布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株的建立及免疫特性测定

在建立了布氏杆菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有强保护作用的细胞株A_7免疫BALB/C鼠,进行细胞融合。用竟争抑制ELISA筛选出5个阳性孔。克隆化后首次建立了9个布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株。其中F9株经传25代后及液氮冻存复苏后仍能稳定地产生生高效价的抗独特型抗体。其Ig类型鉴定为IgG_(2a),并证实具有抗原“内影象”。以鼠RBC为载体将其吸附于RBC上进行小鼠免疫试验,检测结果表明该抗独特型抗体具有良好的免疫原性,能诱导免疫动物产生相当效价的抗布氏杆菌抗体(Ab_3)。

牛种布氏杆菌抗独特型抗体苗的研究

在筛选出能产生效价高、特异性强的抗牛种布氏杆菌单克隆抗体细胞株A_7及其对患病奶牛有一定疗效的基础上,将提纯的该单克隆抗体免疫家兔,使产生高效价的抗独特型抗体,后者经提纯和加以适当佐剂免疫豚鼠和牛。检测结果表明:免疫豚鼠和牛产生了布氏杆菌凝集抗体;免疫豚鼠强毒菌株攻击后有较好的免疫保护力,证明该抗独特型抗体具有抗原“内影像”和布病疫苗的作用。

布氏杆菌抗独特型抗体苗豚鼠免疫试验

用新研制的抗牛布氏杆菌独特型抗体苗(简称二抗苗)免疫豚鼠并于免疫后4个月进行强毒菌株攻击保护试验表明,3个不同免疫剂量组豚鼠平均保护率为79.1％,血清凝集试验结果表明,免疫豚鼠产生了一定滴度的凝集抗体,这证明该抗独特型抗体苗具有良好的免疫原性。

早日龄雏鸡免疫功能探讨

胚胎后期鸡胚脾脏中已有一定数量浆细胞、TANAE^+.于临出壳时 TANAE^+迅速增多,并具有免疫功能;而浆细胞数变化较小,出壳时未测出 B 细胞功能.出壳后,免疫器官中浆细胞、TANAE^+数随日龄迅速增多,其中中枢免疫器官浆细胞、TANAE^+数于一周龄时趋于稳定,T、B 细胞均具有免疫功能.据此认为,雏鸡早日龄免疫不是不可行的.

布鲁氏菌抗独特型抗体的研究

在建立布鲁氏菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有保护作用的单抗 A7免疫家免制备抗独特型抗体(简称二抗)。经阻断试验和竞争抑制试验证实,该二抗具有抗原'内影象'。将其提纯后配制成甘油佐剂苗免疫豚鼠和小白鼠,检测结果表明:免疫豚鼠和小白鼠产生了布鲁氏菌凝集抗体;免疫小鼠的循环 T ANAE^+细胞百分数明显高于对照组;免疫豚鼠在免疫后4个月时强毒菌株攻击有79.2%获得保护。因此认为,该二抗不仅具有抗原的'内影象'结构,而且具有良好的免疫原性,可供作疫苗用。

精子提取物对绵羊显微授精受精率及胚胎发育影响的研究

将绵羊精子可溶性提取物与单个不运动绵羊精子共同注射于体外成熟的绵羊卵母细胞（显微授精）并在体外培养。结果发现，共同注射的卵母细胞卵裂率、２～１６细胞发育率、桑椹胚发育率、囊胚发育率均显著高于对照组，其中卵母细胞卵裂率和２～１６细胞发育率还显著高于精子单独注射组；桑椹胚、囊胚发育率明显高于精子单独注射组。对该组囊胚的免疫荧光染色分析表明，内细胞团数量与体外受精组相似，说明提取物对精子注射的受精卵或胚胎具有明显的促进发育作用。

感染传染性法氏囊病病毒雏鸡接种新城疫疫苗后T、B细胞数量及功能变化

1日龄雏鸡感染传染性法氏囊病病毒后再一次、二次接种新城疫疫苗,T、B 细胞数量及功能均明显低于其相应对照组,说明感染雏鸡对新城疫疫苗的免疫应答功能明显降低。攻击新城疫强毒后,感染鸡二次免疫组的免疫保护率明显高于感染鸡一次免疫组,并接近对照一次免疫组的水平。

雏鸡新城疫免疫后T,B细胞数量及功能变化

本试验研究了130只健康滨白雏鸡新城疫1次、2次免疫后,外周血液 T,B细胞数量及其功能的动态变化。结果表明,1次免疫后其外周血液 T,B 淋巴细胞数量明显上升,T,B 细胞功能增强;2次免疫后外周血液 T,B 淋巴细胞数量及功能均明显高于1次免疫。说明健康鸡 ND 免疫后,体液免疫和细胞免疫应答均参与免疫应答,2次免疫具有免疫增强作用。新城疫强毒攻击后,免疫鸡呈现良好的免疫保护,其血液 T,B 细胞数量略有上升,维持较高水平,未免疫鸡全部发病死亡,其血液 T,B 细胞数量明显下降。说明攻毒后鸡的免疫保护力与其血液 T、B 细胞数量高低有一定关系。

感染传染性法氏囊病病毒雏鸡T、B细胞数量和功能变化

1日龄雏鸡感染传染性法氏囊病病毒后,外周血液T、B细胞数量明显低于对照鸡;T细胞功能在感染后短时期内明显降低,B细胞功能降低持续时间较长,这说明,感染鸡的体液免疫、细胞免疫功能均下降,尤其体液免疫功能下降更明显。

布氏杆菌抗独特型抗体苗小白鼠免疫试验

用布氏杆菌抗独特型抗体苗(简称二抗苗)进行试验表明,免疫小白鼠酸性α-醋酸萘酯酶阳性T淋巴细胞(TANAE^+)数明显高于对照组(P<0.01),且比19号苗免疫组还高,证实此二抗苗确有增强细胞免疫功能的作用。

布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株建立及免疫原性测定

在建立了布氏杆菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有强保护作用的单抗细胞株A7免疫BALB/C鼠,并进行细胞融合。用竞争抑制ELISA法筛选出5个强阳性孔,经克隆化培养后首次建立了9个布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株。其中,F9株传25代后及液氮冻存复苏后仍能稳定地产生高效价的抗独特型抗体。其IgG类型鉴定为IgG2a,并证实具有抗原“内影象”。以鼠红细胞为载体将抗独特型抗体吸附其表面进行小鼠免疫试验,检测结果表明该抗独特型抗体具有良好的免疫原性,能诱导免疫小鼠产生相当效价抗布氏杆菌抗体(Ab3)。

感染传染性法氏囊病毒雏鸡的免疫抑制及其机理

本实验共用412只滨白雏鸡,分别在1日龄或4周龄时感染 IBDV,检测了雏鸡感染后其外周血液、泪液、气管液、肠液、胆汁中 IgG,IgM 和 IgA 含量、血液 T 细胞免疫功能和脾脏 B 细胞抗体生成功能、血液 T,B 细胞、淋肥细胞数量以及法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、丕氏斑、十二指肠、哈德尔腺、支气管粘膜中浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性 T 细胞(ANAE+T)数量的动态变化,结果如下:(1)雏鸡感染 IBDV 后,法氏囊、脾脏的浆细胞明显减少,脾脏 B 细胞抗体生成功能降低;胸腺、法氏囊、脾脏的 ANAE+T 细胞数量显著下降,说明感染鸡免疫器官的体液免疫功能和细胞免疫功能显著减弱.(2)IBDV 感染雏鸡引起呼吸道和消化道局部免疫组织一哈德尔腺、支气管粘膜、盲肠扁桃体、十二指肠粘膜固有层,丕氏斑的浆细胞和 ANAE+T 细胞较对照鸡显著减少;泪液、气管液、胆汁、肠液中 IgG,IgA,IgM 含量明显下降,表明感染鸡呼吸道和消化道局部的细胞免疫和体液免疫水平均显著降低.(3)感染鸡外周血液 T,B 细胞数量减少,T 细胞功能降低,IgG,IgA,IgM 含量明显下降,表明和标志全身体液免疫和细胞免疫水平降低,是免疫器官细胞免疫和体液免疫功能显著降低的反映和表现.(4)1日龄雏鸡感染 IBDV 后,B 细胞功能抑制时间明显长于 T 细胞,证明感染鸡 B 细胞功能的损害重于 T 细胞.(5)4周龄雏鸡感染 IBDV 引起的免疫抑制程度低于1日龄感染鸡,呈现一定的感染日龄差异.

白细胞介素影响绵羊体外受精胚胎生长发育的研究

研究探讨了三种细胞因子白细胞介素－１β（ｌＬ－１β），白细胞介素－２（ｌＬ－２）和白细胞介素－６（ｌＬ－６）对绵羊体外受精胚胎早期生长发育的影响作用．结果显示，白细胞介素－１β在５００ＩＵ／ｍｌ和１０００ＩＵ／ｍｌ浓度时能够促进绵羊胚胎的囊胚率，白细胞介素－６只有在５０ＩＵ／ｍｌ浓度时才能够促进绵羊体外受精胚胎的囊胚率，白细胞介素－２则对绵羊胚胎的囊胚率无影响．这说明不同细胞因子的加入能够影响绵羊体外受精胚胎的早期生长发育．白细胞介素－１β能够促进绵羊胚胎的囊胚率，其将有助于在绵羊胚胎生产实践中的应用．

牛种布氏杆菌单克隆抗体株的建立

作者选用布鲁氏菌地方株牛种Ⅲ型S_(85)A与SP2/0-Ag14细胞融合,获得7株产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经鉴定,这些单克隆抗体为IgG_(2b)和IgG_3亚类,其中S_(85)A-A_7株所产生的单克隆抗体效价达1∶25×10~4,它除与S_(85)A呈阳性反应外,与其他强毒株均无交叉反应。

抗牛布鲁氏菌独特型抗体在牛体中的免疫应答

首次将新疆分离的布鲁氏菌牛Ⅲ型强毒菌株研制成单克隆抗体。选用ELISA效价高的单克隆抗体A_7免疫家兔,经提纯制成抗独特型抗体疫苗,对杂种牛和土种黄牛进行免疫试验。通过平板凝集、试验凝集和Coomb's试验证明,凝集抗体消失很快,不完全抗体则可维持1年以上,这表明抗细菌性抗体在体内存在时间较长,为独立型疫苗的应用提供了很好的依据。

雏鸡对新城疫疫苗的免疫应答及其免疫保护机理

本实验共用240只1日龄健康雏鸡,分别于14,14和28日龄点眼滴鼻接种 Lasota 疫苗,在免疫后不同时期,采取实验鸡血液、泪液、肠液、气管液和胆汁、脾脏、法氏囊、胸腺、盲肠扁桃体、丕氏斑、十二指肠及哈德尔腺、支气管,检测了相应的 IgG,IgA,IgM 和 HI 滴度。T,B 细胞数量和功能,淋巴细胞数量以及浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性 T 细胞(ANAE^+T)数量的动态变化。实验结果,雏鸡免疫后,脾脏、法氏囊和胸腺中 ANAR^+T 细胞与浆细胞显著增加,消化道和呼吸道相关局部免疫组织中的浆细胞、ANAE^+T 细胞数量也明显上升;与此相应,血液 T 细胞和脾脏 B 细胞免疫功能显著增强;血液 T,B 细胞、淋巴细胞数量显著升高;血清、泪液、气管液、胆汁和肠液中的 IgG,IgA,IgM 含量和 HI 滴度均程度不同地增加。免疫鸡脾脏、盲肠扁桃体和丕氏斑的淋巴小结数量增多,直径增大。这些表明免疫鸡不仅全身和局部的体液免疫反应,而且其细胞免疫应答也显著增强。雏鸡新城疫二免后,其免疫器官和局部免疫组织的浆细胞和 ANAE^+T 细胞进一步增多,血液 T 细胞和脾脏 B 细胞免疫功能也增强;血液 T 细胞。B 细胞与淋巴细胞数及 IgG,IgA,IgM含量和 HI 滴度程度不等地增加;泪液、气管液、肠液和胆汁的前述指标均升高,说明雏鸡 ND二免产生了显著的体液免疫和细胞免疫增强作用。新城疫强毒攻击后,对照鸡免疫器官组织和相应体液中的免疫指标均明显降低。呈现全身和局部免疫机能衰竭,全部死亡。与此相反,二免鸡免疫应答水平进一步提高,明显优于一免鸡,获得可靠的免疫保护,这与其显著增强的全身和局部细胞免疫和体液免疫反应密切相关。

感染传染性法氏囊病毒雏鸡对新城疫疫苗的免疫应答抑制和机理

本研究在雏鸡1日龄时感染法氏囊病毒,14日龄时点眼、滴鼻接种新城疫疫苗,检测了感染鸡ND免疫后其外周血液、泪液、气管液、肠液、胆汁中IgG,IgM,IgA含量,血液T细胞免疫功能和脾脏B细胞抗体生成功能、血清、泪液和气管液HI滴度的变化,测定了血液T,B细胞与淋巴细胞数量以及法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、哈德尔腺、十二指肠粘膜、丕氏斑,支气管粘膜的浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性T细胞(ANAE^+T)数量的动态变化。结果如下: 1)1日龄感染IBDV雏鸡ND免疫后,其法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体、十二指肠粘膜固有层、丕氏斑、哈德尔腺、支气管粘膜固有层的浆细胞数量和脾脏B细胞抗体生成功能均显著降低;外周血液B细胞数量、HI滴度、血清、泪液、气管液、肠液和胆汁IgG,IgA,IgM含量较对照免疫鸡显著减少,这表明感染鸡对ND疫苗的全身和消化道、呼吸道相关局部的体液免疫应答功能显著抑制。 2)感染鸡ND免疫后,其胸腺、脾脏、法氏囊、消化道和呼吸道相关局部免疫组织的ANAE^+T细胞数量、外周血液T细胞免疫功能和T细胞数量均显著低于正常免疫鸡,这说明感染鸡对ND疫苗的全身和局部细胞免疫应答机能显著减弱。 3)ND强毒攻击后,感染鸡的ND免疫保护率明显低于健康免疫鸡,其免疫保护效应降低,与其对ND强毒的全身和消化道、呼吸道局部体液免疫和细胞免疫反应水平显著下降密切相关。

小分子干扰RNA转染效率的初步研究

目的:探讨小分子干扰RNA转染及转染效率的检测方法。方法:化学合成siRNA,转染人脐静脉内皮细胞,通过显微荧光、Western-blot等方法对转染剂的转染效率进行初步的监测和评估。结果:用转染剂siPORTTMNeoFXTM转染FITC标记的阴性对照siRNA和GFP siRNA,具有一定的转染效果,转染效率达35%。结论:检测siRNA转染活性的方法研究,为找到更好的检测方法奠定基础。

感染传染性法氏囊病毒雏鸡新城疫疫苗二次免疫的免疫增强效应

本实验以 IBDV 感染1日龄滨白雏鸡,在感染鸡14和28日龄或14日龄时点眼,滴鼻接种 Lasota 疫苗,测定了其外周血液、泪液、气管液、肠液、胆汁中 IgG,IgM 和 IgA 含量,血清、泪液、气管液 HI 滴度、血液 T 细胞免疫功能和脾脏 B 细胞抗体生成功能、血液 T、B 细胞和淋巴细胞数量以及法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、哈德尔腺、丕氏斑、十二指肠、支气管粘膜的浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性 T 细胞(ANAE^+T)数量的动态变化,结果表明:1.1 日龄感染 IBDV 雏鸡 ND 疫苗二次免疫后,其法氏囊,脾脏、哈德尔腺、支气管粘膜、盲肠扁桃体、丕氏斑、十二指肠粘膜固有层的浆细胞数量、外周血液 B 细胞数量均明显增高,脾脏 B 细胞抗体生成功能明显增强,血清、泪液、气管液中 IgG,IgA,IgM 含量和 HI 滴度、肠液、胆汁的 IgA,IgM,IgG 含量均显著高于感染一次免疫鸡,但明显低于健康对照二次免疫鸡。感染鸡 ND 二免后,法氏囊出现淋巴滤泡增生,脾脏和盲肠扁桃体的淋巴小结数量增多,直径增大。表明感染鸡 ND 二免后,其全身和消化道、呼吸道局部的体液免疫应答水平较感染一次免疫鸡明显增高,呈现免疫增强效应。2.感染鸡 ND 二免后,其免疫器官和消化道,呼吸道局部免疫组织的 ANAE^+T 细胞数量、外周血液 T 细胞数和免疫功能均较感染一免鸡明显升高。但显著低于对照 ND 二免鸡,证明感染鸡 ND 二免后,其全身和消化道、呼吸道局部的细胞免疫应答较感染一免鸡显著增强。3.ND 强毒攻击后,感染二免鸡的免疫保护率明显高于感染一免鸡,低于对照二免鸡,表明 ND 二次免疫对 IBDV 感染鸡的免疫保护力具有明显的加强作用,这与其全身和消化道、呼吸道局部的体液免疫和细胞免疫应答增强密切相关。

抗牛布氏杆菌病独特型抗体苗的研究

众所周知,布鲁氏菌病是一种人畜共患传染病,近年来,羊布鲁氏菌病已得到控制,牛布鲁氏菌病日趋严重,尤在新疆更为突出。据了解,有些牛场发病率竟高达33％以上。为了尽快控制本病,我们在已研制的牛种544A布鲁氏菌单克隆抗体基础上,又将新疆本地分离到的布病牛强毒S_(85A)研制成单克隆抗体,并选出ELISA高效价的中和性单克隆抗体-A_7,免疫家兔。经纯化,加入不同佐剂,配制成抗独特型苗,免疫杂种牛和土种黄牛。通过平板凝集,试管凝集和Coomb’s试验,证明凝集抗体消失很快,不完全抗体则可维持一年以上,表明抗布氏杆菌性抗体在体内存在时间较长,免疫持续期达9个月以上。这为抗独特型抗体苗的应用提供了依据。