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猪GRK2蛋白抗口蹄疫病毒作用分析
1
作者
陈文哲
张向乐
+6 位作者
顾峰幸
赵振翔
李康丽
薛钊宁
郑海学
张小丽
朱紫祥
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期4350-4361,共12页
为研究G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复制的影响,从猪的PK-15细胞中提取RNA,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出猪GRK2的完整...
为研究G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复制的影响,从猪的PK-15细胞中提取RNA,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出猪GRK2的完整CDS序列,并构建了猪GRK2真核表达质粒。Western blot和间接免疫荧光试验表明GRK2可表达并定位于细胞质中。FMDV感染PK-15细胞的GRK2转录水平和蛋白水平呈先上升后下降趋势;过表达GRK2可显著抑制FMDV的复制,下调表达GRK2可显著促进FMDV的复制,表明GRK2在FMDV感染过程中具有抗病毒作用。进一步研究发现FMDV 3C^(pro)蛋白可与GRK2互作并降解GRK2,促进FMDV的复制。研究结果为进一步分析宿主蛋白GRK2的抗FMDV的分子机制奠定了基础。
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关键词
口蹄疫病毒
G蛋白偶联受体激酶2
抗病毒作用
下载PDF
职称材料
CRISPR/Cas9介导的USP30基因敲除细胞系的建立及其对塞内卡病毒增殖的影响
2
作者
赵振翔
张向乐
+6 位作者
杨帆
曹伟军
顾峰幸
李康丽
郑海学
王雯慧
朱紫祥
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期4064-4074,共11页
【目的】利用规律成簇的间隔短回文重复序列/Cas9核酸酶(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 nuclease,CRISPR/Cas9)技术建立USP30基因敲除的人胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293T cells,HEK-293T)...
【目的】利用规律成簇的间隔短回文重复序列/Cas9核酸酶(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 nuclease,CRISPR/Cas9)技术建立USP30基因敲除的人胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293T cells,HEK-293T)细胞系,为开展宿主泛素特异性蛋白酶30(ubiquitin-specific protease 30,USP30)蛋白的功能研究建立了细胞模型;同时,初步探究USP30蛋白在病毒感染过程中的作用。【方法】根据Ensemble数据库查询USP30基因序列,定位USP30在基因组中不同转录本重叠区的第一个外显子段,设计并合成2对引导RNA(single guide RNAs,sgRNA),分别构建在pX459载体中;将pX459-USP30-sgRNA质粒转染HEK-293T细胞,并用嘌呤霉素处理,筛选出转染阳性的细胞,然后通过有限稀释法筛选单克隆细胞,通过Western blotting及测序检测USP30基因的敲除。通过Western blotting及实时荧光定量PCR分析比较塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)在野生型和USP30基因敲除HEK-293T细胞中的复制差异。【结果】Western blotting及测序证实USP30基因敲除单克隆细胞系构建成功。进一步实验发现,SVA在USP30基因敲除细胞中的复制水平显著低于野生型细胞。【结论】成功构建USP30基因敲除的HEK-293T细胞系,首次证明USP30对SVA的复制具有促进作用,为进一步揭示USP30相关免疫反应和SVA感染过程的作用机制提供了良好的细胞模型,也为开展宿主USP30蛋白调控病毒复制的机制研究提供了关键工具和一定的理论依据。
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关键词
CRISPR/Cas9
泛素特异性蛋白酶30
基因敲除细胞
塞内卡病毒
原文传递
题名
猪GRK2蛋白抗口蹄疫病毒作用分析
1
作者
陈文哲
张向乐
顾峰幸
赵振翔
李康丽
薛钊宁
郑海学
张小丽
朱紫祥
机构
甘肃农业大学动物医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期4350-4361,共12页
基金
国家重点研发计划项目(2021YFD1800300)
甘肃省重大专项(21ZD3NA001,20ZD7NA006,19ZDNA001)
+3 种基金
“十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目(2022SDZG02)
生猪产业体系(CARS-35)
绒毛羊产业体系(CARS-39-13)
中国农业科学院基本科研业务费(1610312022006)。
文摘
为研究G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复制的影响,从猪的PK-15细胞中提取RNA,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出猪GRK2的完整CDS序列,并构建了猪GRK2真核表达质粒。Western blot和间接免疫荧光试验表明GRK2可表达并定位于细胞质中。FMDV感染PK-15细胞的GRK2转录水平和蛋白水平呈先上升后下降趋势;过表达GRK2可显著抑制FMDV的复制,下调表达GRK2可显著促进FMDV的复制,表明GRK2在FMDV感染过程中具有抗病毒作用。进一步研究发现FMDV 3C^(pro)蛋白可与GRK2互作并降解GRK2,促进FMDV的复制。研究结果为进一步分析宿主蛋白GRK2的抗FMDV的分子机制奠定了基础。
关键词
口蹄疫病毒
G蛋白偶联受体激酶2
抗病毒作用
Keywords
foot-and-mouth disease virus
G protein-coupled receptor kinase 2
antiviral effect
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
CRISPR/Cas9介导的USP30基因敲除细胞系的建立及其对塞内卡病毒增殖的影响
2
作者
赵振翔
张向乐
杨帆
曹伟军
顾峰幸
李康丽
郑海学
王雯慧
朱紫祥
机构
甘肃农业大学动物医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期4064-4074,共11页
基金
国家重点研发计划(2021YFD1800300)
甘肃省重大专项(21ZD3NA001,20ZD7NA006,19ZDNA001)
+3 种基金
“十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目(2022SDZG02)
生猪产业体系(CARS-35)
甘肃省优秀博士生项目(23JRRA559)
兰州大学中央高校基本科研业务费专项资金(lzujbky-2022-13)。
文摘
【目的】利用规律成簇的间隔短回文重复序列/Cas9核酸酶(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 nuclease,CRISPR/Cas9)技术建立USP30基因敲除的人胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293T cells,HEK-293T)细胞系,为开展宿主泛素特异性蛋白酶30(ubiquitin-specific protease 30,USP30)蛋白的功能研究建立了细胞模型;同时,初步探究USP30蛋白在病毒感染过程中的作用。【方法】根据Ensemble数据库查询USP30基因序列,定位USP30在基因组中不同转录本重叠区的第一个外显子段,设计并合成2对引导RNA(single guide RNAs,sgRNA),分别构建在pX459载体中;将pX459-USP30-sgRNA质粒转染HEK-293T细胞,并用嘌呤霉素处理,筛选出转染阳性的细胞,然后通过有限稀释法筛选单克隆细胞,通过Western blotting及测序检测USP30基因的敲除。通过Western blotting及实时荧光定量PCR分析比较塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)在野生型和USP30基因敲除HEK-293T细胞中的复制差异。【结果】Western blotting及测序证实USP30基因敲除单克隆细胞系构建成功。进一步实验发现,SVA在USP30基因敲除细胞中的复制水平显著低于野生型细胞。【结论】成功构建USP30基因敲除的HEK-293T细胞系,首次证明USP30对SVA的复制具有促进作用,为进一步揭示USP30相关免疫反应和SVA感染过程的作用机制提供了良好的细胞模型,也为开展宿主USP30蛋白调控病毒复制的机制研究提供了关键工具和一定的理论依据。
关键词
CRISPR/Cas9
泛素特异性蛋白酶30
基因敲除细胞
塞内卡病毒
Keywords
CRISPR/Cas9
ubiquitin-specific protease 30
cells with gene knockout
Senecavirus A
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪GRK2蛋白抗口蹄疫病毒作用分析
陈文哲
张向乐
顾峰幸
赵振翔
李康丽
薛钊宁
郑海学
张小丽
朱紫祥
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
CRISPR/Cas9介导的USP30基因敲除细胞系的建立及其对塞内卡病毒增殖的影响
赵振翔
张向乐
杨帆
曹伟军
顾峰幸
李康丽
郑海学
王雯慧
朱紫祥
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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