circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的 探讨circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法 采用荧光原位杂交(FISH)实验及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circRNA CCND1在HepG2细胞及L02细胞中的表达情况;进一步干扰及过表达circRNA CCND1后,通过qRT-PCR检测circRNA CCND1在HepG2细胞中的表达情况,CCK-8法和EDU法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况。结果 HepG2细胞circRNA CCND1相对表达量较LO2细胞高(P <0.05)。Si-circRNA CCND1组circRNA CCND1相对表达量较Control组和Si-NC组下降(P <0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组和Oe-NC组升高(P <0.05)。各组细胞培养0、24、48、72和96 h后细胞增殖活性比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)各组细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P <0.05);(3)各组细胞增殖活性变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与Control组及Si-NC组比较,Si-circRNA CCND1组细胞凋亡率升高(P <0.05),G_(0)/G_(1)期比值升高(P <0.05),S及G_(2)/M期比值下降(P <0.05);与Control组及Oe-NC组比较,OecircRNA CCND1组细胞凋亡率下降(P <0.05),G_(0)/G_(1)期比值下降(P <0.05),S及G_(2)/M期比值升高(P <0.05)。Si-circRNA CCND1组细胞侵袭数、细胞迁移数较Control组、Si-NC组少(P <0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组及Oe-NC组多(P <0.05)。结论 circRNA CCND1能够促进人肝癌细胞HepG2细胞增殖、侵袭和迁移,抑制细胞凋亡。

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)促进同型半胱氨酸致肝细胞自噬作用

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携带双荧光蛋白和LC3(mRFP-GFP-LC3)基因的腺病毒,激光扫描共聚焦显微镜技术观察细胞内自噬流水平变化,实时荧光定量PCR检测lncGAS5的表达水平。转染lncGAS5小干涉RNA(si-lncGAS5)及阴性对照小干涉RNA(si-NC),并用Hcy处理,再次检测LC3B和P62及自噬体的变化。结果与对照组比较,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值增加,P62蛋白表达降低,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量增加,lncGAS5表达升高。敲低lncGAS5后,LC3BⅡ/LC3BⅠ比值减小,P62蛋白表达升高,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量减少。结论 lncGAS5促进Hcy致肝细胞自噬。

医院开设检验门诊可行性调查研究

调查研究医院开设检验门诊的可行性。通过设计调查问卷,考虑不同性别、不同年龄段等因素,随机选择我市某医院的400名门诊患者进行问卷调查,利用SPSS软件进行统计分析。在被调查的患者中,94.47%的患者认同开设检验门诊。不同年龄、性别与检验门诊开设认同情况无关(P>0.05);检验门诊开设认同情况与三个现状因素有关,即就医流程、患者检查频率、检验医师接受度;与三个有利因素相关,即提高看病效率,增加检验医师与患者接触,提高患者检查意愿(P<0.05)。患者检查频率和检验医师接受度为检验门诊开设提供有利基础,检验门诊可以提高看病效率,增加检验医师与患者接触,提高检查意愿,所以患者认为开设检验门诊可行。

脂肪酸结合蛋白4在同型半胱氨酸致大鼠心肌细胞焦亡中的作用

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况;采用qRT-PCR检测FABP4 mRNA表达变化;采用免疫荧光染色法检测焦亡相关蛋白的表达变化;用FABP4抑制剂(BMS-309403)处理心肌细胞,然后将细胞分为对照组(0 mmol/L Hcy)、Hcy组(3 mmol/L Hcy)及Hcy+BMS-309403组(3 mmol/L Hcy和50μmol/L BMS-309403),再次检测焦亡相关蛋白的表达水平。结果 Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显升高(P<0.05);qRT-PCR结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4表达水平明显升高(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,Hcy组NLRP3、caspase-1、IL-1β荧光强度明显增强。加入FABP4抑制剂(BMS-309403)同时给予Hcy干预后,与Hcy组比较,Hcy+BMS-309403组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论 FABP4可能对Hcy诱导的大鼠心肌细胞焦亡有促进作用。

TLR4/NF-κB信号通路对CBS^(+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响

目的:探讨TLR4/NF-κB信号通路对胱硫醚β-合成酶(CBS)基因杂合敲除(CB^(S+/-))小鼠非酒精性脂肪性肝病形成的影响。方法:随机选取4周龄CBS基因正常(CBS+/+)小鼠(n=6)及CB^(S+/-)小鼠(n=6),均给予高蛋氨酸饮食12周。应用全自动生化分析仪检测小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及同型半胱氨酸(Hcy)水平;分离肝脏并计算肝指数(肝重/体重);ELISA法检测小鼠肝脏组织TC及TG含量变化;苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察小鼠肝脏结构和脂质改变;RT-qPCR和Western blot检测小鼠肝组织中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达;Pearson相关性分析评估小鼠肝脏中TLR4和NF-κB表达与TC和TG含量的相关性。结果:与CBS+/+组小鼠相比较,CB^(S+/-)组小鼠血清Hcy水平升高(P<0.05),肝指数升高(P<0.05),肝组织及血清中TC和TG含量增加(P<0.05或P<0.01);HE和油红O染色结果表明CB^(S+/-)组小鼠肝脏脂肪变性明显;TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);TLR4和NF-κB分别与小鼠肝脏中TC和TG含量呈正相关。结论:TLR4/NF-κB信号通路在CB^(S+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病的形成过程中发挥重要作用。

miR-5088-5p在同型半胱氨酸致肝细胞焦亡中的保护作用研究

目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平;采用qRT-PCR检测miR-5088-5p的表达水平;将CBS^(+/-)小鼠和CBS^(+/+)小鼠给予高蛋氨酸饮食12周,采用全自动生化仪检测小鼠血清中Hcy水平;采用免疫荧光检测小鼠肝组织中焦亡相关蛋白的表达水平。结果与Control组相比,Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平增加(P<0.01);miR-5088-5p表达水平降低(P<0.01);转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic并给予Hcy干预后,与Hcy组相比,miR-5088-5p NC+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达无差异,与miR-5088-5p NC+Hcy组相比,miR-5088-5p mimic+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05);与CBS^(+/+)小鼠相比,全自动生化分析仪结果显示CBS^(+/-)小鼠血清Hcy水平明显升高(P<0.01),免疫荧光染色结果显示CBS^(+/-)组小鼠肝脏中NLRP3、caspase 1、IL-1β荧光强度增高(P<0.01)。结论miR-5088-5p对同型半胱氨酸诱导的肝细胞焦亡具有保护作用。