瞬时受体电位通道7参与匹鲁卡品诱导的癫痫体外模型凋亡的调控

目的探讨瞬时受体电位通道7(TRPM7)在癫痫中与凋亡的关系。方法采用CCK-8法检测匹鲁卡品(PILO)对Neuro-2A细胞活性的影响;设置对照组和PILO模型组,采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和细胞色素C蛋白(Cyt C)的表达;采用实时荧光定量PCR法检测TRPM7 mRNA的表达;设置对照组(Neuro-2A细胞转染无序siRNA序列)、PILO模型组(Neuro-2A细胞转染无序siRNA序列后经PILO处理24 h)和PILO+siRNA组(Neuro-2A细胞转染TRPM7 siRNA序列后经PILO处理24 h),采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白表达;采用TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果Neuro-2A细胞活性随PILO浓度升高而降低;与正常对照组相比,模型组凋亡相关蛋白caspase-3、Bax、Cyt C和TRPM7 mRNA在24 h时表达明显增加(均P<0.05);与PILO模型组相比,PILO+siRNA组凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Cyt C表达和细胞凋亡率明显减少(均P<0.05)。结论TRPM7参与PILO诱导的癫痫体外模型的凋亡。

Nrf2参与CaMKII抑制引起的神经细胞毒性作用

目的探讨Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)的特异性抑制剂KN93对神经细胞的作用及其与Nrf2通路之间的关系。方法培养小鼠脑神经瘤细胞N2a,CCK8检测确定给药12h后KN93对细胞的毒性作用与浓度的相关性;应用5μmolKN93给药12h后进行荧光NeuN染色,检测细胞存活率;应用ELISA试剂盒检测KN93对炎症因子TNF-α、IL-1β表达的影响;Westernblot检测给药KN93后Nrf2蛋白表达的变化;ELISA试剂盒检测KN93与Nrf2拮抗剂ML385同时处理时,炎症相关因子TNF-α、IL-1β表达的变化。结果与对照组相比,5μmol KN93给药12h后,KN93给药组中NeuN染色的阳性细胞明显减少;TNF-α和IL-1β表达明显增加;Nrf2蛋白表达显著增加;与KN93给药组相比,KN93和Nrf2拮抗剂ML385同时处理组炎症相关蛋白表达下降,即Nrf2的抑制剂ML385能逆转KN93诱发的炎症反应。结论Nrf2通过诱发炎性反应,参与CaMKII的抑制剂KN93引起的神经细胞毒性作用。