延胡索纤溶酶的分离纯化及部分性质

目的 从延胡索（Rhizoma corydalis）中分离纯化具有溶解纤维蛋白活性的单体蛋白单一组分，并对粗酶性质做初步研究。方法利用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换色谱从延胡索中纯化纤溶酶。结果从延胡索中纯化出两种纤溶酶，表观相对分子质量分别为33000和59000。粗酶用丝氨酸蛋白酶抑制剂鉴定为丝氨酸蛋白酶，ED-TA对酶活没有抑制作用。延胡索纤溶酶粗酶体外溶纤性质主要表现为激酶活性，在4～50℃活性稳定，50～75℃酶活有所下降；最适pH值为8．0，在pH3、0左右，仍能保留大部分酶活；能抵抗胰蛋白酶水解和胃蛋白酶的作用。结论延胡索纤溶酶性质稳定，有希望研发成为一种溶栓新药。

一株产纤溶酶芽孢杆菌的鉴定及纤溶酶的分离纯化与性质分析

【目的】从假蕈状芽孢杆菌B-60菌株中纯化具有纤溶活性的单一组分,测定它的N-端氨基酸序列进行比对,并对单一组分的性质进行分析。【方法】利用纤维蛋白平板法检测纤溶酶活性,利用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换色谱从假蕈状芽孢杆菌B-60菌株中纯化纤溶酶。【结果】从该菌株的发酵液中获得了一组纤溶酶单一组分(BpFE),它的表观分子量为34kDa。它在4℃～50℃活性较稳定,50℃以上活性急剧下降;作用最适pH值为pH5～6,在pH5～10活性较稳定,在pH3.0,活性几乎丧失;金属离子Ca2+、Mg2+、Mn2+对酶活有轻微促进作用,Cu2+则强烈抑制酶活。苯甲基磺酰氟(PMSF)完全抑制它的活性。BpFE经胰蛋白酶和胃蛋白酶降解后,活性上升。测得BpFEN-端15个氨基酸序列为VTGTNA VGTGKGVLG,序列比对结果表明,BpFEN-端15个氨基酸序列与来源于蜡状芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、炭疽芽孢杆菌和乳杆菌的细菌裂解酶、中性蛋白酶、水解酶的部分序列同源性为100%。【结论】获得了一组纤溶酶单一组分,其N-端序列比对结果尚未发现与其同源性较高的纤溶酶,这为新型纤溶酶的开发提供了重要的理论依据。