肠炎沙门氏菌SEF14菌毛的表达及其对该菌的特异性检测研究

为获得肠炎沙门氏菌SEF14菌毛蛋白并检测其生物学功能,本研究以肠炎沙门氏菌标准株SE50336为模板,PCR扩增其含分泌信号肽的sef14操纵子基因片段,并克隆至表达载体pBR322中,构建重组质粒pBR322-sef14,将该重组质粒转化至经修饰且不含任何菌毛的大肠杆菌SE5000M株中,获得重组菌pBR322-sef14/SE5000M。将重组菌pBR322-sef14/SE5000M与本实验室制备的SefA(SEF14菌毛的主要亚基)单克隆抗体(MAb)凝集;利用透射电镜和免疫电镜观察上述重组菌并通过SDS-PAGE和western blot鉴定,利用该重组菌pBR322-sef14/SE5000M与肠炎沙门氏菌阳性鸡血清及其他菌的阳性鸡血清结合。结果显示,本实验室制备的SefA MAb能够特异性识别该重组菌,并产生明显的肉眼可见的凝集反应。重组菌表达的SEF14菌毛产物大小约为14.3 ku,与菌毛的主要亚基SefA的大小一致,电镜观察到重组菌表面有明显的菌毛结构。在肠炎沙门氏菌特异性靶向检测中,该重组菌表达的菌毛蛋白仅与肠炎沙门氏菌阳性鸡血清反应,能够在2 min内用肉眼观察到清晰的凝集颗粒,而不与鸡白痢、鸡伤寒、鼠伤寒沙门氏菌阳性鸡血清反应。本研究首次克隆了肠炎沙门氏菌sef14操纵子基因并在体外成功表达并进行了功能鉴定,上述研究结果为进一步研究SEF14菌毛及建立特异性诊断技术提供基础。

浅谈高中数学的解题技巧

数学问题千变万化,如果要想既快又准地解题,就需要找到适合自己的学习方法,了解清楚数学解题技巧,必须要有思维的变通性,在教学过程中,巩固基础知识的同时更重要的是要培养良好的解题技巧,培养自我学习的能力.

高中数学应用题解题训练策略浅探

在高中数学教学中,学生面对应用题往往存在畏惧心理.为了解决这种问题,广大数学教师在进行应用题训练时,要采用恰当的教学方法,引导学生掌握应用题的解题步骤、思路,培养学生的审题能力,提高学生解题能力.

肠炎沙门菌sef14基因缺失株生物学功能

构建了肠炎沙门菌参考株SE50336的SefA主要亚单位编码基因sefA的缺失株SE50336ΔsefA,进一步探究野生株及SEF14菌毛缺失株的生物学功能。以SE50336为模板,利用λ-red同源重组技术构建sefA缺失株,通过绘制生长曲线、生物被膜测定试验、刚果红-考马斯亮蓝无盐培养基菌落表型试验、RT-qPCR(real-time quantitative polymerase chain reaction)、人结肠腺癌上皮细胞(Caco-2)的体外黏附测定来检测和比较2种菌株的生物学特性,并利用野生株和缺失株分别攻毒小鼠,探究SEF14菌毛对肠炎沙门菌致病力的影响。结果显示,野生株及缺失株生长情况无明显差异。与野生株相比,ΔsefA缺失株的生物被膜形成能力有所下降;菌落表型试验中野生株表现出典型的rdar(red,dry and rough)表型,而ΔsefA缺失株表现出saw(smooth and white)表型;RT-qPCR试验中,野生株的生物被膜形成主要关联基因csgA、bcsA、pgaC、fimA的转录量均显著高于ΔsefA缺失株。但缺失株与野生株对于Caco-2上皮细胞的黏附差异不显著(P=0.41)。小鼠体内致病性试验显示,野生株的LD;(10 CFU)显著低于缺失株(17.78 CFU),表明sefA亚单位编码基因缺失株减弱了肠炎沙门菌对BALB/c小鼠的毒力。上述数据和试验结果为进一步研究SEF14菌毛的生物学功能及其致病性提供了基础。

谈谈高三数学复习阶段回归课本的意义

本文尝试揭示高考试题与课本例题、习题之间的生成关系,并充分挖掘二者联系,以期广大师生在高三复习中能够重新回归课本,以本为本,理解数学本质,提高教学效率,帮助学生脱离题海,取得更好的高考成绩.

肠上皮细胞在动物肠黏膜免疫调节中的功能

肠上皮屏障包括柱状上皮细胞、杯状细胞、潘氏细胞、肠内分泌细胞、簇状细胞、M细胞以及其他细胞群,这些细胞群与肠道黏膜免疫密切相关,对保护肠道内环境的稳态至关重要。本研究总结肠上皮细胞的功能及其与肠黏膜免疫系统的关系,包括上皮间充质细胞、免疫细胞和肠道菌群之间的相互作用,以及它们在共同维持肠道内环境稳态中扮演的角色,以期为进一步认识肠上皮细胞在肠黏膜免疫中的功能,探索动物肠道疾病治疗新思路提供帮助。