猪戊型肝炎病毒ORF3蛋白影响HepG2细胞核黄素代谢的lncRNA-mRNA调控网络的鉴定

为初步鉴定并挖掘出猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)ORF3蛋白影响HepG2细胞核黄素代谢信号通路的lncRNA-mRNA调控网络,本试验通过构建腺病毒过表达载体,制备高滴度过表达腺病毒,介导猪HEV-ORF3在HepG2细胞中实现过表达。Western blotting检测ORF3蛋白过表达成功后,运用lncRNA高通量组学测序,筛选出差异表达的lncRNA并进行靶向差异基因预测,对lncRNA靶向差异基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,初步鉴定出与核黄素代谢信号通路相关的lncRNA-mRNA调控网络。Western blotting结果显示,在约为12 ku处出现目的条带,说明成功实现腺病毒介导猪HEV-ORF3在HepG2细胞中过表达。lncRNA高通量组学测序结果显示,共发现102个显著差异表达lncRNAs表达量上调,80个显著差异表达lncRNAs表达量下调。GO功能和KEGG通路富集分析显示,初步挖掘出lncRNA(MSTRG.13995.2)和lncRNA(MSTRG.1960.1)可能是与核黄素代谢信号通路相关的显著差异表达lncRNA,分别通过顺式调控其靶向基因APC-5和FLAD1来影响核黄素代谢信号通路。本试验初步鉴定出lncRNA(MSTRG.13995.2)-APC5和lncRNA(MSTRG.1960.1)-FLAD1可能是影响HepG2细胞核黄素代谢信号通路的lncRNA-mRNA调控网络。

髓样分化蛋白-2研究进展

髓样分化蛋白-2(Myeloid differentiation protein-2,MD-2)是一种分子量为20~30 kD的分泌蛋白,它结合在Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)胞外区,能与TLR4组成复合体(MD-2/TLR4),在细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的识别及其信号转导中发挥重要作用,MD-2也是目前炎症、感染、免疫等病理过程研究的热点之一。本文对MD-2基因结构、基因表达及MD-2与机体天然免疫等方面研究结果进行综述,以期阐释MD-2的基因与天然免疫的关系,为揭示MD-2基因的功能提供技术参考。

布鲁菌介导细胞自噬的研究进展

布鲁菌是布鲁菌病的病原体,在世界范围内给养殖业带来巨大损失。自噬是细胞的一种代谢方式,细胞在自噬相关基因的调控下清除细胞内病原微生物和吞噬降解受损、衰老细胞器及大分子物质,以维持机体内环境平衡。布鲁菌入侵细胞后,能够诱发细胞自噬,而这一复杂的过程需要很多细胞因子的参与,探究布鲁菌引发的细胞自噬已成为揭示布鲁菌致病机制的新热点,现就这一新热点的研究进展进行综述。

羊种布鲁杆菌介导的mmu-miR-149-3p靶基因的初步鉴定

布鲁杆菌病是由布氏杆菌(Brucella)引起的一种急性或慢性人兽共患传染病,在我国,羊种布鲁杆菌(Brucella melitensis,B.melitensis)最为流行。前期研究发现,mmu-miR-149-3p的潜在靶基因有10个,分别为:Bcl6b、Nos2、Slc7a11、Olr1、Ikbke、Slc31a2、IL1rl1、Dusp16、Ifit1和Rhoc。本试验通过X-treme Gene高效转染试剂,分别将5,50和100 nmol/L,Cy3标记的mimics转染至RAW264.7细胞24 h后,流式细胞仪分析,筛选出最佳转染mimics的浓度;并将mmu-miR-149-3p mimics与mmu-miR-NC mimics,按照最佳转染浓度,转染至RAW264.7细胞24 h后,加入TRIzol裂解细胞,提取总RNA,转录组获得cDNA;利用NCBI primer设计mmu-miR-149-3p的10个潜在靶基因的特异性引物,运用qRT-PCR方法,进行验证试验。结果发现,转染Cy3标记的mimics最佳浓度为100 nmol/L,其阳性率为49.94%,平均荧光强度为18.74;与mmu-miR-NC mimics转染组相比,在mmu-miR-149-3p mimics转染组中,Olr1、Slc7a11和IL1rl1的相对表达量显著降低。结果初步表明,mmu-miR-149-3p的靶基因为Olr1、Slc7a11和IL1rl1。这为揭示mmu-miR-149-3p在B.melitensis侵染巨噬细胞过程中的功能奠定了基础,还为进一步阐释B.melitensis的感染机制以及防控布病提供了参考。

绵羊种布鲁菌致病机制与防控研究进展

布鲁菌病(Brucellosis)是一种高度流行的人畜共患传染病,可造成巨大的经济损失,严重制约了当今畜牧业的发展并对人类健康构成了严重威胁。绵羊种布鲁菌病是由绵羊种布鲁菌(Brucella ovis,B.ovis)引起的一种以绵羊生殖系统功能障碍和怀孕绵羊流产为特征的慢性传染性疾病。目前,对于绵羊种布鲁菌的胞内寄生机制和感染机制尚不清楚,现将从病原学、流行病学、致病机制和疾病防控等方面对绵羊种布鲁菌病的研究进展进行概述,为后期挖掘绵羊种布鲁菌的致病机理和与其相关的研究奠定一定的理论基础。