影响研究

背景与目的:信号肽(signal peptide,SP)是一段存在于前体蛋白N-端的短肽链,能够调节前体蛋白的折叠和转移,在蛋白质的分泌过程中扮演着极其重要的角色。近年来,靶向CD19的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞在白血病治疗中取得了重大突破,关于CAR结构的胞内域改造方面也有诸多研究,而对单链可变片段(scFv)的N端SP研究进展缓慢。探讨4种不同SP的CD19-CAR在T细胞表面表达及对CD19+靶细胞的杀伤作用。方法:通过基因合成和分子克隆技术,构建含4种不同SP(SP1、SP2、SP3、SP4)的靶向CD19抗原的CAR载体,进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染T细胞,利用流式细胞术检测细胞转染效率,采用钙黄绿素释放法检测该细胞对靶细胞的杀伤作用,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌水平。结果:成功构建4种不同SP的重组慢病毒载体,将4种慢病毒转导T细胞后,结果显示,分别有20.9%、22.6%、31.5%、38.6%的T细胞表面能够表达CD19-CAR(分别命名为SP1-CD19、SP2-CD19、SP3-CD19和SP4-CD19细胞),进一步杀瘤实验证明,SP4-CD19细胞对CD19+肿瘤细胞的杀伤作用显著高于SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞(P<0.01),并且当效靶比为10∶1共培养24 h后,与SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞相比,SP4-CD19细胞的IFN-γ和TNF-α的分泌水平显著升高(P<0.05)。此外,4种不同SP的CAR-T对CD19-肿瘤细胞K562的杀伤作用差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SP4-CD19细胞的转染效率、细胞因子分泌水平及对CD19+肿瘤细胞的杀伤作用均显著高于SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞,该研究成果为CAR-T优化改造及其高效的临床应用奠定了科学基础。

跨文化交际研究:互动与适应

能生活在这个全球联系日益紧密的时代,我感到无比幸运.我在美国堪萨斯的一个小镇长大,从未想到过有朝一日能见证中国的改革开放和与世界各国频繁密切的跨文化互动.跨文化交际作为一门学科创立于20世纪70年代中期,首先在美国和日本得到发展,以后传播到世界其他地区,80年代中期传入中国,当时我正在厦门大学学习汉语.

机械搅拌式生物反应器悬浮培养293T细胞生产慢病毒的工艺

采用L型大泡通气系统机械搅拌式生物反应器培养293T悬浮细胞和规模化生产慢病毒载体,通过4种方法驯化293T悬浮细胞,对其慢病毒包装能力进行验证,并建立种子扩增链,在5.5 L工作体积生物反应器中绘制悬浮细胞生长曲线和包装慢病毒。结果表明,采用体积分数50%的293 CD05 Medium无血清基础培养基和体积分数50%的SMM293-TⅡ培养基可以快速驯化293T细胞,成功得到野生型且具有慢病毒包装能力的悬浮细胞系。悬浮细胞在机械搅拌式生物反应器培养,2 d细胞密度可达1.5×106个·mL^(-1)。添加质粒复合物和补料培养基,培养4 d可以收获6.5×107 TU·mL^(-1)滴度的慢病毒粗产品,相比细胞工厂的滴度提高34倍。

国际跨文化能力研究:现状与展望

本研究以1986—2023年间SSCI和A&HCI收录的跨文化能力研究论文为数据来源,借助文献可视化工具VOSviewer梳理了国际跨文化能力研究的发文状况、共被引网络和研究主题。结果显示,研究论文数量总体呈递增趋势,主要发表于跨文化、语言学、教育学等领域的期刊。研究主题聚焦涵化、语言教育、教育国际化、医护教育等不同情境下的跨文化能力模型构建、跨文化能力量表开发、跨文化能力测评与跨文化能力培养。研究进而展望了我国学者可以拓展的领域,以期为跨文化能力研究的纵深发展提供借鉴。

胃癌患者血浆胃促生长素浓度对术后并发症及营养状况的预测价值

目的探讨胃癌患者神经内分泌功能对术后并发症及营养状况的影响。方法回顾性分析2021年8月至2022年6月在苏州大学第一附属医院普外科接受胃癌根治术的102例胃癌患者的临床资料。结果102例胃癌患者中,18例(17.6%)发生了术后并发症。单因素分析结果显示年龄、BMI、术前血浆胃促生长素浓度、术前血红蛋白量与胃癌根治术后早期并发症有关。多因素分析结果显示年龄、BMI、术前血浆胃促生长素浓度是胃癌患者术后并发症发生的独立危险因素(P<0.05)。胃促生长素浓度的差异性分析显示胃促生长素浓度和患者血红蛋白量、骨骼肌指数(SMI)、白蛋白和肌酐相关,且和SMI呈正相关。结论胃癌患者术前神经内分泌激素胃促生长素浓度降低是术后并发症的独立危险因素,胃促生长素浓度与胃癌患者的SMI相关。

我国30年跨文化交际/传播教材的分析性评估(1985—2014)

本文采用内容分析法对1985至2014年30年间我国出版的122部跨文化交际/传播教材进行梳理和归类,系统考察教材的主题内容、性质和价值定位。研究结果表明:(1)国内跨文化研究广度不断拓展,多学科性日益凸显;(2)跨文化理论研究不足,研究方法有待改进;(3)理论与实践结合应成为未来跨文化交际/传播教学与研究的重点。

外语教学与跨文化交际能力培养:模型建构二十年

国内跨文化交际能力建构的研究始于1994年,至今已有20个年头。在此期间,共有20个公开发表的文献建构了跨文化交际能力模型。笔者对建构这些模型的目的、方法和主要理论来源以及模型的构成进行了分析,得出以下结论:第一,我国跨文化交际能力模型建构具有跨学科性和多样性;第二,现有模型有助于我们多层次地研究跨文化交际能力,也有助于我们在外语教学中对跨文化交际能力培养进行定位;第三,现有模型结构的单一性源于相对狭窄的理论来源和薄弱的实证、实践基础。

从传统课程到慕课的重塑--以《跨文化交际》课程为例

文章以某外国语大学跨文化研究中心教学团队在英国FutureLearn平台上开设的《跨文化交际》慕课为例,分享了团队在教学设计与制作方面的实践和经验,并对课程进行了定量、定性评估。最后探讨了慕课形式对"跨文化交际学科"发展的推动作用,以及服务国家长远教育战略目标的意义。

当今跨文化交际研究中的文化悖论

经济全球化带来了文化的变迁和融合,对学界现有文化观进行反思已成为必要。以"文化等同于国家"和"文化对个体行为具有决定性影响"为主要特征的固定特质观在当今跨文化交际学领域根深蒂固,可谓是一个文化悖论。为了使跨文化交际研究更加契合当今的经济全球化趋势,本文对固定特质观进行系统的批判和分析,揭示其历史渊源、本质特征、内在缺陷和功能范围,并提出在跨文化交际研究中融入动态过程观的主张,试图实现对文化悖论的超越。

语言杂糅与文化杂糅:跨文化交际研究新视角

语言和文化在全球范围内流动,使得语言文化杂糅成为常态,文化身份呈多元化趋势。以先验性文化差异为前设的跨文化交际研究,有必要借助杂糅这一理论建构来拓展研究思路,使研究更加贴近现实。本文尝试从语言、文化和认同三个方面,介绍杂糅这一概念的基本含义及相关学术话语,指出杂糅这一概念对跨文化交际研究带来的挑战,并介绍学界针对上述挑战做出的回应。笔者希望通过上述讨论,为今后有关杂糅与跨文化交际的研究做一些理论铺垫。

“真实与想象”的家园:《桑青与桃红》和《茉莉》的第三空间

著名华裔作家聂华苓的《桑青与桃红》和印裔作家巴拉迪·穆克吉的《茉莉》中的女性离散叙述和寻找家园经历如此相似和凝重,让人不得不重新审视这两部小说的寓意和离散女性的生存困境。两位边缘女性在流放旅途中不断变换自我,以适应周遭环境,并寻找她们的新家园。在"真实与想象"之间的第三空间为她们提供了第三种选择。第三空间是一个融合点,杂糅之地,是边缘群体在逃离旧的家园建立新关系的开放空间。小说中的离散女性在流放中的错位记忆,杂糅身份选择以及孕育新生命等行为,都是她们在第三空间重建自己家园的策略。