hASCs的单克隆培养及干细胞相关标志物表达的实验研究

目的通过对人体脂肪组织来源干细胞(hASCs)进行单克隆培养,以获得单克隆hASCs。并比较不同克隆干细胞相关标志物的表达。方法①临床手术切取脂肪组织,经胶原酶消化法原代培养,细胞培养并传至第2代后,有限稀释法进行克隆形成实验。②针对获得的单克隆hASCs,用流式细胞仪检测不同克隆CD29、CD34、CD44、CD54、CD106、ABCG2的表达。结果①通过克隆形成实验共获得10个单克隆细胞群,并成功扩增到第9代后冻存。②不同克隆细胞群体具有相似的成纤维细胞样形态,但增殖活力各异。③干细胞相关标志检测显示:各个群体均高表达CD29(92.9±7.4%)、CD44(94.6±6.8%),低表达ABCG2(2.5±1.4%),但CD34、CD54和CD106的表达在不同群体间有明显差异。结论酶消化法获得hASCs是含有不同分化潜能干细胞以及其他多种细胞的混合群体。用单克隆培养的方法可能获得纯化的单一细胞群,不同的克隆之间的表面抗原表达既有共性和又有差异,这种差异可能与不同克隆间分化潜能的不同相关。

心肌钙蛋白I对蒽环类化疗的乳腺癌患者心脏毒性的预测价值

目的评估心肌钙蛋白I(CTnI)对接受含蒽环类方案化疗的乳腺癌患者心脏毒性的预测价值。方法收集186例在南方医院接受含蒽环类方案化疗的乳腺癌患者的病案资料,记录患者化疗前和每个化疗周期CTnI浓度及化疗前和首次化疗开始后第2、4、6月的左心室射血分数(LVEF)。据文献报道,当患者血清CTnI≥0.1ng/ml时,心脏毒性发生率明显升高,据此我们将患者定义为两组,化疗期间血清CTnI≥0.1ng/ml者为CTnI+组(60例),小于0.1ng/ml者为CTnI-组(126例)。结果所有患者均未出现充血性心力衰竭(CHF)。LVEF较化疗前下降幅度超过10%的患者CTnI+组出现16例,占26.7%(16/60),而CTnI-组出现7例,占5.6%(7/126),两组间有统计学差异(P<0.01)。结论 CTnI可作为早期预测蒽环类化疗药物引起心脏毒性的指标。

“三步法”诊断乳腺炎71例

乳腺炎是一种不管什么原因引起的伴或不伴感染的乳腺炎症,包括感染性乳腺炎、非感染性乳腺炎、癌性乳腺炎,其诊治的最终目的是排除癌症和对症治疗[1]。本文回顾分析我院2009年10月至2011年3月住院诊治的71例乳腺炎病例,旨在对乳腺炎诊治思路进行讨论。

健脑康胶囊人体耐受性试验

目的评估健康志愿者口服健脑康胶囊后的安全性。方法共32名志愿者依注册顺序分组,安慰剂对照,双盲服药。18名健康志愿者分5个剂量组分别单次口服健脑康胶囊;14名健康志愿者分2个剂量连续7d口服健脑康胶囊。结果18名单次口服试验者给药后24 h体格检查、生命体征检查未见异常,其中300 mg组(>临床推荐剂量4倍)、375 mg组(>临床推荐剂量5倍)各有1名受试者发生轻度的心电图变异,375 mg组2名受试者有轻度头痛和胃部不适。14名多剂量组受试者连续服药后未发生与健脑康胶囊相关的不良事件。结论健康人体口服健脑康胶囊剂量应低于每次225mg安全性良好。

表没食子儿茶素没食子酸酯对乳腺癌MCF-7细胞的恶性行为及MT1-MMP表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatichin-3-gallate,EGCG)对乳腺癌MCF-7细胞株恶性行为及膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)的影响并探讨其可能机制。方法:构建MT1-MMP真核表达载体转染的MCF-7。蛋白印迹技术检测细胞内MT1-MMP蛋白的表达情况。Transwell法检测细胞株侵袭能力。CCK-8法检测细胞增殖能力。实验中将MCF-7细胞株分为3组:(1)未转染组;(2)空白质粒组;(3)转染组。将各组实验结果进行对比分析。结果:蛋白印迹显示,转染后MCF-7细胞株检测到MT1-MMP蛋白的表达,加入EGCG后MT1-MMP表达受抑制。侵袭实验及CCK-8实验结果显示,表达MT1-MMP蛋白的MCF-7细胞株的细胞侵袭及增殖能力明显高于未转染组及空白质粒组,而加入EGCG后转染组侵袭及增殖能力明显降低,且具有浓度依赖性。结论:EGCG对乳腺癌细胞侵袭力及增殖能力具有抑制作用,其机制可能与抑制MT1-MMP蛋白表达有关。

曲妥珠单抗对HER-2过表达乳腺癌细胞株mTOR信号通路影响的观察

目的:探讨曲妥珠单抗对HER-2过表达乳腺癌细胞株mTOR信号通路的影响。方法:在培养的乳腺癌细胞株MDA-MB-453中加入曲妥珠单抗,采用蛋白质印迹法检测细胞中mTOR、S6、4EBP1和Akt的蛋白磷酸化水平,同时检测该药对MDA-MB-453增殖及克隆形成的影响。结果:乳腺癌细胞株MDA-MB-453在加入曲妥珠单抗作用下,mTOR、S6、4EBP1和Akt磷酸化明显受抑制,并具有浓度依赖性;乳腺癌细胞株MDA-MB-453在加入曲妥珠单抗后,细胞相对增殖率随着药物浓度增大由(77±6.3)%降至(21±1.5)%,克隆形成率随着药物浓度增大由(55±4)%降至(4±1)%。结论:曲妥珠单抗可通过抑制mTORC1和mTORC2信号通路,从而抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-453的生长与增殖。

表达MT1-MMP的乳腺癌细胞株对蒽环类药物敏感性研究

目的观察表达MT1-MMP的乳腺癌细胞株对蒽环类化疗药物敏感性的影响。方法用脂质体Lipofectamine 2000将pcDNA3.1-MT1-MMP真核表达载体转染乳腺癌细胞株MDA-MB-453,然后用含G418的培养基筛选获得过表达MT1-MMP的乳腺癌细胞株。蛋白印迹(Western blotting)技术检测MDA-MB-453细胞内MT1-MMP的表达情况。四唑蓝(MTT)法检测各组细胞对化疗药物的敏感性。结果 Western blotting实验证实,重组载体pcDNA3.1-MT1-MMP真核表达载体成功转入乳腺癌细胞内,并稳定过表达MT1-MMP。MTT法检测发现,阿霉素(ADH)、表阿霉素(EPI)、吡喃阿霉素(THP)转染组细胞的抑制率分别为41.38±1.34%、37.69±1.93%和57.96±3.19%,均明显低于未转染组(70.22±2.55%、70.35±1.21%、76.97±2.70%)和空白质粒组(68.94±1.89%、69.43±1.27%、73.06±1.65%,P<0.05)。结论表达MT1-MMP的乳腺癌细胞株MDA-MB-453对蒽环类化疗药物具有耐药性,MT1-MMP有可能成为一个新的蒽环类化疗药物敏感性预测因子。