人骨髓细胞体外长期培养基质层细胞的分类及其变化

人骨髓细胞体外长期培养基质层细胞按其核浆、形态特征分为四类：ＡＣ１最大，有数个明显核仁，胞浆呈薄纱状；ＡＣ２与巨噬细胞类似，核小深染，胞内有吞噬物；ＡＣ３最显著的特征是胞浆内广泛分布的脂质空泡；ＡＣ４最小，核大深染，胞浆少。从培养第４周至第８周，ＡＣ１及ＡＣ２分别从２１．７５％、３１．２５％上升至４０．５％、５５％；ＡＣ３及ＡＣ４分别从３１％、１５．５％降至１．５％、３％。碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）法检测细胞表面抗原，可见ＡＣ１纤维联结蛋白阳性，ＡＣ２的ＣＤ６８强阳性，ＡＣ３的纤维联结蛋白弱阳性，ＡＣ４的上两种单抗及因子ＶＩＩＩ相关活性抗原均标记阴性。本实验结果可作为一个参考值，衡量在各种实验条件下基质层细胞组成的变化。

阿糖胞苷对人骨髓细胞长期培养的影响

人骨髓细胞长期培养（ＬＴＨＭＣ）加入３５μｇ／ｍｌ阿糖胞苷并孵育１小时后中止，然后继续培养。４周龄ＬＴＨＭＣ的造血被抑制；但１８周龄ＬＴＨＭＣ则表现为培养上清液中非粘附细胞数上升，１４天达高峰；基质层出现造血区，原已退缩的基质层有新的基质细胞生长。提示１８周龄ＬＴＨＭＣ仍有造血潜力。

体外培养人骨髓基质细胞的超微结构

体外培养人骨髓基质细胞的组成及功能与人体造血微环境相似，可作为研究人体造血微环境的良好模型。选择体外培养第４周的人骨髓基质细胞层，经固定、脱水、原位包埋、超薄切片染色后电镜观察。结果：可见基质层由３类基质细胞及ＥＣＭ组成。巨噬样细胞样基质细胞浆内可见ＣＩ；基质细胞表面ＥＣＭ包含胶原纤维；内皮细胞样基质细胞间可见细胞间连接，但这种连接未见于造血祖细胞及其他基质细胞间。结论：人骨髓体外培养基质细胞超微结构与人体及小鼠骨髓微环境既有相似也有不同处，其差异可能由于体内外不同生长条件所引起。

外周血干细胞增高机制的研究

本文就外周血干细胞的生物学特性、来源以及骨髓造血干细胞从骨髓大量移出的机制等问题作一文献综述。越来越多的实验结果表明,外周血造血干细胞是由于髓内造血干细胞移出增加所致。

人骨髓细胞体外长期培养的建立

观察了由髂后上棘、胫骨穿刺抽吸的骨髓液及胸骨手术时刮取的骨髓液，以及在培养过程中不同时间用Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ（ＰＨ）分离骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）等因素对人骨髓细胞体外长期培养（Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｈｕｍａｎｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｃｕｌｔｕｒｅ，ＬＴＨＢＭＣ）的影响。结果显示；由刮取的骨髓液建立的培养，其基质层细胞生长、培养上清液中非粘附细胞及粒单细胞集落形成单位数目均优于抽吸者。原因可能为二者间ＭＮＣ的组成不同。这提示骨髓ＭＮＣ的来源对ＬＴＨＢＭＣ的建立有影响。本文还讨论了ＦＨ分离及培养过程中半量换液等因素对ＬＴＨＢＭＣ建立的影响。

脐血干细胞移植的移植物抗宿主病

脐血来源广泛，并含有丰富的造血干祖细胞，是骨髓良好的替代品。脐血移植已成为先天性造血系统发育不良、白血病等多种疾病的一种重要治疗手段。脐血移植的一个主要特点是移植物杭宿主病轻。移植物抗宿主病的核心是细胞因子风暴。细胞因子风暴的强度及持续时间与宿主和供体细胞产生细胞固子的能力，以及细胞因子刺激下供体细胞分裂、增殖能力的大小有关。

白血病微小残留病的检测

防治白血病复发是目前国内外白血病治疗的重点。估计白血病复发的根源是体内微小残留病(MRD)对维持化疗不敏感或化疗停止后再次大量增殖,然而其确切机制尚待进一步研究。因而检测 MRD,研究残留白血病细胞生物学特性,有助于揭开白血病复发之谜,为治愈白血病指出方向。研究 MRD,首先要建立十分敏感而可靠的检测方法。本文综述了目前应用的几种检测途径及其存在的问题,以及 MRD 在临床、生物学上的意义。

儿童急性白血病的分型研究

国外白血病研究进展迅速,从形态、免疫、遗传角度探讨白血病本质,揭示白血病治疗、预后的影响因素,已使急淋与非急淋的5年无病生存率达80%与50%以上。并发现,L_1、C-ALL 及染色体数大于50者预后较好,而 B-ALL、T-ALL 及有假二倍体核型者预后差。不同类型的核型异常其复发时间与复发半亦不同。本文还介绍了MIC分型的复杂性及癌基因的可能作用。

造血微环境中的蛋白聚糖

蛋白聚糖(PG)是造血微环境中重要的大分子物质,能与造血因子等特异性地结合,在造血干细胞粘附基质细胞及造血调控中有重要作用。对PG的深入研究,有助于认识在生理及病理情况下的造血调控,从而能更有效地治疗造血失控引起的血液疾病。

儿童肿瘤强烈化疗联用rhG-CSF动员外周血造血干细胞

观察了７例（２例非何杰金ｉ淋巴瘤Ⅲ期、３例急淋、１例急粒及１例神经母细胞瘤Ⅳ期）儿童恶性肿瘤病人接受强烈化疗联用ｒｈＧ－ＣＳＦ后，外周血干细胞（Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＰＢＳＣ）动员上升情况。ＰＢＳＣ上升的最明显特点是与外周血白细胞总数上升的幡度平行；ＷＢＣ的上升幅度与患儿骨髓是否受肿瘤细胞侵犯有关。本文显示ＣＤ３４＋细胞与粒单细胞集落形成单位（ＧＭ－ＣＦＵ）有较好的相关关系（ｒ＝０．８７，Ｐ＜０．００１），提示ＣＤ３４＋细胞可以预测ＰＢＳＣ开始单采的时机。

1989～2011期间8次强地震中抗液化地基处理成功案例的回顾与启示

回顾了1989年美国Mw6.9级Loma Prieta地震、1993年日本Ms7.8级Kushiro-Oki地震、1994年日本Mw8.2级Hokkaido Toho-Oki地震、1995年日本Ms7.2级阪神地震、1999年台湾集集地震、1999年土耳其Mw7.4级Kocaeli地震、2001年美国Mw6.8级Nisqually地震以及2011年Mw9.0级东日本地震中场地抗液化工程措施的成功案例,初步分析了各种抗液化工程措施的有效性与优劣性,可以给出如下工程场地抗液化处理的经验:(1)对于易液化的沿海及填海造陆场地,采用适宜的抗液化工程措施应成为地基处理不可缺少的环节;(2)应基于场地条件、经济条件及环境要求,综合考虑场地抗液化地基处理措施的选择;(3)挤密砂桩法和碎石桩法运用广泛、技术成熟且比较经济,宜优先选择作为抗震设防烈度Ⅷ度及以下地区的场地抗液化地基处理措施;(4)强夯法使用机具简单、费用低廉,适宜选择作为抗震设防烈度Ⅷ度及以下地区大面积场地的抗液化地基处理措施;(5)注浆法、深层搅拌法、旋喷法作为抗震设防烈度Ⅸ度及以下地区的场地抗液化地基处理措施是有效的;(6)多种抗液化地基处理措施联合使用的处理效果往往优于单一措施单独使用的处理效果,在条件许可的情况下,宜选择多种抗液化地基处理措施联合使用,以期达到更好的处理效果。

CAD/CAE集成中参数化有限元建模的研究

介绍CAD/CAE集成中参数化有限元建模的重要性和实际存在的问题。阐述几何模型转化为有限元模型的理论,提出一种基于VC++和ANSYS接口技术建立参数化有限元模型方法,并以渐开线圆柱直齿轮有限元模型的建立为例,描述了参数化有限元建模过程,并设计了便于用户操作的参数输入界面。

反义RNA对地中海贫血红系细胞β-珠蛋白mRNA异常剪接的纠正作用

目的研究反义ＲＮＡ对β地中海贫血红系细胞ＩＶＳ２６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用。方法构建特异性针对β６５４ｍＲＮＡ前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体，和不针对上述位点的反义对照载体，转染培养的β６５４红系细胞后，抽提总ＲＮＡ；以ＲＴＰＣＲ法作ｍＲＮＡ定量，检测正常和异常剪接的β珠蛋白ｍＲＮＡ产物的比例［β／（β＋β）］；以珠蛋白肽链体外生物合成分析红系细胞中β和α珠蛋白肽链合成的比例（β／α）。结果在ＲＮＡ水平，β６５４／β６５４纯合子的β／（β＋β）值由０．１９（转染后第０天）上升到０．５８（第８天），β６５４／βＡ杂合子由０．４５（０天）上升到０．８３（第８天）；在珠蛋白肽链水平，β６５４／β６５４细胞的β／α值由０．１６（０天）上升到０．５２（第８天），β６５４／βＡ细胞由０．３９（０天）上升到０．８４（第８天）。反义ＲＮＡ处理βＡ／βＡ红系细胞以及对照ＲＮＡ处理这３类红系细胞，对其ｍＲＮＡ剪接和珠蛋白肽链合成均影响不大。结论特异性反义ＲＮＡ能抑制红系细胞β６５４ｍＲＮＡ前体的异常剪接，部分恢复其正常剪接途径。

工装夹具增强装配技术研究应用

为了减少装配操作步骤和提高装配准确度和效率,在现有CAD软件装配功能的基础上提出一种基于装配特征识别的增强装配算法,利用特征识别以及定义的特征之间的装配关系实现增强装配功能,进而能实现装配的自动化。基于该算法实现的增强装配系统具有良好的扩充性,在实际装配应用中提高CAD软件装配功能的效率。

流式细胞术检测儿童急性白血病血小板活化功能的研究

建立微量全血血小板活化功能流式细胞术 (FCM)检测方法 ,探讨儿童急性白血病 (AL)不同阶段血小板活化状态及活化功能的变化。利用FCM检测微量全血中血小板活化特异性单克隆抗体CD62P、PAC 1在AL初论未治 ( 2 1例 )、诱导缓解后(CR1、14例 )、及持续完全缓解 (CCR) 2年以上 ( 6例 )患儿血小板表面表达百分比和ADP激活后表达变化 ,并以 16例外科畸形择期手术前患儿作为对照组。结果 ,AL初诊未治和CR1时ADP激活前后血小板CD62P表达均高于对照组 (P <0 0 5 ) ,AL初诊未治ADP激活后血小板PAC 1表达低于对照组 (P <0 0 5 ) ,CCR 2年以上者ADP激活后血小板CD62P 表达高于对照组 (P <0 0 5 )。结果表明 :AL初诊未治时体内血小板活化增强 ,ADP激活后血小板活化功能降低 ;AL缓解后ADP激后ADP激活后血小板活化功能恢复 ,但体内血小板活化状态仍高于对照组 ,CCR 2年以上者ADP激活后血小板活化功能增强。提示血小板功能异常在AL初诊未治时出血的发生中起一定作用。AL时伴有血小板功能异常 ,化疗后血小板活化功能有所恢复。本研究为AL时血小板功能的研究开辟了一种可靠简捷的方法。

可随HeLa细胞传代而传递的反义RNA真核表达系统

为研究反义ＲＮＡ表达载体在细胞内的稳定性，构建了一个特异性针对β地中海贫血基因ＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变ｍＲＮＡ前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体ｐＣＭＶＡ．ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后，通过ＲＮＡ定量检测反义片段对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用；再从转染后传代５次并冰冻保存１年的ＨｅＬａ细胞中回收反义表达载体，转染另外的β６５４ＨｅＬａ细胞，同样检测它对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用．结果显示该载体在细胞传代前后均能阻断β６５４异常剪接，部分恢复其正常剪接途径：用回收的ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后，正常剪接的βｍＲＮＡ水平［β／（β＋β＊）］由０．０５上升到处理后１５ｄ的０．４８，而２种对照质粒处理后对这一比值影响不大．表明ｐＣＭＶＡ可在ＨｅＬａ细胞中随着细胞传代而传递下去。

流式细胞术检测儿童肾病综合征血小板活化功能的研究

目的 原发性肾病综合征 (PNS)时存在着明显的高凝状态和血栓并发症 ,肾内微血栓形成可能是促使疾病进展及导致肾小球硬化的主要原因之一 ,血小板活化功能异常在儿童PNS的病理生理和血栓并发症中的作用仍然不完全清楚 ,目前未见国内报道。故有必要了解儿童PNS时血小板活化状态和活化功能的变化 ,探讨血小板活化在儿童PNS发病中的病理作用及其与病理类型的关系 ,指导临床治疗。方法 利用流式细胞术(FCM )三色荧光标记法检测 1 5例PNS患儿微量全血血小板活化特异性单克隆抗体CD6 2P、PAC - 1ADP激活前后血小板表面阳性表达的百分比 ,同时选择 1 6例外科畸形择期手术前儿童作为正常对照组。观察PNS患儿血小板CD6 2P、PAC - 1阳性表达的变化并与正常对照组比较。结果 PNS患儿ADP激活前后血小板CD6 2P阳性表达分别为 3.97± 4 .0 1和 34.38± 1 7.0 5均高于正常对照组 0 .5 7± 0 .75和 1 0 .80± 8.38(P <0 .0 1 )。PAC - 1的表达分别为 2 4 .72± 33.2 6和 72 .6 1± 2 4 .2 1与正常对照组 2 1 .1 6± 1 4 .72和 80 .4 1± 1 8.37比较无显著变化 (P>0 .0 5 )。结论 儿童PNS时体内血小板活化和ADP激活后血小板活化功能均增强。提示血小板活化增强在PNS高凝状态的发生中起一定作用 ,并与PNS的病理机制。

2.5维飞机结构件的特征识别

讨论了飞机结构件中2.5维零件的一般特征,提出了识别元的概念,利用识别元构造并总结了特征识别的匹配规则,提出了自动识别算法.最后提出特征空间,穷举了该特征空间的所有元素,并开发了此算法的特征识别模块.

构建反义RNA表达载体对β-地中海贫血进行基因治疗研究

β地中海贫血(简称β地贫)是常见的、严重危害人民身体健康的遗传性血液病,在我国南方(两广地区)的发病率约为1%.该病目前尚无有效的根治方法,患者只有依赖定期输血才能维持其生命,但输血过度将引起铁质大量沉积,最终导致心力衰竭而过早地夭亡.因此,探索β地贫治疗途径是疾病防治工作的一项重要任务.