唾液腺腺泡细胞癌中NR4A3基因重排及NOR-1蛋白表达分析

目的:探讨NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达在唾液腺腺泡细胞癌中的表达及在鉴别诊断中的价值。方法:收集2020年5月—2024年1月于上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔病理科诊断的唾液腺癌119例,包括腺泡细胞癌(acinic cell carcinoma,AciCC)63例,黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)31例,分泌性癌(secretory carcinoma,SC)25例。分别使用荧光原位杂交和免疫组织化学染色检测NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达情况,采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:AciCC主要发生于大唾液腺。与MEC和SC相比,AciCC好发于女性(P=0.006)。NR4A3基因重排在AciCC、MEC和SC中的阳性率分别为76.2%(48/63)、0%(0/10)和0%(0/7),NOR-1蛋白表达在AciCC、MEC和SC中的阳性率分别为92.1%(58/63)、9.7%(3/31)和0%(0/25),差异具有统计学意义(P<0.001)。单独使用NR4A3基因重排诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为76.2%和100%。单独使用NOR-1蛋白表达诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为92.1%和94.6%。联合使用NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为96.8%和94.6%,曲线下面积为0.896,诊断价值最优。结论:AciCC好发于女性,主要发病部位为大唾液腺。NR4A3基因重排仅见于AciCC中,在诊断工作中具有100%的特异性,但敏感性较低。NOR-1蛋白表达检测具有很好的灵敏度和特异度,可作为鉴别AciCC、MEC和SC的初筛和替代方法。联合使用NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达检测具有最优的诊断价值。

应用WGCNA分析挖掘唾液腺多形性腺瘤恶变关键节点基因及通路

目的:基于高通量转录组测序及WGCNA,挖掘唾液腺多形性腺瘤(PA)恶变为癌在多形性腺瘤中(Ca-ex-PA)过程中的核心驱动基因及相关通路。方法:收集PA、Ca-ex-PA患者肿瘤及癌旁唾液腺的新鲜标本各5例,进行高通量转录组测序(RNA-Seq)分析,筛选PA与瘤旁唾液腺组、Ca-ex-PA与癌旁唾液腺组中的差异表达基因。取PA、Caex-PA共有的差异表达基因进行WGCNA分析,获得与PA恶变相关的基因群体。结果:测得良、恶性肿瘤共有差异表达基因426个,通过WGCNA得到的4个模块中,包含78个基因与恶性肿瘤表型相关。其中评分最高的EFNA3基因表达程度与高组织学分级的腺癌亚型显著相关(P<0.05)。结论:WGCNA能有效筛选出与PA恶变相关的核心驱动基因,EFNA3过表达可能与PA恶变有关,其作为预后评估和治疗靶点的价值有待进一步研究。

穿刺小标本改良石蜡块制作方法及评价

目的 :改良现有琼脂预包埋石蜡包埋法,评价该包埋法对空芯针穿刺活检小标本组织完整性、组织学形态、蛋白质和DNA检测的影响。方法:取10例口腔黏膜鳞癌空芯针穿刺活检标本,分别进行成型包埋模具的改良琼脂预包埋石蜡包埋法及常规石蜡包埋法,前者缩短脱水时间至3.5 h,后者为12 h。样本处理后,分别行H-E染色、组织学形态、免疫组织化学(IHC)和DNA荧光原位杂交(FISH)等检测,并对检测结果进行对比分析。采用GraphPad Prism 9软件包对数据进行组间t检验。结果:改良琼脂预包埋法较琼脂预包埋法降低了操作难度,易于推广。与常规石蜡包埋法相比,组织脱水时间显著缩短(P<0.001),对镜下组织学形态及后续IHC和FISH检测无影响。结论:改良琼脂预包埋石蜡包埋法满足临床病理诊断对组织处理的要求,是值得推广的空芯针穿刺活检标本组织包埋法。

基于二代测序探索头颈部高级别转化腺样囊性癌分子遗传学特征

目的:探索头颈部高级别转化腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma with high-grade transformation,ACC-HGT)的临床病理及分子遗传学特征。方法:收集自2020年1月~2022年12月上海第九人民医院口腔病理科诊断的5例高级别转化腺样囊性癌患者的临床病理资料,运用显微切割方法获得肿瘤的高级别转化成分以开展二代基因检测,接着利用免疫组织化学技术进一步验证基因突变对蛋白质生成水平的影响。结果:5例患者都是男性,平均年龄为48岁,追踪观察时间4~30个月,有3例仍然存活,2例已经去世,3例发现局部复发,2例出现血行转移至肺、脑。5例肿瘤中,NOTCH1突变在3例中检出,NOTCH1重排在1例中检出,p53突变在1例中检出,PIK3CA突变在2例中检出,PIK3R1突变在1例中检出,PPP2R2A突变在1例中检出,这些基因突变可引起其下游相关蛋白NICD、p53及PI3K信号通路相关蛋白pAKTSer473高表达。结论:ACC-HGT易复发和血行转移,其遗传改变主要发生在NOTCH、PI3K以及p53通路上。

稻秆纤维素降解菌的分离筛选和降解性能研究

从种稻红壤中分离微生物菌株,经紫外诱变后得到了3株高效的稻秆纤维素降解菌株,分别为细菌YB20、真菌F9和YF15.经鉴定,菌株YB20为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis sp.),菌株F9和YF15均为绿色木霉(Trichoderma viride sp.).对3株纤维素降解菌株产酶特性进行了初步研究,确定了菌株的最佳产酶条件,菌株YB20、F9和YF15的胞外羧甲基纤维素(CMC)酶活性高达2.67、2.78和3.56(mg/mL).30 min.产酶稳定性试验表明,菌株YB20、F9、YF15的CMC酶活性均具有较好的稳定性.纤维素降解菌剂培养试验结果表明,3株菌混合培养对秸秆腐解具有较好的协同效应,稻秆腐解率可达到35.02%,比对照提高了4.43倍.大田应用试验显示,与不施用菌剂的对照相比,施用纤维素降解菌剂在一定程度上提高了晚稻产量.

基于PRO/E的混流式水轮机转轮三维实体建模

混流式水轮机因其叶片为空间扭曲形态,三维实体建模较为困难,利用PRO/E与AutoCAD相结合,以Auto CAD中的叶片平面木模图为基础,利用PRO/E建模软件中的三维功能,采用导入点数据文件形成叶片各横截面,面实体化形成叶片三维体的方法建出叶片实体。通过使用PRO/E中旋转切割功能对进水边、出水边、上冠及下环各部位进行曲面光滑处理,构建出更加满足水力要求的转轮三维空间型面,从而可准确得到由平面图到三维体所表达的转轮实体。

20例EDTA-K2致假性血小板减少动态分析

EDTA-K2抗凝血时导致血小板计数假性减少现象及动态观察。EDTAK2做为抗凝剂又确有促使或诱导导致血小板发生凝集，从而导致血小板计数假性低下的问题也偶有出现。在《诊断学》教科书上及国外出版的血液学检验书籍中都有简要说明，国外的有关文献报道也很多，而在国内检验书籍中和文献中却很少提到，值得引起检验界同行的重视。我科采用全自动血球计数仪对血小板计数值异常偏低的5000多例患者中的20例标本采血，进行0、30、60、90、120min检测，不抗凝末梢血手工计数，血涂片观察血小板分布情况等方法进行复检。现将结果分析报道如下。

免疫组织化学双染技术在唾液腺淋巴上皮性病变中的应用评价

目的:根据抗体阳性表达的不同部位(细胞核、细胞质和细胞膜)、染色顺序及匹配不同的显色系统,探讨免疫组织化学双染技术在唾液腺淋巴上皮性病变诊断中的最佳染色方法。方法:挑选良性淋巴上皮病(benign lymphoepithelial lesion,BLEL)、淋巴上皮癌(lymphoepithelial carcinoma,LEC)和黏膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤(extranodal marginal zone lymphoma of mucosa-associated lymphoid tissue,MALT淋巴瘤)各20例,分别进行AE1/AE3、Ki-67、CD20cy抗体的免疫组织化学单染和两两组合的双染检测。每个病例依据不同抗体的表达部位(细胞核、细胞质及细胞膜)、不同的抗体染色顺序和显色剂,分别采用3种双染方法检测,即①先Ki-67(DAB显色),再AE1/AE3或CD20cy(AEC显色);②先AE1/AE3或CD20cy(DAB显色),再Ki-67(AEC显色);③先Ki-67(AEC显色),再AE1/AE3或CD20cy(BCIP/NBT显色)。所得结果均与单染相比较,采用SPSS 17.0软件包对数据进行χ^2检验和配对t检验,分析染色强度和阳性比率有无差异。结果:所有双染方法中抗体定位均准确,但方法 1中各抗体染色强度(P=0.765)和阳性比率(P>0.05)均无显著差异,而方法 2和方法 3中抗体的阳性比率和染色强度均有不同程度下降(P<0.05)。结论:免疫组织化学双染技术在唾液腺淋巴上皮性病变中的最佳染色方法为先进行阳性定位于细胞核如Ki-67的染色,配合使用DAB显色剂,后进行阳性定位于细胞膜或细胞质如AE1/AE3或CD20cy的染色,配合使用AEC显色剂。

固定时间对口腔黏膜鳞状细胞癌组织染色的影响

目的探讨固定时间对口腔黏膜鳞状细胞癌组织HE染色和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色的影响。方法选取10例患者口腔黏膜鳞状细胞癌组织,每例各取4块,分别固定8h、24h、48h和1周,进行HE染色和高分子量细胞角蛋白(cytokeratin high molecular weight,CKH,克隆号34βE12)和广谱细胞角蛋白(cytokeratin pan,ckpan,克隆号AE1/AE3)IHC染色,观察细胞形态的优良、染色情况及IHC染色的阳性强度和阳性率。结果 HE染色和IHC染色结果均显示口腔黏膜鳞状细胞癌组织形态和染色、阳性强度和阳性率最佳为固定24h,8h为最差。固定1周者染色效果较48h差。结论本研究表明对口腔黏膜鳞状细胞癌组织,24h为最佳固定时间;组织固定不充分对HE染色和IHC染色的影响要大于固定时间过长的影响;固定时间越长,对HE染色和IHC染色效果影响越大。

Fc受体样4蛋白在唾液腺黏膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的:通过检测唾液腺黏膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤(extranodal marginal zone lymphoma of mucosa-associated lymphoid tissue B cell lymphoma,MALT淋巴瘤)中Fc受体样4(Fc receptor-like 4,FCRL4)蛋白的表达,分析其表达及分布特点与临床病理指标、预后等的相关性。方法:筛选2005—2013经病理确诊为唾液腺MALT淋巴瘤的病例作为实验组;以唇腺良性淋巴上皮病(benign lymphoepithelial lesions,BLEL)、大唾液腺BLEL及弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)作为对照组。免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测FCRL4蛋白表达。采用SPSS 17.0软件对FCRL4在实验组、对照组的表达及其与临床病理指标之间的关系进行分析,应用Kaplan-Meier法分析FCRL4表达与总体生存率之间的关系。结果:共收集到72例唾液腺MALT淋巴瘤。FCRL4表达主要定位于淋巴细胞的细胞膜和细胞浆,阳性细胞主要分布在上皮巢内及周边,且在唾液腺MALT淋巴瘤中的表达率显著高于唇腺BLEL(P=0.013)、大唾液腺BLEL(P=0.003)及DLBCL(P=0.001)。FCRL4蛋白表达与临床病理指标、总体生存率之间均无明显相关性(P>0.05)。结论:唾液腺MALT淋巴瘤中FCRL4主要表达于邻近上皮的淋巴细胞中,该类细胞可能与唾液腺MALT淋巴瘤的发生相关,可作为该肿瘤辅助诊断的指标。

三种不同免疫检测法对乙肝血清学标志物检测的结果比较

目的比较酶联免疫吸附法、化学发光免疫分析法、胶体金免疫层析法三种方法检测乙肝五项血清学标志物的结果。方法采集2016年1月—2017年12月我院肝病门诊103例就诊患者清晨空腹静脉血,分离血清,分别采用酶联免疫吸附法、化学发光免疫分析法、胶体金法检测乙肝五项血清标志物。结果乙肝五项血清标志物阳性率高低依次为:化学发光免疫分析法、酶联免疫吸附法、胶体金法;以病理学诊断为标准,化学发光免疫分析法检测HBsAg的灵敏度和特异性均高于酶联免疫吸附法和胶体金免疫层析法,三种方法检测HBsAg的灵敏度差异有统计学意义(P<0.05),而三种方法检测HBsAg特异性差异均无统计学意义(P>0.05)。结论化学发光免疫分析法检测乙肝表面抗原灵敏度和特异性均较高,但三种方法均有优缺点,根据临床不同检测目的选择合适的检测方法。

术前肿瘤标志物检测对肝内胆管细胞癌淋巴结转移的预测价值分析

目的探讨术前肿瘤标志物检测对肝内胆管细胞癌(ICC)淋巴结转移的预测价值。方法选取2016年11月-2017年11月我院收治的ICC患者70例,术前检测肿瘤标志物,术后病理检查确定有无淋巴结转移。结果血清肿瘤标志物CA19-9、CA125、CA211、CA242阳性率分别为67.14%(47/70)、35.71%(25/70)、62.86%(44/70)、51.43%(36/70);无淋巴结转移患者与有淋巴结转移患者的血清肿瘤标志物水平对比有统计学意义(P<0.05)。结论术前检测肿瘤标志物对ICC淋巴结转移具有较高的预测价值。

EBER显色原位杂交技术在口腔颌面部淋巴上皮癌中的应用体会

目的探讨EBER显色原位杂交技术(CISH)在口腔颌面部淋巴上皮癌中特有的操作与改进方法。方法应用CISH技术,荧光素标记的寡核苷酸探针EBER原位杂交检测试剂盒对40例疑为口腔颌面部淋巴上皮癌的病例进行EBER检测。结果 EBER阳性率为95%;阳性信号主要定位在肿瘤上皮细胞巢的细胞核上,呈棕黄色,周围淋巴细胞及正常组织未见明显着色;信号定位准确,染色结果清晰易辨,无背景干扰。结论简化操作EBER原位杂交检测试剂盒能够节省时间、增强信号强度和提高工作效率等。

变应性鼻炎患儿外周血miRNA-21表达水平及其临床意义

目的探讨变应性鼻炎(AR)患儿外周血miRNA-21表达水平及其临床意义。方法选取108例AR患儿纳入AR组,选取45例健康儿童纳入对照组。AR组患儿采用丙酸氟替卡松鼻喷剂联合孟鲁司特钠咀嚼片治疗4周,比较AR组患儿治疗前后miRNA-21、嗜酸性粒细胞(EOS)计数、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)、总IgE(TIgE)水平与对照组的差异。采用Pearson相关分析探讨AR患儿治疗前后miRNA-21、EOS计数、ECP、TIgE与视觉模拟评分法(VAS)评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-21、EOS计数、ECP和TIgE对AR患儿治疗后显效的评估效能。结果治疗4周后,AR组显效84例(占77.78%);AR组患儿治疗前miRNA-21、ECP、TIgE及外周血EOS计数水平高于治疗后及对照组,AR组患儿治疗后miRNA-21表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,AR组VAS评分低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。AR组患儿治疗前miRNA-21、EOS计数、ECP与VAS评分呈显著正相关(r=0.568、0.433、0.352);AR组患儿治疗后miRNA-21、EOS计数和ECP与VAS评分均无相关性。miRNA-21、ECP、EOS计数、TIgE评估AR患儿治疗后显效的曲线下面积(AUC)分别为0.913、0.859、0.694、0.688,其中miRNA-21的AUC大于ECP、EOS计数、TIgE,ECP的AUC大于EOS计数、TIgE,差异有统计学意义(P<0.05),而EOS计数、TIgE的AUC相比,差异无统计学意义(P>0.05)。miRNA-21联合ECP评估AR患儿治疗后显效的AUC为0.984(95%CI为0.863~0.995,P<0.05),诊断灵敏度为94.75%时,特异度可达90.52%。结论AR患儿血清miRNA-21表达水平显著升高,能一定程度反映AR患儿病情的严重程度,单独应用miRNA-21或联合应用ECP与miRNA-21可较好地预测AR患儿的临床疗效。

熊去氧胆酸对急性病毒性肝炎早期的治疗作用的观察

目的观察熊去氧胆酸对病毒性肝炎早期的治疗作用。方法将120例病毒性肝炎患者随机分为治疗组和对照组,对照组采用常规治疗,治疗组在此基础上给予熊去氧胆酸胶囊口服,观察患者的达标出院时间及治愈率。结果治疗组达到出院标准的时间短于对照组,有统计学差异(P=0.0049,P<0.01)。治疗组治愈率高于对照组,有统计学差异(P=0.0231,P<0.05)。结论熊去氧胆酸对早期的急性病毒性肝炎有良好的治疗作用,值得临床推广。

肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎临床分析

目的探讨肝硬化并发自发性腹膜炎的临床特点。方法回顾性分析53例失代偿期肝硬化的临床资料。结果多数患者缺乏腹膜炎的症状、体征，腹水细菌培养阳性率15．1％。结论肝硬化并发SBP的诊断不能依赖腹水中的细胞计数而PMN计数是诊断SBP的重要指标。

一株苯胺降解菌的分离鉴定及其降解特性

为研究苯胺污染的生物控制,通过驯化培养,从南京化工厂污水处理厂的活性污泥中分离出一株高效苯胺降解菌——菌株AN4。生理生化试验鉴定菌株AN4为金黄杆菌属(Chryseobacterium sp.)。菌株AN4利用苯胺生长和降解苯胺的最适温度为30℃、pH为7.0,它可在苯胺质量浓度低于3000mg/L的无机盐固体培养基上生长。菌株AN4除可降解苯胺外,还可以苯酚、苯甲酸、硝基苯、甲苯、萘、氯苯、二甲苯作为唯一碳源生长,蛋白胨可加速其对苯胺的代谢。代谢机制研究证实,菌株AN4在邻苯二酚1,2-双加氧酶作用下经邻位裂解途径降解苯胺。

基于模糊神经网络的水轮发电机组甩负荷过程调速器开度模式控制

基于模糊神经网络的水轮发电机组甩负荷过程调速器开度模式控制方法,能够快速稳定甩负荷过程中水轮发电机组的运行频率,保障电力系统平稳运行。构建水轮发电机组调速器数学模型,以模型中3个关键调节系数为目标输出,发电机组转速的误差变化率与误差为目标输入,设计5层模糊神经网络模型与控制规则;通过该模型依据此控制规则,模糊推理与模糊化目标输入,并持续迭代学习训练后,输出3个关键调节系数,向PID控制器内输入此类系数;由PID控制器以此输入为依据,控制水轮发电机组甩负荷过程调速器的开度模式,获得稳定频率输出。结果显示,该方法可通过对实验水轮发电机组甩不同额度负荷过程中调速器开度模式的控制,有效调整并稳定不同甩负荷过程中机组的运行频率,且控制中的控制精度较高,调整用时与超调量均较低,综合控制效果理想。

苯胺降解菌的分离鉴定及其降解特性研究

通过驯化培养,从活性污泥中分离出一株高效苯胺降解菌,命名为菌株AN5。对该菌株进行了鉴定及降解特性研究。结果表明,分离菌株呈革兰氏染色阳性,细胞为球状或短杆状,菌落颜色呈橙红色。菌株AN5除可降解苯胺外,还可以苯酚、苯甲酸、萘为惟一碳源生长。它的部分长度16SrDNA序列分析表明,分离菌株AN5与嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinivorans)的16SrDNA序列具有99%相似性。实验采用PAUP4.0软件包最大似然法对该菌株与相关菌进行系统发生分析。菌株AN5耐受苯胺的最高浓度可达5000mg·L-1。投加蛋白胨可以加速菌株对苯胺的降解。代谢机理研究证实,菌株AN5在邻苯二酚-1,2-双加氧酶作用下经邻位裂解途径降解苯胺。

γ-干扰素体外释放试验在结核性疾病中的诊断价值

目的探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验(Interferon Gamma Release Assays,IGRA)在结核性疾病中的诊断价值。方法采用TB-IGRA方法检测经本院临床证实的235例结核病患者,101例非结核性患者外周血γ-干扰素释放水平,同时与涂片抗酸染色、结核分枝杆菌核酸检测及结核抗体结果进行比较。结果经比较,TB-IGRA对结核性疾病诊断的灵敏度86.4%,均高于其他几种结核病检测方法,且具有较高的特异度,阳性预测值95.7%,阴性预测值为74.2%。结论体外γ-干扰素释放试验是一种辅助诊断结核病的快速、有效的方法,具有较好的临床应用价值。