“2015春季——当代书画名家邀请展”颜世举作品选登

颜世举，生于1953年5月，山东临沂人，笔名左岩，号师汉斋主。现为中国书法家协会会员，中国乌金书画院常务副院长，新加坡新神州书画研究院高级院十，东方美术研究院客座教授。精隶书，擅行草。书法作品先后发表于《书法报》《青少年书法报》《羲之书画报》《洗砚池》《巅峰艺术》《辉煌山东人》和《中外画刊》等多家报刊。《青少年书法报》“国展菁华”栏目曾做专题报道，书法作品人刻《翰园碑林》《圣泉碑林》和《黄河碑林》．并获“黄河碑林奖”。有大量作品被美国、加拿大、韩国、日本及台湾、香港等国家和地区友人及诸多博物馆收藏．并出版《颜世举书法作品集》。

microRNA-22抑制SIRT1表达对调控软骨细胞衰老的影响

目的研究microRNA-22在骨关节炎中对软骨细胞衰老的影响。方法原代培养人骨关节炎软骨细胞;软骨细胞转染microRNA-22模拟物、抑制物,通过MTT实验检测microRNA-22对于软骨细胞增殖活性的影响,通过半乳糖苷酶染色实验检测microRNA-22对于软骨细胞衰老的影响,通过Western blot检测microRNA-22对于靶基因SIRT1,以及细胞衰老标志物P16蛋白表达的影响。结果(1)与对照组软骨细胞相比,转染microRNA-22模拟物可显著抑制软骨细胞增殖速率,转染microRNA-22抑制物可促进软骨细胞增殖(P<0.01);(2)与对照组软骨细胞相比,转染microRNA-22模拟物可显著增加半乳糖苷酶染色阳性软骨细胞比例,促进软骨细胞衰老,转染microRNA-22抑制物可降低半乳糖苷酶染色阳性软骨细胞比例,减缓软骨细胞衰老(P<0.01);(3)与对照组软骨细胞相比,转染microRNA-22模拟物可显著抑制SIRT1蛋白表达水平,同时促进P16蛋白表达,转染microRNA-22抑制物可促进SIRT1蛋白表达,抑制P16蛋白表达水平(P<0.01)。结论在骨关节炎软骨细胞中,microRNA-22可抑制软骨细胞增殖,并通过抑制SIRT1蛋白表达、促进P16蛋白表达,促进软骨细胞衰老,从而在骨性关节炎的发生与进展中扮演了重要角色。

铁路网络安全应急预案数字化平台研究

针对传统网络安全应急预案无法实现计算机辅助决策和自动执行的问题,基于模块化设计、机器学习技术,研究铁路业务环境的网络安全应急预案数字化平台,实现应急预案数据采集处理、应急预案生成和应急预案执行3个功能,并针对数据采集处理中的初始日志数据,基于机器学习和关联分析技术,从日志组和日志序列两个维度设计了日志异常检测方法。铁路网络安全应急预案数字化平台涵盖了从初始数据检测到发现异常、评估风险、生成预案、执行预案和生成问题报告等一系列安全处置流程,为铁路网络环境安全应急预案数字化平台建设提供了一种新的思路。

IL-8在循环肿瘤细胞自我种植促进人骨肉瘤进展中的作用机制

目的:探讨IL-8在循环肿瘤细胞自我种植促进人骨肉瘤进展中的作用。方法:免疫组织化学SP法检测30例临床骨肉瘤及10例骨软骨瘤病例肿瘤组织中IL-8表达;建立骨肉瘤原位荷瘤裸鼠模型后,实验组尾静脉注射红色荧光蛋白标记的肿瘤细胞(RFP-F5M2),对照组注射PBS,分别于第2、4、8周后将处理组原位瘤体冰冻切片置于荧光显微镜下观察自我种植细胞荧光强度;对原位肿瘤进行组织块法原代培养,细胞免疫荧光半定量检测IL-8表达水平。结果:93.3%骨肉瘤组织中IL-8表达阳性,骨软骨瘤中IL-8表达均为阴性。冰冻切片显示,随着时间增加,循环肿瘤细胞自我种植现象明显增加,实验组中第2、4、8周原位灶原代培养细胞免疫荧光显示IL-8表达量逐渐增加,并较对照组具有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-8在循环肿瘤细胞自我种植促进人骨肉瘤细胞增殖及转移中发挥着重要作用,可为骨肉瘤患者早期诊断和治疗提供一个新的策略。

YAP在骨肉瘤细胞中的表达及定位

目的:研究YAP在骨肉瘤细胞中的表达情况和定位。方法:使用SOSP9607、MG63、U2-OS骨肉瘤细胞系和h FOB1.19成骨细胞系,进行qRT-PCR、Western blot实验和荧光共聚焦显微镜观察YAP的表达情况和所在的具体细胞位置。结果:YAP在骨肉瘤细胞中表达量非常高,高于正常的成骨细胞h FOB1.19。YAP在骨肉瘤细胞系中主要表达于细胞核内,而在成骨细胞系中主要表达于细胞质。结论:YAP在骨肉瘤细胞中高表达,在成骨细胞中低表达。在肿瘤细胞中主要位于细胞核内,而在成骨细胞系中主要表达于胞质内。可以推断YAP进入细胞核内,结合下游靶基因,促进肿瘤细胞的生长,参与骨肉瘤细胞的发生。这一发现可以为治疗骨肉瘤提供新的靶点。

miR-194慢病毒表达质粒的构建及对人骨肉瘤细胞系U2-OS转移的相关研究

目的:通过构建携带针对miR-194的慢病毒沉默及过表达载体,研究miR-194对骨肉瘤细胞转移的影响。方法:以miR-194前体及成熟体序列为模板,设计引物,进行PCR扩增,酶切后克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染293T细胞,包装慢病毒颗粒,检测滴度,最终对人骨肉瘤细胞系U2-OS进行感染。获取稳定感染细胞后,进行Transwell、划痕等实验。结果:1)慢病毒表达质粒构建成功,沉默表达及过表达重组慢病毒的滴度分别为4×108TU/mL及1.5×108TU/mL;2)稳定过表达miR-194的人骨肉瘤细胞系U2-OS的转移能力较其他组有明显降低(P<0.01)。结论:成功构建了miR-194慢病毒表达载体,miR-194的表达水平对U2-OS细胞的转移能力具有显著影响,miR-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点。

人microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒载体的构建及对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607生物学特性的影响

目的:通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系SOSP-9607,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为探索microRNA-194作为骨肉瘤生物治疗的新靶点提供理论和实验依据。方法:构建沉默及过表达microRNA-194的慢病毒载体;获得稳定感染的细胞株,改变细胞增殖相关生物学特性。结果:PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确,过表达及抑制过表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml;microRNA-194沉默的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞增殖速度相较于其对照组明显上升;过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞增殖速度显著下降(P<0.01)。MicroRNA-194沉默的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞凋亡率相较于其对照组明显下降,过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。与对照组比较,过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少(P<0.01)。结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制过表达慢病毒表达载体;miR-194的表达水平对SOSP一9607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。MicroRNA-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点,但该基因对骨肉瘤发生发展的作用及其机制尚待进一步研究。

MicroRNA-194过表达与抑制表达慢病毒载体的构建及对骨肉瘤细胞转染与筛选的方法学研究

目的:构建针对人microRNA-194过表达及抑制表达的慢病毒表达载体,寻找与探讨感染人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os的最佳步骤和方法。方法:利用PCR方法调取相应目的基因进行酶切,经电泳回收后与目的基因进行连接,产物转化细菌感受态细胞,对克隆进行PCR鉴定和测序对比分析后,构建相应microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒表达载体;在人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os转染及筛选过程中,根据不同阶段及浓度设定相应实验组,并设相应对照组。倒置显微镜观察转染效率,筛选情况,进行比较。结果:PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确。过表达及抑制表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml。感染复数(multiply of infection,MOI)值测定,实验组及对照组转染效率无明显差异,获得MOI值及感染时间数据。通过新的综合设计,经筛选后获得转染效率满意的目的克隆细胞。结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒表达载体,并通过新的综合考虑设计,对人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os进行转染和筛选后,可较快和较高效率获得满意目的细胞。

趋化因子受体CCR7在骨肉瘤组织中的表达和临床意义

目的:研究CCR7在人骨肉瘤组织中的表达情况,并探讨CCR7表达与临床病理之间的关系。方法:收集临床50例骨肉瘤组织及20例骨软骨瘤组织,使用免疫组织化学方法检测其CCR7的表达水平。结果:CCR7在骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织中的阳性表达率分别为80.00%和15.00%。CCR7阳性表达和骨肉瘤肿瘤大小及转移密切相关(P<0.05),而与年龄、性别、临床分期及组织学分型没有明显关系(P>0.05)。结论:骨肉瘤组织中CCR7高表达预示着其在肿瘤增长和肿瘤转移可能起到一定的作用。因此CCR7可能会成为临床上治疗骨肉瘤一个新的靶点。

敲低趋化因子受体7(CCR7)抑制MG63骨肉瘤细胞的增殖和侵袭并诱导其凋亡

目的研究小干扰RNA(siRNA)靶向抑制趋化因子受体7(CCR7)表达对MG63人骨肉瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法设计并合成靶向抑制CCR7表达的siRNA,转入MG63细胞后,采用Western blot法检测CCR7蛋白水平,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖,TranswellTM侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果 MG63细胞转染CCR7-siRNA后,细胞CCR7表达明显下调;同时细胞增殖明显减弱,侵袭和迁移能力明显下降,且细胞凋亡率升高。结论下调MG63骨肉瘤细胞的CCR7,可明显抑制细胞增殖、侵袭和迁移,并能诱导细胞凋亡。

POEMS综合征3例

POEMS综合征是一种罕见的与浆细胞异常有关的副肿瘤综合征,以多发性神经病变(polyneuropathy)、器官肿大(organomegaly)、内分泌系统病变(endocrinopathy)、M蛋白(M protein)和皮肤改变(skin changes)为主要特征,由Bardwick等[1]在1980年根据其主要临床表现,分别取英文首字母排列而成.

认知疗法对截肢患者病耻感的影响

目的探讨认知疗法对截肢患者病耻感的影响。方法选取2013-10至2017-10于医院骨科行截肢术患者48例,男30例,女18例。进行随机化分组,干预组(24例)进行认知疗法的干预及常规的护理宣教,对照组(24例)实行常规护理宣教,利用量表对两组患者的抑郁、焦虑、病耻感、生活质量进行评分对比。结果两组年龄、性别、截肢部位差异无统计学意义(P>0.05),干预组与对照组抑郁、焦虑、病耻感评分及生活质量具有显著统计学差异(P<0.05)。结论认知疗法能降低截肢患者的病耻感,改善患者的抑郁、焦虑情绪,提高患者的生活质量。

microRNA-22对调控软骨细胞自噬的影响及其在骨关节炎发病中的作用机制

目的探讨microRNA-22对软骨细胞自噬的影响及其在骨关节炎(OA)发病中作用机制。方法原代培养人健康、OA软骨细胞,荧光定量PCR检测microRNA-22在健康、OA软骨细胞中的表达水平;Western blot检测健康、OA软骨细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Ⅰ的表达水平;软骨细胞转染microRNA-22模拟物、抑制物,平板克隆形成实验检测microRNA-22对软骨细胞活性的影响,Western blot检测软骨细胞自噬相关蛋白LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ及Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)的表达水平。结果荧光定量PCR检测结果显示,OA软骨细胞(14例)中microRNA-22表达含量(2.50±0.39)显著增高(P<0.01),约为健康软骨细胞(12例)(0.98±0.25)的2.5倍。Western blot检测结果显示,与健康软骨细胞相比,OA软骨细胞自噬相关蛋白LC3B的Ⅱ类亚型含量降低;OA软骨细胞(4例)LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值为1.25±0.13,健康软骨细胞(4例)LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值为1.85±0.21,差异具有统计学意义(P<0.01)。平板克隆形成实验检测结果显示,与空白对照组(107.33±14.3)相比,软骨细胞转染miR-22模拟物组细胞克隆形成数量(75.67±11.36)降低,软骨细胞转染miR-22抑制物组(128.5±9.95)增高,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示:与空白对照组细胞相比,miR-22模拟物组软骨细胞中LC3B-Ⅱ含量降低(1.50±0.20),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值降低(1.45±0.13),Ⅱ型胶原CollagenⅡ的表达水平降低(0.51±0.09);miR-22抑制物组软骨细胞中LC3B-Ⅱ含量增高(2.36±0.19),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值增高(2.30±0.08),同时Ⅱ型胶原CollagenⅡ的表达水平增高(1.31±0.03),以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论microRNA-22抑制软骨细胞自噬,从而促进骨性关节炎的发生与进展。

siRNA干扰FoxM1基因表达对人骨肉瘤MG63细胞增殖与凋亡影响研究

目的通过抑制骨肉瘤细胞株MG63中FoxM1基因表达,观察对骨肉瘤细胞系增殖与凋亡的影响。方法采用蛋白质印迹法检测不同人骨肉瘤细胞株MG63和SOSP-9607中FoxM1基因的表达。将骨肉瘤细胞株MG63分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组转染FoxM1特异性siRNA(FoxM1-siRNA),阴性对照组转染阴性对照siRNA,空白对照组不做处理。实时-聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法检测转染前后FoxM1基因在mRNA及蛋白表达水平的变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果人骨肉瘤细胞株MG63和SOSP-9607中存在FoxM1基因的表达。实验组MG63细胞转染siRNA后,FoxM1的mRNA表达为0.39±0.09,低于阴性对照组的0.91±0.07,t=7.92,P<0.001;也低于空白对照组的0.96±0.08,t=8.68,P<0.001。实验组FoxM1蛋白表达为0.31±0.06,显著低于阴性对照组的0.81±0.10,t=7.20,P<0.001;也低于空白对照组的0.89±0.09,t=8.35,P<0.001。实验组MG63细胞增殖率为0.36±0.03,显著低于阴性对照组的0.61±0.02,t=12.86,P<0.001;也低于空白对照组的0.65±0.02,t=14.92,P<0.001。实验组MG63细胞凋亡率为(13.69±1.15)%,显著高于阴性对照组的(2.38±0.90)%,t=14.16,P<0.001;也高于空白对照组的(2.87±0.86)%,t=13.54,P<0.001。结论人骨肉瘤细胞株中存在FoxM1蛋白的表达;特异性siRNA可下调骨肉瘤细胞株MG63中FoxM1基因的表达,对细胞的增殖具有负性调控作用,并能诱导细胞凋亡。

microRNA-15a模拟物对人关节软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的:近年来研究表明,关节软骨细胞凋亡在骨关节炎发病过程中起到了重要的作用,本文旨在探讨microrna-15a模拟物对于原代人膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法:取人外伤性截肢后的膝关节软骨,采用双酶消化法分离获得人膝关节软骨细胞,并进行体外培养,通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定。将培养的软骨细胞传代后取第1代细胞,分为实验组和对照组,实验组采用mir-15a模拟物(has-mir-15a mimics)转染软骨细胞,上调软骨细胞内mir-15a的表达量;对照组分为阴性对照组、空白对照组。采用MTT法测定细胞增殖曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:原代细胞中细胞呈多角形、圆形与梭型,贴壁生长;甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,Ⅱ型胶原染色胞质呈黄褐色,为特异性染色。经统计学分析,实验组与对照组相比增殖速率明显下降(P<0.05)。实验组凋亡率(7.13%±0.57)与阴性对照组凋亡率(2.66%±0.15)相比明显增高(P<0.05)。结论:采用双酶消化法成功分离并培养具有生物学特性的原代人膝关节软骨细胞,通过转染mir-15a模拟物外源性增加关节软骨细胞内mir-15a表达量可显著促进其凋亡并抑制其增殖,为阐明骨关节炎发病机制提供了新的理论依据,为临床治疗提供了新的靶点。

卵巢切除术构建大鼠骨关节炎合并骨质疏松模型的可行性

目的:尝试用单纯卵巢切除术建立骨性关节炎(OA)合并骨质疏松症(OP)动物模型。方法:对SD大鼠应用卵巢切除法进行骨性关节炎与骨质疏松模型的制作,饲养过程中进行不同强度的驱赶,3个月后收获大鼠组织标本。通过大体标本、组织切片以及改良Mankin评分系统对关节炎进行评价,应用双能X线对骨质疏松进行评价。结果:三组模型大鼠出现不同程度关节软骨层变薄,骨皮质松解,骨小梁稀疏、排列紊乱等骨质疏松和骨关节炎病变表现;卵巢切除+强驱赶组移行层受损严重,炎性细胞浸润,毛细血管侵入钙化层和潮线;Mankin评分显示各模型组出现不同程度的骨关节炎病变表现;三组模型大鼠骨密度较假手术对照组大鼠均明显下降(P<0.05)。结论:单纯卵巢切除术可以用于骨性关节炎合并骨质疏松症动物模型的建立。

利用慢病毒载体观察microRNA-194对人骨肉瘤细胞系U2-OS生物学特性的影响

目的:通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为探索microRNA-194作为骨肉瘤生物治疗的新靶点提供理论和实验依据。方法:PCR扩增pri-miR-194及miR-194-5成熟体,克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染大肠杆菌感受态细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS。进行MTT,流式,平板克隆等试验。结果:1.重组慢病毒表达质粒构建正确,过表达及抑制过表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml;2.microRNA-194过表达的人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞增殖速度,凋亡率及细胞周期相较于其它实验组都有明显变化(P<0.01)。结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制过表达慢病毒表达载体;miR-194的表达水平对U2-OS细胞的增殖和凋亡造成显著影响。microRNA-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点,但该基因对骨肉瘤发生发展的作用及其机制尚待进一步研究。

影响骨肉瘤治疗预后效果的临床因素的研究进展

骨肉瘤是最常见的骨的原发性恶性肿瘤,常常好发于15-19岁。目前治疗上已经有了很大的进步,其最有效的治疗方案包括新辅助加上局部控制。但不幸的是,其治疗效果仍然非常低。因此在选择不同的治疗方式前需要对患者的预后进行严谨和科学的预测和判断,从而选择最佳的治疗方案。传统意义上影响骨肉瘤治疗预后效果的因素主要包括以下几点:年龄,性别,肿瘤大小,位置,分期和耐药性等。但是这些因素有着太多的测量和衡量方法,在不同的研究中进行统一标准下的比较是很难的。通常来讲,利用转移,耐药性等因素来进行预后的判断尽管能达到较高的准确性,但已经往往处于疾病的后期,对疾病治疗本身的意义不大。因此,需要去寻找新的,能够在早期对于预后进行判断,能够于早期进行准确的诊断从而进行早期治疗的方法。本文从位置,大小,年龄,分期,肿瘤的复发或转移,病理性骨折,手术和化学治疗等方面对骨肉瘤的预后及影响因素进行综述。

人工腰椎间盘置换研究应用进展

椎间盘病变是脊柱外科的常见疾病,是成年人疼痛和致残的常见原因,常常给人带来沉重的肉体和经济负担。经过长时间的发展与脊柱外科手术的进步,常规手术治疗在临床上虽然取得了一定的疗效,但是没有保留脊柱的生理运动功能,对临近阶段的椎间盘的退变起到促进作用,并且腰椎运动节段的融合加快了邻近节段椎间盘和小关节的退变。腰椎独特的解剖学特点和生物力学的研究及不同材质和特点的人工椎间盘材料的发展使人工椎间盘手术成为可能。与常规手术方式相比,人工椎间盘假体设计与人生理的解剖结构更加吻合。术后可以保持瞬时和长期的稳定性,从而对邻近的椎间盘的退变起到抑制作用。取得了较好的疗效。人工椎间盘置换术作为治疗腰椎间盘除腰椎融合之外的另一合理选择,目的是使退变导致的疼痛可以稳定长期缓解,并重建椎间隙高度以保护神经,从而避免晚期关节突关节及邻近节段的病变,恢复脊柱的运动学和载荷特性。目前人工腰椎间盘有了长远的发展,适应症不断扩大,但仍有较多限制。期待在将来能够找出更加符合人体生物力学特点的材料和设计,使之成为一种更为有效的治疗腰椎疾病的治疗方式。现就人工椎间盘的类型、疗效、适应证、禁忌证以及术后并发症等方面予以综述。