人类染色体17p13.3位点新克隆基因HC56、HC71和HC90对Jurkat细胞活力的作用

目的 探讨人类染色体 17p13.3位点新克隆基因HC5 6、HC71和HC90对T淋巴瘤细胞株Ju rkat细胞活力的作用。方法 应用脂质体介导的基因转染方法 ,将外源基因HC5 6、HC71和HC90分别导入Jurkat细胞 ,用苔盼兰拒染试验 ,观察基因的瞬时表达对细胞活力的作用。结果 Jurkat细胞瞬时转染HC5 6和HC71基因后 ,与转染PBK/CMV空载体的实验对照组比较 ,第 2 4、4 8、72和 96h ,细胞的活力明显受抑制 (P <0 .0 1) ;Jurkat细胞瞬时转染HC90基因后 ,仅在第 96h细胞的活力受抑制 (P <0 .0 5 ) ,而第 2 4、4 8和 72h ,未发现细胞的活力受抑制 (P >0 .0 5 )。结论 外源HC5

人原发性肝细胞癌和癌旁组织ets-2,IGF-Ⅱ,C-myc和N-ras表达的研究

本文研究了12对人原发性肝细胞癌(PHC)和癌旁组织ets-2,IGF-Ⅱ,C-myc和N-ras的表达。在12对标本中,至少有1种以上的癌基因表达增加。ets-2表达最多见,12对标本中均有表达,以3.5和2.4 kb的条带为主,而正常对照肝表达4.5,3.5和2.4 kb条带,以4.5和3.5 kb条带为主。6例癌旁组织ets-2的表达高于PHC。IGF-Ⅱ在3对标本中表达为5.0和2.0 kb的胚胎型转录物;1例标本癌旁组织有5.0和2.0 kb IGF-Ⅱ表达而PHC中却没有表达.N-ras在8/12 PHC和6/12癌旁组织表达为4.0 kb的条带,2例癌旁组织N-ras的表达高于PHC.9/12 PHC和6/12的癌旁组织有4.0 kb C-myc表达条带,其中1例癌旁组织C-myc的表达高于PHC.在2例PHG,除4.0 kb条带外还有2.2 kb的C-myc的表达。

人类染色体17p13.3位点新克隆基因HC56,HC71和HC90在白血病细胞的表达

为研究人类染色体 1 7p1 3 .3位点新克隆的基因HC56 ,HC71和HC90在白血病细胞中的表达 ,应用同位素标记的、以 βM 2基因作为内参的半定量RT PCR法 ,检测 35例急性白血病和 4株白血病细胞系的HC56 ,HC70和HC90基因的表达。结果显示 ,急性淋巴系白血病病人的HC90基因和T淋巴系白血病细胞系Jurkat细胞HC90基因表达水平降低。急性髓系白血病病人HC71基因表达水平降低。HC56基因表达在急性白血病和正常对照间未见显著差异。结论 :在人类白血病有HC70和HC90的基因表达异常。

Jurkat细胞转染外源HCAP1基因后的增殖抑制

HCAP1基因系人类染色体 17p13 .3区带克隆的新肝癌相关基因。已发现人类多种肿瘤存在此区带的杂合性缺失。本研究应用脂质体介导法将HCAP1基因转染T淋巴瘤Jurkat细胞系 ,经G418筛选 ,获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞。用台盼蓝拒染试验计数活细胞 ,绘制生长曲线 ,进行软琼脂集落形成试验。结果显示 :与转染空载体质粒 pBK/CMV的细胞比较 ,转染外源HCAP1基因的Jurkat细胞增殖速率明显减慢 ,细胞倍增时间延长 ,在软琼脂上的集落形成能力下降 (P <0 .0 1)。结论 :外源HCAP1基因产物对Jurkat细胞的增殖有明显的抑制作用。

ras基因产物p21的分子进化和癌变机理探讨

作者收集了人、果蝇、酵母、粘菌和病毒的10种P21氨基酸全顺序,运用AADIS和UPGMA两程序并结合进一步的数据分析揭示:①就协同进化来说,ras基因每年每基因平均重复率为2.78×10^(-9),这或许系迄今报道的最低速率保持者;②ras基因每年每氨基酸替代率为2.23×10^(-10),这在进化上是相当保守的。数据分析进一步证实的实验结果还有:①v-Has和v-Kis分别来自c-H-ras1和c-K-ras2;②c-H-ras1、c-K-ras2和c-N-ras由一个共同的祖先基因演化而来。根据Fitch等的观点,我们在此特别提出了p21的不变子/共变子转化假说,从分子进化角度对P21在癌变中的作用作出可能的解释。

HC56基因转染对淋巴瘤或白血病细胞株活力的作用

目的:探讨外源HC56基因产物对B淋巴瘤细胞株Raji和髓系白血病细胞株K562细胞活力的作用。方法:应用脂质体介导的基因转染方法,将外源基因HC56分别导入Raji和K562细胞,用苔盼兰拒染试验,观察外源基因的瞬时表达对细胞活力的作用。结果:Raji和K562细胞转染HC56基因后,与转染PBK/CMV空载体的实验对照组比较,细胞的活力明显受到抑制(P<0.05)。结论:外源HC56基因产物可明显抑制淋巴瘤或白血病细胞株的活力。

HCAP1蛋白在急性白血病患者外周血原始细胞中的表达

目的:了解HCAP1蛋白在急性白血病患者外周血原始细胞中的表达。方法:分离18个正常个体外周血白细胞和20例急性白血病患者原代白血病细胞,用免疫细胞化学染色和Western印迹分析HCAP1蛋白表达并进行比较。结果:受检的正常入外周血自细胞和白血病患者原始细胞均表达HCAP1蛋白;在正常人外周血成熟白细胞,HCAP1主要分布于细胞核,而急性白血病患者的原始细胞在细胞核和细胞质均有分布;急性白血病患者原始细胞HCAP1蛋白的相对表达值(HCAP1／actin的灰度比值)为(0.37±0.23),正常入外周血白细胞的HCAP1蛋白相对表达值为(0.31±0.19,P>0.05)。结论:正常人外周血白细胞和白血病患者的原代白血病细胞均表达HCAP1蛋白,两者之间表达水平并无显著差异,但其在细胞内的分布有所不同。

麻鸭肝癌及肝炎症性病变与鸭乙型肝炎病毒感染关系

本文报道了自人类肝癌高发区江苏省启东县以及(人类肝癌)相对低发区南京市金坛县,上海市青浦县收集的319只麻鸭进行的肝脏组织病理学检查和血清的鸭乙型肝炎病毒(DHB)检测,发现三个地区鸭的各类肝炎发生率、各类肝脏炎症性病变中的DHBV检出率均相当接近,无显著差异,唯有在启东鸭肝中检出了肝癌前病变及肝癌。鸭肝癌的发生及肝炎症性病变与鸭血清中的DHBV感染均无明显相关。近年来、启东鸭肝癌检出率与1977年的相比明显下降。

HCAP1基因对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的作用

目的 :研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl- 2的作用。方法 :用脂质体介导的基因转移方法 ,把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中 ,用流式细胞术和Hochest 332 58荧光染色检测细胞凋亡 ;用Westernblot检测外源HCAP1基因对凋亡相关蛋白Bax和Bcl- 2蛋白表达的调节。结果 :外源HCAP1基因导入Raji细胞 2 4、4 8和 96h后 ,细胞凋亡率增加。Westernblot显示Bax/Bcl- 2蛋白表达比值明显增高。结论 :转染外源性HCAP1基因可诱导Raji细胞凋亡 ,使Bax/Bcl- 2蛋白表达比例上调可能是HCAP1诱导凋亡的机制之一。

转染外源HC56基因对Jurkat细胞足叶乙甙作用敏感性的研究

目的 探讨HC5 6基因与化疗敏感性的关系。方法 把HC5 6基因转染Jurkat细胞 ,经G418筛选 ,获得稳定表达外源HC5 6基因的细胞克隆后 ,应用MTT法 ,观察HC5 6基因产物对Jurkat细胞拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙 (etoposide ,VP16)敏感性的影响。结果 HC5 6基因转染Jurkat细胞 ,在 1μg ml、10 μg ml、5 0 μg ml浓度的VP16作用下 ,对细胞生长的相对抑制率分别为 5 1.7%± 4.2 % ,45 .1%± 3 .7% ,79.6%± 6.2 % ,明显高于在相应的VP16浓度作用下的PBK CMV空载体转染的对照细胞(分别为 9.5 %± 0 .6% ,7.0 %± 0 .5 % ,10 .2 %± 0 .9% ) (P <0 .0 1)。结论 HC 5

以Chelex^R100作为介质、一步法从贮存骨髓涂片中提取DNA作PCR分析

利用螯合型离子交换树脂Ｃｈｅｌｅｘ~Ｒ１００作为介质、一步法从已贮存数年的骨髓细胞涂片中提取用作ＰＣＲ分析的ＤＮＡ。共提取已经或未经瑞氏染色的骨髓涂片２０张，平均每片ＤＮＡ收获率１．２±０．４μｇ。ＤＮＡ分子量为２～６ｋｂ大小，适合用于ＰＣＲ分析，但不能用于ＳｏｕｔｈｅｒｎＥｐ迹分析。本法具有简便、省时、明显减少因操作引起的标本间ＤＮＡ交叉污染的机会。此法有利于临床上收集大量的、不同病期的血液病标本，进行分子生物学研究和回顾性诊断。

鸭乙型肝炎病毒表面抗原表达质粒的构建及鸭血清中DHBsAg的初步检测

用重组DNA技术构建了鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的Pre S/S的表达质粒——D.F.W.29,表达的融合蛋白分子量为30kd。用SDS-PAGE分离细菌蛋白,经考马斯亮蓝染色、激光光密度扫描定量分析表明,DHBV的pre S/S表达的融合蛋白占细菌总蛋白的16字。将此融合蛋白免疫家兔,可获得相应抗体。免疫印迹法(Western blot)测抗体灵敏度,证明和该抗体呈现阳性反应的最低抗原量为3μg。用此抗体检测鸭血清中DHBsAg的初步结果表明,它与鸭血清DHBV DNA斑点杂交结果基本相符。因此,该抗体可以用作检测鸭乙型肝炎病毒携带状态并可用于研究鸭肝癌与肝炎的关系。

疏水性肺表面活性物质蛋白质的提纯及其生物活性研究

采用柱层析方法从人羊水提纯Ｍｒ１７．５×１０￣２（ＳＰＢ）及Ｍｒ６×１０￣３（ＳＰＣ）两种疏水性肺表面活性物质蛋白质，研究其表面活性作用。结果显示：人工合成磷脂与不同量蛋白质配比的肺表面活性物质（ＰＳ）具有不同的肺表面活性作用，人工合成磷脂分别加入ＳＰＢ与ＳＰＣ均能降低ＰＳ表面张力，提高其生物活性，但以联合ＳＰ（ＳＰＢ与ＳＰＣ混合者）效果最佳。人工合成磷脂与ＳＰ的最适比例为１００：２。

以VNTR多态性分析检测人类白血病RB基因的杂合子性缺失

对30个正常个体进行RB1.20 PCR-VNTR分析,其多态性为86.7％。28例白血病的VNTR多态性为64.3％,显著低于正常对照(P<0.05)。以各种不同类型白血病分组分析,发现其中急淋组仅为37.5％,显著低于正常(P<0.05),其它各型白血病与正常比较无显著差异(P>0.05)。进一步对24例急性白血病病例作发作期和完全缓解期的配对VNTR分析,发现其中1例急淋在完全缓解期是多态性,但发作期呈均一性。提示一些急淋病例有RB基因杂合子性缺失。RB基因功能失活在急淋的发病中可能也起一定的作用。

转染外源HCAP1基因对Raji细胞化疗敏感性的作用

目的 探讨外源HCAP1基因产物对B淋巴瘤 /白血病细胞系Raji细胞化疗敏感性的作用。 方法 用脂质体介导法 ,把HCAP1基因转染Raji细胞 ,经G4 18筛选后 ,分别与化疗药物DNR(daunoru bicin ,柔红霉素 )、VP16 (etoposide ,足叶乙甙 )和VCR(vincristine,长春新碱 )联合培养 2 4小时 ,用苔盼兰拒染试验计数活细胞。结果 转染HCAP1的Raji细胞 ,在不同浓度的DNR(0 .0 1～ 10 .0 μg/ml)和VP16 (5～ 80 μg/ml)作用下 ,与转染空载体和未转染对照细胞比较 ,细胞活力的抑制作用明显增强 (P <0 .0 5 )、IC50 (半数抑制浓度 )值明显降低 ;但与不同浓度的VCR(12 .5～ 10 0 μg/ml)作用 ,细胞活力的抑制和IC50 值与对照细胞相似。结论 HCAP1过表达可明显增加Raji细胞对DNR、VP16作用的敏感性 。

转染外源HCAP1基因对B淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖的作用

目的:HCAP1基因定位于人类染色体17p13．3,此区域在多种肿瘤组织呈杂合性缺失,本研究旨在探 讨HCAP1外源基因产物对B淋巴瘤细胞系Raji细胞增殖的作用。方法:应用脂质体介导法,将HCAP1基因转染Raji 细胞,经G418筛选、获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞,用台盼蓝活细胞计数、绘制生长曲线、软琼脂集落培养及 BrdU(5溴-2’脱氧尿嘧啶)标记法,观察HCAP1基因产物对Raji细胞增殖的作用。结果:与转染空载体的对照细胞 比较,稳定表达外源HCAP1基因的细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,细胞集落形成数明显减少,BrdU掺 人细胞比例降低。结论:外源HCAP1基因产物的过表达对Raji细胞的增殖有抑制作用。

以VNTR作为多态标记检测人类白血病p53基因杂合子性缺失

用ＰＣＲ－ＶＮＴＲ多态分析，以白血病缓解期患者的骨髓有核细胞作为胚系对照，对２７例急性白血病患者进行ｐ５３基因杂合子性缺失进行检测，结果发现在２７例中１３例呈异质性，其胚系的多态性率为４８．２％（３／２７）。对１３例胚系的ＶＮＴＲ呈多态性的白血病患者（ＡＬＬ１０例，ＡＭＬ３例），进一步进行白血病细胞与胚系的ＰＣＲ－ＶＮＴＲ配对分析，结果发现１例ＡＬＬ患者白血病细胞的ＶＮＴＲ异质性消失，而呈均一性。提示此例ＡＬＬ患者ｐ５３基因缺失一条等位基因，呈ＬＯＨ。结果提示ｐ５３基因功能失活在急性淋巴细胞白血病的发病中可能起一定的作用。

p53蛋白的功能和失活

ｐ５３基因作为肿瘤抑制基因已受到了广泛的重视。野生型ｐ５３蛋白具有控制细胞增殖；抑制细胞转化，阻止致癌过程的重要功能。ｐ５３基因的突变和缺失是导致ｐ５３蛋白功能失活的常见原因；此外，本文还综述了ｐ５３蛋白功能失活的其他机制。

固相合成肺表面活性物质蛋白质B的活性作用

为今后制备人工ＰＳ打下基础，用固相合成成熟段ＳＰ－Ｂ，用膜天平测定法和大鼠肺出血模型，观察它在体内、外的活性作用。结果：人工合成的磷脂加入合成ＳＰ－Ｂ在体外能降低表面张力至１０ｍＮ／ｍ以下，并增加滞后环面积；在体内能预防大鼠肺出血，使肺指数从０．７３降至０．５８（Ｐ＜０．０５），血清脂质过氧化物（ｎｍｏｌ／Ｌ）从４．８３降至２．７４（Ｐ＜０．０１），肺泡血浆蛋白质（ｇ／ｋｇ干肺）渗出从７０．５８降至２１．９８（Ｐ＜０．０１）。合用人工合成的ＳＰ－Ｂ优于单纯应用人工合成磷脂组，并与应用天然ＰＳ组相仿。

肾炎肾组织中HBVDNA的检测及其存在意义

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分子杂交和免疫组化技术，检测１８例肾穿刺组织中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶ相关抗原（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢｅＡｇ）的阳性情况。结果表明１５例ＨＢＶＤＮＡ阳性，其中８例成人和４例儿童为整合型，另３例儿童为游离型；有１３例ＨＢＶ抗原阳性。除肾小球外，肾小管亦麦达ＨＢＶ抗原，提示ＨＢＶＤＮＡ的存在状态在成人主要为整合型，在儿童有整合型和游离型。讨论了ＨＢＶＤＮＡ的存在与ＨＢＶ抗原表达的关系。