热毒宁注射液雾化吸入改善烟熏诱导的慢性阻塞性肺疾病小鼠肺部炎症的作用及机制

目的:探究热毒宁注射液(RDN)对烟熏诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠肺部炎症的治疗作用及其机制。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定RDN中绿原酸和栀子苷的含量。制备烟熏诱导的COPD小鼠模型,并雾化吸入RDN进行治疗。采用瑞氏染色法检测肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞种类及数量;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理学改变;采用免疫组织化学染色法(IHC)检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6的表达;采用转录组学技术筛选对照组、模型组及RDN高剂量组小鼠肺组织的差异表达基因,并对其进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测Toll样受体4(TLR4)信号通路中相关蛋白的表达水平。结果:RDN中绿原酸和栀子苷的质量浓度分别为4.75、7.60 mg·mL^(–1);RDN能降低BALF中巨噬细胞和中性粒细胞的数量,并能改善小鼠肺间质与肺泡腔出血、肺泡壁水肿、炎性浸润等病理学变化;RDN能抑制肺组织炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达;转录组学测序结果显示,3组小鼠存在149个共有差异表达基因,KEGG富集结果显示其主要涉及IL-17信号通路、TLR信号通路、TNF-α信号通路和核转录因子-κB(NF-κB)信号通路;RDN能降低肺组织TLR4的表达,并能抑制下游相关蛋白p38、c-Jun N末端激酶(JNK)、细胞外蛋白调节激酶(ERK)和p65的磷酸化水平。结论:RDN对烟熏诱导的COPD模型小鼠肺组织炎症反应具有改善作用,机制与其抑制TLR4信号通路有关。

桉柠蒎油抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子产生的作用及其机制研究

目的探究桉柠蒎油(ELP)抑制脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞炎症因子产生的作用及作用机制。方法构建LPS刺激的RAW264.7炎症细胞模型。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用Griess法检测一氧化氮(NO)的产生;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定LPS处理后培养液中炎症因子的浓度;采用Western-blot法检测蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测LPS处理后核转录因子κB亚基(p65)、激活子蛋白1亚基(c-Jun)和干扰素调节因子3(IRF3)的入核情况。结果ELP在6.25~400μg/mL的剂量范围内对LPS处理的RAW264.7细胞活力没有明显抑制作用。ELP(50~300μg/mL)能有效地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白介素-1β(IL-1β)和受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(Rantes)的产生。ELP能剂量依赖性地降低Toll样受体4(TLR4)信号通路关键蛋白kappa B抑制因子激酶α/β(IKKα/β)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p38、p65、核因子kappa B抑制蛋白α(IκBα)、c-Jun和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平。ELP同时能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞p65、c-Jun和IRF3的入核。结论ELP能剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子的产生,其作用机制与阻断TLR4/NF-κB、TLR4/AP-1和TLR4/IRF3信号通路有关。

天山雪莲总酚酸对脂多糖刺激的RAW264.7细胞炎症因子释放的影响及其机制研究

目的:研究天山雪莲总酚酸(PSI)抑制脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞炎症因子释放的作用及其作用机制。方法:采用大孔吸附树脂分离PSI,利用超高效液相色谱法(UPLC)对其进行成分分析。建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型。采用噻唑蓝法检测细胞活力;Griess法检测一氧化氮(NO)的生成;酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症因子释放水平;蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测Toll样受体4(TLR4)信号通路关键蛋白的表达水平;免疫荧光技术检测核转录因子(NF)-κB亚基p65、激活子蛋白1(AP-1)亚基c-Jun和干扰素调节因子3(IRF3)的入核情况。结果:PSI主要含有绿原酸(23.60%),质量浓度为12.50~100.00μg·mL^(-1)时能显著抑制LPS刺激下炎症因子NO、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10、IL6、趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-1α和调节激活正常T细胞表达分泌因子(Rantes)的释放,并能剂量依赖性地降低TLR4信号通路关键蛋白κB抑制因子(IκB)α、IκB激酶(IKK)α/β、p65、TANK结合激酶1(TBK1)、IRF3、p38、胞外信号调节激酶(ERK)1/2及c-Jun的磷酸化水平,同时抑制LPS诱导的p65、c-Jun和IRF3的入核。结论:PSI能抑制LPS刺激下RAW264.7细胞炎症因子的产生,其作用机制可能与抑制TLR4信号通路有关。