目的研究榭皮黄酮(quercetin,Qu)影响肝癌细胞HepG2对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的敏感性及Traf6/NF-κB信号转导通路。方法体外培养HepG2细胞,取对数期细胞进行后续实验,将细胞分为对照组(不含任何药物的培养基孵育细胞24 h)、单...目的研究榭皮黄酮(quercetin,Qu)影响肝癌细胞HepG2对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的敏感性及Traf6/NF-κB信号转导通路。方法体外培养HepG2细胞,取对数期细胞进行后续实验,将细胞分为对照组(不含任何药物的培养基孵育细胞24 h)、单独Qu组(含40μg/ml Qu的培养基孵育细胞24 h)、单独5-FU组(含50μmol/L 5-FU的培养基孵育细胞24 h)、Qu+5-FU联合处理组(含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同孵育细胞24 h)、单独Traf6抑制剂C25-140组(2μmol/L C25-140的培养基孵育细胞8 h)、C25-140+Qu+5-FU组(C25-140预处理细胞8 h,然后含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同处理细胞24 h)。采用CCK8法检测细胞活力,采用倒置显微镜记录细胞克隆数,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot检测剪切的半胱氨酸蛋白酶-7(cleaved-caspase 7,Cle-caspase 7)、Clecaspase 3、剪切的聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(cleaved poly ADP-ribose polymerase,Cle-PARP)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(tumor necrosis factor receptor-associated factor-6,Traf6)、磷酸化转化生长因子-β活化激酶1(phosphorylation transforming growth factor-β-activated kinase 1,p-TAK1)和磷酸化核转录因子(phosphorylation nuclear factor kappa-B,p-NF-κB)蛋白的表达水平。结果Qu(40μg/ml)、5-FU(50μmol/L)和Qu+5-FU组细胞相对活力分别为(82.3±3.1)%、(53.7±4.1)%和(42.4±4.4)%,均显著低于对照组的(100.0±3.4)%,差异有统计学意义(t=5.83、9.54、14.65,P均<0.05);Qu(40μg/ml)组、5-FU(50μmol/L)组和Qu+5-FU组HepG2细胞克隆数分别为534±26、236±25、115±42,均显著低于对照组的701±32(P均<0.05),且Qu+5-FU组显著低于Qu(40μg/ml)组和5-FU(50μmol/L)组(t=31.74,P<0.001;t=11.34,P=0.008)。Qu(40μg/ml)组、5-FU(50μmol/L)组和Qu+5-FU组HepG2细胞凋亡率[(18.9±4.2)%vs(21.4±4.1)%vs(35.7±3.6)%vs(4.6±1.5)%]、Cle-caspase 7(0.11±0.02 vs 0.22±0.03 vs 0.32±0.03 vs 0.05±0.02)、Cle-caspase 3(0.13±0.02 vs 0.18±0.03 vs 0.28±0.03)和Cle-PARP(0.15±0.02 vs 0.24±0.03 vs 0.41±0.03 vs 0.08±0.02)表达水平均显著高于对照组,且Qu+5-FU组显著高于Qu(40μg/ml)组和5-FU(50μmol/L)组(P均<0.05)。Qu(40μg/ml)组、5-FU(50μmol/L)组、Qu+5-FU组HepG2细胞Traf6(0.28±0.02 vs 0.19±0.03 vs 0.11±0.03 vs 0.38±0.02)、p-TAK1(0.23±0.02 vs 0.11±0.03 vs 0.04±0.03 vs 0.38±0.02)和p-NF-κB(0.28±0.02 vs 0.13±0.03 vs 0.05±0.02 vs 0.44±0.03)蛋白相对表达量均显著低于对照组,且Qu+5-FU组均显著低于Qu(40μg/ml)组和5-FU(50μmol/L)组(P均<0.05)。与对照组相比,C25-140组、Qu+5-FU组和Qu+5-FU+C25-140组HepG2细胞相对活力[(73.4±4.1)%vs(65.8±3.6)%vs(47.7±3.9)%vs(100±3.1)%]和细胞克隆数(456±26 vs 413±25 vs 305±42 vs 763±32)显著降低,细胞凋亡率[(24.4±4.1)%vs(29.9±3.7)%vs(51.2±3.7)%vs(3.9±5.2)%]显著升高(P均<0.05);与Qu+5-FU组比较,Qu+5-FU+C25-140组HepG2细胞活力和克隆数显著降低,细胞凋亡率显著升高(P均<0.05)。与对照组相比,Traf6 mimics组HepG2细胞相对活力[(152.4±6.3)%vs(100±3.5)%]、细胞凋亡率[(5.3±3.2)%vs(3.8±2.1)%]和细胞克隆数(978±26 vs 783±32)均显著升高(P均<0.05),Qu+5-FU组和Traf6 mimics+Qu+5-FU组HepG2细胞相对活力[(65.8±4.3)%vs(100±3.5)%;(79.4±4.9)%vs(100±3.5)%]和细胞克隆数(454±25 vs 783±32;623±42 vs 783±32)显著降低,细胞凋亡率[(34.7±4.4)%vs(3.8±2.1)%;(24.4±3.5)%vs(3.8±2.1)%]显著升高(P均<0.05)。与Qu+5-FU组相比,Traf6 mimics+Qu+5-FU组HepG2细胞活力和克隆数显著升高,细胞凋亡率显著降低(P均<0.05)。结论Qu通过抑制Traf6/NF-κB信号转导通路协同诱导5-FU对肝细胞癌的化学治疗作用。展开更多
文摘目的研究榭皮黄酮(quercetin,Qu)影响肝癌细胞HepG2对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的敏感性及Traf6/NF-κB信号转导通路。方法体外培养HepG2细胞,取对数期细胞进行后续实验,将细胞分为对照组(不含任何药物的培养基孵育细胞24 h)、单独Qu组(含40μg/ml Qu的培养基孵育细胞24 h)、单独5-FU组(含50μmol/L 5-FU的培养基孵育细胞24 h)、Qu+5-FU联合处理组(含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同孵育细胞24 h)、单独Traf6抑制剂C25-140组(2μmol/L C25-140的培养基孵育细胞8 h)、C25-140+Qu+5-FU组(C25-140预处理细胞8 h,然后含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同处理细胞24 h)。采用CCK8法检测细胞活力,采用倒置显微镜记录细胞克隆数,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot检测剪切的半胱氨酸蛋白酶-7(cleaved-caspase 7,Cle-caspase 7)、Clecaspase 3、剪切的聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(cleaved poly ADP-ribose polymerase,Cle-PARP)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(tumor necrosis factor receptor-associated factor-6,Traf6)、磷酸化转化生长因子-β活化激酶1(phosphorylation transforming growth factor-β-activated kinase 1,p-TAK1)和磷酸化核转录因子(phosphorylation nuclear factor kappa-B,p-NF-κB)蛋白的表达水平。结果Qu(40μg/ml)、5-FU(50μmol/L)和Qu+5-FU组细胞相对活力分别为(82.3±3.1)%、(53.7±4.1)%和(42.4±4.4)%,均显著低于对照组的(100.0±3.4)%,差异有统计学意义(t=5.83、9.54、14.65,P均<0.05);Qu(40μg/ml)组、5-FU(50μmol/L)组和Qu+5-FU组HepG2细胞克隆数分别为534±26、236±25、115±42,均显著低于对照组的701±32(P均<0.05),且Qu+5-FU组显著低于Qu(40μg/ml)组和5-FU(50μmol/L)组(t=31.74,P<0.001;t=11.34,P=0.008)。Qu(40μg/ml)组、5-FU(50μmol/L)组和Qu+5-FU组HepG2细胞凋亡率[(18.9±4.2)%vs(21.4±4.1)%vs(35.7±3.6)%vs(4.6±1.5)%]、Cle-caspase 7(0.11±0.02 vs 0.22±0.03 vs 0.32±0.03 vs 0.05±0.02)、Cle-caspase 3(0.13±0.02 vs 0.18±0.03 vs 0.28±0.03)和Cle-PARP(0.15±0.02 vs 0.24±0.03 vs 0.41±0.03 vs 0.08±0.02)表达水平均显著高于对照组,且Qu+5-FU组显著高于Qu(40μg/ml)组和5-FU(50μmol/L)组(P均<0.05)。Qu(40μg/ml)组、5-FU(50μmol/L)组、Qu+5-FU组HepG2细胞Traf6(0.28±0.02 vs 0.19±0.03 vs 0.11±0.03 vs 0.38±0.02)、p-TAK1(0.23±0.02 vs 0.11±0.03 vs 0.04±0.03 vs 0.38±0.02)和p-NF-κB(0.28±0.02 vs 0.13±0.03 vs 0.05±0.02 vs 0.44±0.03)蛋白相对表达量均显著低于对照组,且Qu+5-FU组均显著低于Qu(40μg/ml)组和5-FU(50μmol/L)组(P均<0.05)。与对照组相比,C25-140组、Qu+5-FU组和Qu+5-FU+C25-140组HepG2细胞相对活力[(73.4±4.1)%vs(65.8±3.6)%vs(47.7±3.9)%vs(100±3.1)%]和细胞克隆数(456±26 vs 413±25 vs 305±42 vs 763±32)显著降低,细胞凋亡率[(24.4±4.1)%vs(29.9±3.7)%vs(51.2±3.7)%vs(3.9±5.2)%]显著升高(P均<0.05);与Qu+5-FU组比较,Qu+5-FU+C25-140组HepG2细胞活力和克隆数显著降低,细胞凋亡率显著升高(P均<0.05)。与对照组相比,Traf6 mimics组HepG2细胞相对活力[(152.4±6.3)%vs(100±3.5)%]、细胞凋亡率[(5.3±3.2)%vs(3.8±2.1)%]和细胞克隆数(978±26 vs 783±32)均显著升高(P均<0.05),Qu+5-FU组和Traf6 mimics+Qu+5-FU组HepG2细胞相对活力[(65.8±4.3)%vs(100±3.5)%;(79.4±4.9)%vs(100±3.5)%]和细胞克隆数(454±25 vs 783±32;623±42 vs 783±32)显著降低,细胞凋亡率[(34.7±4.4)%vs(3.8±2.1)%;(24.4±3.5)%vs(3.8±2.1)%]显著升高(P均<0.05)。与Qu+5-FU组相比,Traf6 mimics+Qu+5-FU组HepG2细胞活力和克隆数显著升高,细胞凋亡率显著降低(P均<0.05)。结论Qu通过抑制Traf6/NF-κB信号转导通路协同诱导5-FU对肝细胞癌的化学治疗作用。
