转化生长因子β_1和核心蛋白聚糖在胰腺星状细胞中的表达

背景:胰腺星状细胞(PSCs)在胰腺纤维化的进程中具有重要作用,因此有必要对影响该细胞活化的细胞因子进行研究。目的:建立一种从大鼠中分离、培养PSCs的成熟方法,研究原代培养2～3代的传代PSCs中转化生长因子(TGF)-β1及其拮抗剂核心蛋白聚糖的mRNA(转录水平)和蛋白(翻译水平)的表达和分布。方法:取大鼠胰腺组织进行酶消化和不连续密度梯度离心以获得原代PSCs。采用免疫细胞化学染色检测PSCs中α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、结蛋白(desmin)和纤维连接蛋白(FN)的表达;采用免疫细胞化学染色和原位杂交方法检测传代PSCs中TGF-β1和核心蛋白聚糖的蛋白和mRNA的表达。结果:体外成功分离并培养PSCs后,免疫细胞化学染色结果显示该细胞可活化,细胞质中出现α-SMA、desmin和FN阳性表达。在传代PSCs中,TGF-β1mRNA在细胞核和细胞质内均有表达,其蛋白则主要在细胞质内表达:核心蛋白聚糖则无论mRNA或蛋白均主要在细胞核内表达。结论:大鼠PSCs可成功地在体外分离并培养。在培养过程中,该细胞可自发活化并向成纤维样细胞分化。PSCs可自分泌TGF-β1和核心蛋白聚糖,并可能在基因转录水平进行自身调控,从而对胰腺纤维化的形成产生一定影响.

促纤维化细胞因子在纤维化胰腺组织中的表达

目的 揭示转化生长因子 (TGF) β1、结缔组织生长因子 (CTGF)在慢性胰腺炎的动物模型中的表达情况及其与胰腺纤维化的相关性。方法 采用Puig Divi等方法制备慢性胰腺炎大鼠模型 (模型组 ) ,制模后的 3、4、5和 6周取胰腺组织 ,对照组则在 4周取材。分别作苏木精 伊红染色、免疫组织化学 [纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原 (COL Ⅰ )、TGF β1、CTGF]和原位杂交染色 (TGF β1、CTGF)。结果 模型组于 3周后可见局部胰管扩张、胰腺间质纤维组织轻度增生、炎症细胞浸润和腺泡细胞空泡样变 ,小叶内腺泡细胞有局限性纤维化或无变化。 4周时胰管显著增生 ,胰管周围及小叶间和小叶内纤维化伴炎症细胞浸润 ,局部腺体萎缩代之以纤维瘢痕组织。而 5、6周时胰腺纤维化程度与 4周时比较并未见明显增强。免疫组织化学结果显示 ,TGF β1主要分布于间质区成纤维细胞细胞质、间质基质区和炎性细胞浸润区。CTGF分布于腺上皮细胞的细胞质和部分间质成纤维细胞中。原位杂交显示TGF β1mRNA及CTGFmRNA分布部位与免疫组织化学结果相吻合。此外 ,TGF β1、CTGF与代表纤维化严重程度的FN、COL Ⅰ的分布及表达基本相同并成正相关 (P <0 .0 5 )。对照组在4周时仅见脂肪组织浸润。所有结果 3、4两周的差异有显著性 (P <0 .0 1) ,4、

急性髓细胞白血病(M_2b)与染色体8;21易位——附45例报告

为了更加准确诊断急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）的Ｍ２ｂ型，本文联合常规的细胞形态学、细胞化学、细胞遗传学和分子生物学方法对４５例伴ｔ（８；２１）易位的ＡＭＬ患者进行诊断。结果显示：①染色体ｔ（８；２１）易位与Ｍ２ｂ两者关系密切。本组４５例ｔ（８；２１）ＡＭＬ中Ｍ２ｂ占９７．７％。ｔ（８；２１）常伴性染色体丢失，以Ｙ染色体丢失尤为易见。②异常中幼粒特征性改变主要是高度核浆发育不平衡（不成熟的核与成熟的胞浆），占６％～６６％，中位数３３％。３２例可见Ａｕｅｒ小体，６例骨髓嗜酸细胞明显增多（＞５％）。③用逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）技术检测２９例患者的ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因来自ｔ（８；２１）染色体。１例在完全缓解（ＣＲ）后５个月复查ＡＭＬ－ＥＴＯ转阴性，另１例ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因持续存在，３个月后复发。因此认为检测ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因对无ｔ（８；２１）的ＡＭＬ的诊断及微量残留白血病的监测等方面有重要意义。

人类YAC库PCR三维筛选体系的建立及质量考核

为了在知道某个区域、位点、基因或ＤＮＡ片段的部分信息后，能从ＣＥＰＨＹＡＣ库中筛选出与其对应的ＹＡＣ克隆，为进一步研究奠定基础，需要建立一个筛选体系。本文概述了这一筛选体系的建立过程。随后，用两对与已知基因对应的引物进行了筛选验证工作，证明了这一体系的可用性，同时提出了以后筛选的途径，即首先筛选ＹＡＣ库的ＭｅｇａＹＡＣ部分，并以５块板为一组进行筛选。另外，运用荧光原位杂交技术（ＦＢＨ），对ＣＥＰＨＹＡＣ库的质量及其第一代人类基因组物理图谱进行了考察。我们取２６个ＹＡＣ克隆进行ＦＩＳＨ定位，结果其中嵌合体１３个，占５０％。定位错误的克隆有６个，占２３％。非嵌合体且定位正确的共９个，占３５％。

多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率

目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法。方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法,对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测。结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性。91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测,阳性标本数53例,总阳性检测率58.24%;荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例,阳性检出率74.73%;两种方法联合,阳性标本数76例,阳性检出率83.52%。结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率,也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础。

STI571在白血病治疗中耐药机制的研究

应用STI571治疗白血病,开创了肿瘤靶向治疗的新时代,临床研究表明STI571治疗慢性期慢性粒细胞白血病患者有极好疗效,然而在治疗慢粒急变及Ph^+的急性淋巴细胞白血病患者时效果却并不理想。目前研究认为STI571耐药机制包括以下几个方面:通过点突变、BCR-ABL基因扩增等使酪氨酸激酶重新活化;Src家族中LYN激酶高表达、Bruton酪氨酸激酶及ATP合成酶高表达等旁路激活ABL激酶下游信号传导途径;多药耐药基因扩增,使靶部位药物浓度降低及血浆中出现能与STI571结合的αl酸糖蛋白。

实时定量逆转录-聚合酶链反应监测慢性粒细胞白血病患者融合基因转录本水平及其变化

目的探讨实时定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)在监测慢性粒细胞白血病(慢粒)患者微小残留病变、考核疗效以及预测疾病预后方面的应用。方法应用实时定量RT PCR对11例慢粒患者治疗前后融合基因(BCR ABL)转录本水平的变化进行监测,对55例不同病期患者之间的转录本水平进行比较。结果对于慢性期患者,造血干细胞移植后其BCR ABL转录本水平明显下降,甚至检测不到,甲磺酸伊马替尼(格列卫)治疗可获得类似结果,而羟基脲、干扰素α或三尖杉酯碱治疗后,其BCR ABL转录本水平虽有下降但仍维持在较高水平;患者发生急变时,其BCR ABL转录本水平升高约10倍;急变期患者的转录本水平明显高于慢性期或加速期患者。结论实时定量RT PCR方法准确可靠,对于监测慢粒患者的微小残留病变、考核疗效以及预测慢粒急变具有重要的临床应用价值。

急性髓系白血病FLT3基因突变的研究

FLT3（FMS-like tyrosine kinase-3）即FMS样酪氨酸激酶3，是Ⅲ型RTK家族成员之一，其蛋白结构包括5个免疫球蛋白（Ig）样结构域组成的胞外区，1个跨膜区，1个近膜区（JM），以及胞内由激酶插入区分隔而成的两个酪氨酸激酶（TK）区。目前研究发现，FLT3基因突变主要包括两种形式：串联重复突变（FLT3-ITD）和Asp835点突变，在急性白血病尤其是急性髓系白血病（AML）发生中起重要作用。我们较为全面地分析273例AML患者FLT3基因突变和单核苷酸多态性（SNP），希望最终能为靶向治疗AML提供线索。

急性髓系白血病患者PDGFRβ和SHIP基因突变及其单核苷酸多态性研究

目的探讨Ⅲ型受体酪氨酸激酶信号通路中 PDGFRβ以及 SHIP 等基因突变和单核苷酸多态性(SNP)在急性髓系白血病(AML)发病中的意义。方法采用基因组 PCR、RT-PCR、直接测序以及基质辅助激光吸收电离子化-飞行时间质谱技术(Mass-ARRAY)等方法,在273例 AML 患者中检测 PDGFRβ以及 SHIP 等基因突变和 SNP。结果 PDGFRβ R685C 和 SHIP Q1153L 为新发现的突变,阳性率分别为0.73% 和0.36%。结论 PDGFRβ R685C 和 SHIP Q1153L 突变有可能参与急性髓系白血病的发病机制。

儿童B系急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因的研究

目的了解ＴＥＬＡＭＬ１融合基因在儿童Ｂ系急性淋巴细胞白血病（急淋）中的发生率及其与临床诊断和预后的关系，并比较巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和双标记荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）两种方法。方法采用巢式ＲＴＰＣＲ和双标记ＦＩＳＨ技术检测ＴＥＬＡＭＬ１融合基因。结果和结论ＲＴＰＣＲ检测发现儿童Ｂ系急淋中２２．５％（４０例中９例）的患者有ＴＥＬＡＭＬ１融合基因转录本，这类患者预后较好，完全缓解率达１００％。ＲＴＰＣＲ和ＦＩＳＨ技术是检测ＴＥＬＡＭＬ１的有效方法，并为临床诊断和预后估计提供了有一定价值的手段。

急性早幼粒白血病复合型染色体易位及其临床预后相关性的研究

目的研究急性早幼粒白血病（ａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ，ＡＰＬ，Ｍ３）中复合型染色体易位与临床治疗、预后的关系。方法应用常规核型分析、荧光原位杂交和逆转录酶／聚合酶链反应，检测了３例ＡＰＬ，Ｍ３。结果发现３例均有早幼粒白血病基因－维甲酸受体α基因（ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａｇｅｎｅ－ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒαｇｅｎｅ，ＰＭＬ－ＲＡＲα）融合基因转录本；核型呈复合型易位，除有１５和１７号染色体易位外还累及了５、１１、１６、２２号多条染色体，并与临床预后有一定相关性。结论对ＡＰＬ复合型易位的检测和深入研究。

辐射杂种细胞系技术在基因定位中的应用

利用辐射杂种细胞系 (Radiationhybrid ,简称RH)技术定位 2 6个所克隆的与造血调控有关的新基因 ,其中 2 3个定位明确 ,3个无法定位 .研究证明辐射杂种细胞系技术具有快速、精确、简便、可重复性等优点 ,是基因定位研究中一强有力的技术 .

急性粒-单核细胞白血病CBFβ-MYH11融合基因转录本和inv(16)的检测

目的：探讨ｉｎｖ（１６）和ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因在急性髓系白血病Ｍ４ＥＯ型的临床诊断、预后判断中的意义。方法：用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术分别检测急性粒－单核细胞白血病（Ｍ４）患者的ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因转录本和ｉｎｖ（１６）。结果：在１５例中国人Ｍ４中，１０例患者用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因转录本，其中９例不伴异常嗜酸粒细胞的Ｍ４中有１例阳性；１例伴异常嗜酸粒细胞增多（Ｍ４ＥＯ）为阳性。随访该例完全缓解２个月后，其ＰＣＲ仍持续阳性。用ＦＩＳＨ技术检测的９例Ｍ４中得到的２例阳性病例，与ＰＣＲ方法测得的结果完全一致。结论：对Ｍ４患者无论其经典的染色体核型分析有无１６号染色体异常的提示，都应用ＲＴ－ＰＣＲ和ＦＩＳＨ方法检测ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因进行筛选，这对Ｍ４的临床诊断、预后判断等具有重要临床价值。

Analysis of hypermutation of the 5' noncoding region in the BCL-6 gene

目的 研究BCL 6基因突变在B细胞非Hodgkin’s淋巴瘤 (B NHL)发病中的作用。方法 联合应用聚合酶链反应 变性梯度凝胶电泳 (PCR DGGE)和DNA测序等技术 ,对 4 0例B NHL的两个特殊亚型 :弥漫性大细胞性淋巴瘤 (DLCL)和滤泡性淋巴瘤 (FL)患者BCL 6基因 5’非编码区的突变进行检测。结果 在DLCL中BCL 6基因突变率为 2 5 7% ,9例阳性病例的突变类型均为碱基替换 ,其单碱基改变率为 (0 56- 1 10 )× 10 2 /bp。结论 BCL 6基因 5’调控区的改变为高频率、多位点的体细胞突变 ;

Application of radiation hybrid in gene mapping

Radiation hybrid (RH) mapping technique was exploited to determine chromosome locations of 26 human novel full length cDNAs recently cloned. All these cDNA clones were isolated from human cord blood CD + 34 cells and may be related to regulation of hematopoiesis. 23 genes were successfully mapped to chromosomal positions, while RH analyses were not possible in the remaining 3 cases. RH technique is indeed a powerful tool for mapping novel cDNA sequences due to its rapidity, precision, convenience and reproducibility.